学术投稿

荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

江小工;徐兵;许文娟;李冰

关键词:聚合酶链反应, 基因重排, 标准曲线, 质粒
摘要:目的:构建荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础.方法:对TCR VγI-¨基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针.提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒.结果:重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明TCRVγI-Jγ基因已成功克隆.以100~10-5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,Ct值分别为21.08、24.34、27.53、30.58和33.25.统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数为0.998.结论:所构建的TCR VγI-Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好,准确可靠,利于统一标准.
实用医学杂志相关文献
  • 氯诺昔康复合小剂量氯胺酮用于术后病人自控镇痛

    目的:比较单纯氯诺昔康、氯诺昔康联合氯胺酮术后静脉自控镇痛的临床效应及安全性.方法:选择ASAⅠ~Ⅱ级行上腹部手术后患者90例,随机分为3组.L组为单纯氯诺昔康40 mg,LKⅠ组为氯诺昔康40 mg+氯胺酮100 mg,LKⅡ组为氯诺昔康40 mg+氯胺酮150 mg,各组加生理盐水稀释至120 mL,病人自控静脉镇痛(PCIA)负荷剂量各组均为氯诺昔康4 mg,持续输注速度为36μL·kg-1·h-1,记录术后4、12、24、48 h的静息镇痛评分,及总体镇痛效果评价,观察头晕、恶心呕吐、尿潴留、幻觉的发生情况.结果:单纯氯诺昔康组的镇痛总体评价明显差于加氯胺酮组,静息镇痛评分(VAS)显著高于加氯胺酮组(P<0.01),LKⅠ和LKⅡ组之间镇痛总体评价和VAS评分无明显差别(P>0.05),3组之间并发症没有明显差别,3组中均无幻觉发生.结论:单纯氯诺昔康上腹部手术PCIA镇痛较差,联合小剂量氯胺酮能明显改善镇痛效果,氯诺昔康与40~60μg·kg-1·h-1剂量的氯胺酮联用镇痛效果好,副作用未明显增加.

    作者:邱卫东;邱翰忠;余前华;肖庆华;杨海武 刊期: 2004年第02期

  • 人巨细胞病毒先天性感染的研究现状

    人巨细胞病毒(human cytomegolovirus,HCMV)属于疱疹病毒一类,是导致胎儿先天性感染常见的病原体[1].据统计,在所有活产儿中感染率为0.5%~2.5%.约10%的感染儿出生时有临床症状,如小头畸形、脑水肿、颅内或腹腔内钙化[1,2].其余90%出生时虽无临床症状,但10%~15%将会产生后遗症,包括听力障碍、智力发育迟缓等[3].尽管近年来先天性CMV感染的诊断方法有较大进展,但仍缺乏安全有效的治疗和预防措施,对于终止妊娠的指标仍有争论.

    作者:闻良珍 刊期: 2004年第02期

  • 羊水栓塞

    1羊水栓塞定义由于羊水物质进入母体血循环引起的一系列严重症状的综合征.典型的表现以突然发作的低血压、低氧血症及凝血功能障碍为主.

    作者:黄醒华 刊期: 2004年第02期

  • HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端真核表达载体的构建及表达

    目的:将HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端进行重组,构建真核表达载体,建立HPV16 E6阳性细胞株,终制备抗宫颈癌的DNA疫苗.方法:用分子重组技术,设计相应的酶切位点,直接将HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端进行尾首连接,使位于同一个阅读框架.以pCDNA3.1(+)为载体,构建真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N.用电穿孔的方法转染HeLa细胞,细胞免疫化学及Western blot鉴定转化细胞中HPV16 E6的表达.结果:正确构建了真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N,在转化细胞中检测到了HPV16 E6的表达.结论:成功构建了真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N,建立了稳定表达HPV16 E6的HeLa细胞株.

    作者:徐波;肖伟秋;林红浪;卞度宏 刊期: 2004年第02期

  • 复方丹参加高压氧治疗新生儿红细胞增多症-高粘滞度综合征45例疗效观察

    新生儿红细胞增多症-高粘滞度综合征是新生儿期常见的问题,症状为非特异性,累及各个器官,其严重程度亦各异,影响愈后.目前治疗上一般采用常规稀释治疗和换血治疗,但常规稀释治疗疗效欠佳,换血治疗因条件所限难于开展,为了寻求简单而有效方法,我科在2000年8月至2003年8月采用了复方丹参加高压氧治疗45例,并予低分子右旋糖酐常规稀释治疗40例作比较,现报告如下.

    作者:邵绮虹;钟秀华 刊期: 2004年第02期

  • 氨甲蝶呤宫腔镜下局部注药与全身静脉用药治疗异位妊娠的比较

    目的:对氨甲蝶呤宫腔镜下局部注药及全身静脉用药治疗早期输卵管妊娠的两种方法进行比较,探讨治疗早期输卵管妊娠的临床疗效、安全性和实用性.方法:对2001年1月至2003年9月早期输卵管妊娠患者84例随机分为2组,A组为宫腔镜下输卵管插管注射氨甲蝶呤(MTX),对于用药5~7 d血β-HCG值下降<50%者,再次插管注药1次.B组采用全身静脉注射MTX 4次,隔日用药,并用甲酰四氢叶酸解毒(CF).结果:A组临床治愈率为80%(32/40),治疗成功患者的平均住院费用为(3385.5±569)元,B组临床治愈率为88.6%(39/44),治疗成功患者的平均住院费用为(2708.5±296.6)元.两组比较临床治愈率差异无显著性(P>0.05),治疗成功患者的平均住院费用差异有显著性(P<0.05).两组副作用均较小.结论:A组和B组两种治疗方法均为安全、有效的保守治疗方式,后者较为经济、简便.

    作者:胡小玲;汪星星;徐小凤;范洁贞 刊期: 2004年第02期

  • 双侧肾透明细胞癌先后10年发生1例

    患者男,75岁.1993年6月因反复右肾绞痛,B超及CT检查示右肾实性占位性病变,1993年7月9日行右肾肿瘤根治术.术中见右肾上极被膜下一4 cm×4 cm×2 cm肿瘤.病理诊断:右肾上极被膜下透明细胞癌,与周围肾组织界限清楚,输尿管切缘未见癌,肾周围脂肪囊及输尿管周围未查见淋巴结.术后未行化疗、放疗治疗.术后多次复查腹部B超、CT、MRI检查均未见病灶复发或扩散.

    作者:刘骏;江亚文;张璧 刊期: 2004年第02期

  • 脓毒症新病生概念和新疗法--激活C蛋白的应用

    在妇产科领域中发生的脓毒症,病情凶险,如并发脏器功能衰竭者,40%~80%患者死亡[1].以往曾应用过人毒素抗体,抗肿瘤坏死因子抗体,可溶介质TNF受体,白介素浸体拮抗剂,血小板激活因子(PAF)拮抗剂,甾体类和前列腺素抑制剂等25种药物,通过封闭式方式来减少炎症过程中对宿主细胞的激活或介导变化,均告失败,原因是对其病生变化的认识不够[2-4].

    作者:赵杨;苏春宏 刊期: 2004年第02期

  • 先天性心脏病合并肺动脉高压程度的评估

    肺动脉高压是左向右分流型先心病常见且严重的并发症.肺小动脉病变早期,及时手术矫治心内畸形,可阻止病变继续发展,已有病变可于术后逐渐消退.如果发展到不可逆阶段,即使手术矫正了心内畸形,肺动脉高压仍持续存在并进一步发展,失去外科治疗的意义.因此,判断肺小动脉病变是否可逆是先心病合并肺动脉高压诊治中的关键问题.现对肺动脉高压程度的评估手段综述如下.

    作者:李斌;曹学文;张建华 刊期: 2004年第02期

  • 以牙痛为主要症状的变异型心绞痛1例

    患者男,29岁,就诊前4 d无明显诱因突然牙痛,以后每日晨6时牙痛发作,持续2 h左右缓解.先后服用去痛片等药物,症状未能缓解.此次就诊时牙痛发作伴下颌部放射痛,患者表情痛苦,牙龈无红肿,左下磨牙处疼痛,心率95次/min,律齐,各瓣膜听诊区未闻及杂音.心电图检查Ⅱ、Ⅲ、avF导联ST段抬高3~4mm,呈弓背型,T波高耸,Ⅰ、aVL、V6导联ST段水平下移,初步诊断为心肌梗死.静滴硝酸甘油、复方丹参,口服波依定后牙痛消失.病情平稳后冠状动脉造影显示冠状动脉主要分支无明显病变,且患者无冠心病危险因素,确诊为变异型心绞痛.

    作者:王洪涛 刊期: 2004年第02期

  • 氧化亚氮联合奥湿克应用于镇痛人工流产的临床研究

    目的:研究氧化亚氮(笑气)联合奥湿克应用于无痛人流术的疗效及对早孕妇女的影响.方法:将810例早孕妇女随机分为笑气组、奥湿克组、联合组和对照组.笑气组予笑气吸入镇痛麻醉;奥湿克组术前60 min口服奥湿克;联合组术前60 min口服奥湿克后予笑气吸入镇痛麻醉;对照组不用任何药物,仅予口头安慰.观察各组扩张宫颈时疼痛情况,能否通过6号吸管,吸刮宫腔时疼痛情况,术前术后血压、心率、呼吸与血氧饱和度,出血量变化及有无不良反应.结果:笑气组和联合组扩张宫颈与吸刮宫腔时镇痛效果显著,联合组效果佳.除联合组和笑气组在吸刮宫腔时镇痛效果比较无差异(P>0.05)外,它们之间及和对照组间差异显著(P<0.05);前3组6号吸管通过率高,笑气组和联合组对呼吸循环系统影响甚微.对照组扩张宫颈与吸刮宫腔时疼痛均明显,6号吸管通过率低,对呼吸循环系统影响较大.结论:笑气联合奥湿克用于人流镇痛效果确切,术中病人安静、合作,不良反应少,苏醒快,且便于手术操作,是一种理想的人流镇痛方法.

    作者:张宏;徐宏里;胡小良;杨熠;黄英群;蔡月英 刊期: 2004年第02期

  • 早产儿预防性应用肺表面活性物质的疗效观察

    目的:探讨对于肺透明膜病(HMD)发病危险性高的早产儿预防性应用肺表面活性物质的疗效.方法:治疗组预防性应用肺表面活性物质(PS),对照组待确诊HMD后使用PS,比较两组的重症HMD(三、四级)发病率、机械通气概率、脑室内出血(IVH)发生率、死亡率,并进行统计学分析.结果:两组重症HMD发病率、机械通气、IVH发生率比较,P<0.01,差异均有显著意义.结论:HMD高危发生儿预防性应用PS的疗效肯定,值得临床推广.

    作者:唐建平;陈东晓;郑莉;郭铁军 刊期: 2004年第02期

  • 脑外伤后脑积水诊治28例

    目的:回顾分析脑外伤后脑积水的诊治经验.方法:统计本院6年来收治脑外伤后脑积水患者28例,分析其发病机制、临床特征及治疗效果.结果:急性型脑积水3例,以梗阻性脑积水为主,慢性型脑积水25例,以交通性脑积水为主,均依据头颅CT确诊.全部行侧脑室-腹腔分流术(V-P分流术),26例显效,2例失败.结论:脑外伤后脑积水是脑外伤后可诊治的并发症之一,掌握特征,依据头颅CT影像行V-P分流术可收到满意效果.

    作者:石巧玲;黄性敏;杨锋 刊期: 2004年第02期

  • RANKL/OPG体系与骨髓瘤骨病

    骨髓瘤骨病(MBD)是多发性骨髓瘤(MM)的显著特点,包括骨质溶解、病理性骨折、高钙血症.产生的主要原因是破骨细胞(OC)的大量生成和激活,导致骨的再吸收增加.人骨髓瘤细胞培养可以产生几种破骨细胞刺激因子,如IL-1β、PTHrP、TNFα、胰岛素生长因子结合蛋白4等,但在活体实验中,没有一种可以导致骨的破坏.RANKL是近发现的一个破骨细胞刺激因子,它从属于TNF配体家族,于1997年由Anderson等[1]发现,由美国骨矿协会命名.OPG是其天然抑制剂[3],下面就此体系的结构分布、基本功能及在MBD中的作用进行综述.

    作者:李世辉;魏影非;任丽丽;王素云 刊期: 2004年第02期

  • 系统性红斑狼疮血清同型半胱氨酸检测的临床意义

    目的:探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)检测对系统性红斑狼疮(SLE)患者的临床意义.方法:应用荧光偏振免疫分析法(FPIA)测定68例SLE患者和40例正常人的血清Hcy水平,并与常用实验室指标ANA、抗ds-DNA、抗DNP作比较.结果:SLE患者血清Hcy水平为(17.17±4.05)μmol/L,活动期SLE组血清Hcy水平为(18.64±3.63)μmol/L,缓解期SLE组血清Hcy水平为(16.45±4.60)μmol/L,分别与正常对照组的(10.12±3.15)μmol/L相比较差异均有极显著性(P<0.01),活动期与缓解期血清Hcy水平相比较差异有显著性(P<0.05);SLE患者在ANA阳性组血清Hcy水平(17.36±4.03)μmol/L较ANA阴性组(12.99±1.94)μmol/L有极显著增高(P<0.01);在抗ds-DNA阳性组血清Hcy水平(18.38±3.60)μmol/L较阴性组(16.29±4.61)μmol/L差异有显著性(P<0.05);抗DNP阳性组(18.10±3.04)μmol/L与阴性组(16.28±4.39)μmol/L血清Hcy水平比较差异有显著性(P<0.05).结论:血清Hcy水平在SLE患者中明显升高,提示Hcy检测对SLE有临床意义.

    作者:曾智杰;刘敏;王松子;俞纯山 刊期: 2004年第02期

  • 小儿溶血尿毒综合征临床与治疗分析

    目的:探讨小儿溶血尿毒综合征(HUS)的临床特征、治疗方法.方法:回顾性分析18例小儿HUS的临床特征、治疗方法并随访观察其预后.结果:腹泻后HUS(D+HUS)占同期收治的HUS的44.4%(8/18),无腹泻HUS(D-HUS)占55.6%(10/18).D+HUS组婴幼儿占75%,病前均有消化道表现;5例腹膜透析;急性期存活6例,放弃1例,死亡1例,1例复发后进展至终末期肾病(ESRD),治愈4例.D-HUS组50%为学龄儿童,无前驱腹泻史,有家族史1例;3例腹膜透析,2例血液透析,2例血浆置换;急性期存活9例,死亡1例;复发3例中放弃治疗2例,治愈1例;1例2年后进入ESRD,余4例痊愈.结论:小儿D-HUS较之D+HUS预后差、复发率高,可有家族史.早期透析治疗是降低死亡率的关键,血浆置换对治疗D-HUS有一定疗效.

    作者:庄捷秋 刊期: 2004年第02期

  • 微创手术治疗子宫良性病变

    目的:寻找操作简单、安全、效果好且并发症少的手术方法治疗子宫良性疾病.方法:采用腹腔镜、宫腔镜和妇科多功能射频治疗仪(简称自凝刀)综合利用微创外科手术技术治疗子宫良性疾病278例.结果:自凝刀治疗子宫肌瘤的一次性治疗有效率达97.56%,治愈率达80.49%;子宫腺肌瘤有效率达83.33%,治愈率达66.67%;功血的有效率达100%,治愈率达92.86%.腹腔镜治疗子宫肌瘤治愈率达100%.宫腔镜治疗子宫黏膜下肌瘤和子宫内膜息肉的治愈率达100%.结论:腹腔镜、宫腔镜、妇科多功能自凝刀具有创伤小、对机体影响小、住院时间短、康复快、可重复性等优点,根据病变的性质、症状、部位、程度、病人的要求选择不同的微创手术方式,既保留了子宫又达到治疗目的,同时避免了子宫切除或长期药物治疗对妇女身心健康的影响,是值得推广应用的手术方法.

    作者:胡满和;隗伏冰;张咏梅;周玉梅;叶玲;赖文瑶;郭洁斐;刘佩瑜 刊期: 2004年第02期

  • 右下肺鳞状细胞癌误诊为支气管扩张1例

    患者男,汉族,62岁.因反复咳嗽、咳痰伴咯血及气促20 d来我院就诊.门诊行血常规示:WBC 12.7×109/L、N0.82、L 0.27,血沉28 mm/h,尿粪常规正常.胸部CT检查提示右下肺支气管扩张并感染.查体:右下肺呼吸音粗,可闻及湿罗音.

    作者:单文俊;施楠;王建民;张旭;张乐峰 刊期: 2004年第02期

  • 牙周病的正畸治疗

    目的:探讨正畸治疗对牙周病的治疗作用.方法:通过对28例患有牙周病的错(牙合)畸形患者采取正畸及牙周联合治疗并对患牙牙周、牙槽骨情况进行对比观察以了解正畸治疗对患有牙周病的错(牙合)畸形患者的治疗作用.探讨治疗成功的关键因素.结果:28例患者的错(牙合)畸形得到矫正达到个别正常(牙合).矫治结束时牙周情况较矫治前明显改善,治疗时间18~30个月.结论:口腔正畸治疗可去除不利因素、改善患者的牙周情况.

    作者:黄妙琼;冯航 刊期: 2004年第02期

  • 综合性治疗面神经炎102例

    我院自1986年至2003年3月以来,对102例而神经炎采用综合性治疗并随访性门诊治疗,效果满意,现报告如下.1临床资料1.1一般情况102例中,男性54例,女性48例,年龄9~62岁,平均32.7岁,首次发病96例,复发6例,病程均为3个月以内.

    作者:周同;董长龙 刊期: 2004年第02期

实用医学杂志

实用医学杂志

主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所