荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

江小工；徐兵；许文娟；李冰

关键词：聚合酶链反应, 基因重排, 标准曲线, 质粒

摘要：目的:构建荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础.方法:对TCR VγI-¨基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针.提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒.结果:重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明TCRVγI-Jγ基因已成功克隆.以100～10-5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,Ct值分别为21.08、24.34、27.53、30.58和33.25.统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数为0.998.结论:所构建的TCR VγI-Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好,准确可靠,利于统一标准.

实用医学杂志相关文献

老年吸入性肺炎62例诊治探讨

目的:探讨老年吸入性肺炎的诊断、治疗及预防.方法:对1996年1月至2001年4月在本院住院期间出现吸入性肺炎的62例老年患者的临床特点进行回顾性分析.结果:老年吸入性肺炎多发生于体质差、咳嗽与吞因功能明显受损的患者,均有发热,69.4%的患者可咯黄痰,部分(38.7%)患者可突然出现气促、紫绀;82.3%患者纤支镜检查发现会厌、声门闭合功能差;小部分患者(9.7%)早期胸片可无明显渗出表现;需机械通气者34例(54.8%),好转、治愈50例,死亡12例(19.4%),其中出现急性呼吸窘迫综合征者(12例)死亡5例.结论:老年吸入性肺炎的临床表现无特异性,病死率高,治疗的关键是早期进行支气管肺泡灌洗,缺氧难纠正者及时机械通气治疗;重要的是对有误吸高危因素患者做好积极的预防措施.

作者：陈裕胜；林材元；苏伟；梁鸣刊期： 2004年第02期
鼻腔鼻窦少见恶性肿瘤30例临床分析

目的:探讨鼻腔鼻窦少见恶性肿瘤的临床诊断、治疗和预后.方法:回顾性分析1980～2000年收治的30例鼻腔鼻窦少见恶性肿瘤的临床资料.结果:2例未分化癌,1例生存9个月,1例生存12个月;腺癌4例,2例生存15个月,1例生存18个月,1例生存37个月;肉瘤5例,3年以上生存率40%(2/5);7例恶性黑色素瘤,3年以上生存率57%(4/7);12例恶性淋巴瘤,5年生存率41.7%(5/12).结论:鼻腔鼻窦少见恶性肿瘤误诊率高,治疗模式仍未确定,预后相对较差.

作者：杨秀英；刘明放刊期： 2004年第02期
RANKL/OPG体系与骨髓瘤骨病

骨髓瘤骨病(MBD)是多发性骨髓瘤(MM)的显著特点,包括骨质溶解、病理性骨折、高钙血症.产生的主要原因是破骨细胞(OC)的大量生成和激活,导致骨的再吸收增加.人骨髓瘤细胞培养可以产生几种破骨细胞刺激因子,如IL-1β、PTHrP、TNFα、胰岛素生长因子结合蛋白4等,但在活体实验中,没有一种可以导致骨的破坏.RANKL是近发现的一个破骨细胞刺激因子,它从属于TNF配体家族,于1997年由Anderson等[1]发现,由美国骨矿协会命名.OPG是其天然抑制剂[3],下面就此体系的结构分布、基本功能及在MBD中的作用进行综述.

作者：李世辉；魏影非；任丽丽；王素云刊期： 2004年第02期
女婴双侧腹股沟疝1例

病人女,4岁,双侧腹股沟可复性肿物1年入院.体检:双侧腹股沟梨形肿物,约鹅蛋大小,质软,哭闹时可降至大阴唇.平卧位可回纳入腹腔.外环口松弛,可容成人食指.咳嗽冲击实验(+).入院诊断:双侧腹股沟斜疝.

作者：刘锋；张宏刊期： 2004年第02期
宫腔镜电切术治疗慢性宫颈炎的临床观察

慢性宫颈炎是已婚妇女的常见病及多发病,目前的治疗方法有药物治疗及物理治疗,传统的物理治疗有激光、微波、远红外线凝结等.我院自2002年6月至2003年6月应用宫腔镜行宫颈锥切术治疗慢性宫颈炎,获得满意效果.现报道如下.

作者：夏丽梅刊期： 2004年第02期
子痫、先兆子痫患者脑循环自身调节及灌注的异常

子痫、先兆子痫仍是孕产妇死亡的主要原因之一,硫酸镁已公认为治疗先兆子痫及预防子痫、抽搐的有效经典药物,但仍有0.3%～4.3%的先兆子痫患者在应用了足量的硫酸镁治疗后,仍有子痫的发生[1,2],其原因可能与脑循环自身调节及灌注异常有关.

作者：周郅隆刊期： 2004年第02期
支原体肺炎23例诊断治疗体会

小儿肺炎在儿科发病率普遍较高,如果未找到明确病原,容易延误及时准确的治疗,将给患儿身体健康造成重大威胁,并给家庭经济造成较大损失.现将我科2002年收治的23例支原体肺炎病例的诊治体会总结如下.

作者：周金萍刊期： 2004年第02期
小儿溶血尿毒综合征临床与治疗分析

目的:探讨小儿溶血尿毒综合征(HUS)的临床特征、治疗方法.方法:回顾性分析18例小儿HUS的临床特征、治疗方法并随访观察其预后.结果:腹泻后HUS(D+HUS)占同期收治的HUS的44.4%(8/18),无腹泻HUS(D-HUS)占55.6%(10/18).D+HUS组婴幼儿占75%,病前均有消化道表现;5例腹膜透析;急性期存活6例,放弃1例,死亡1例,1例复发后进展至终末期肾病(ESRD),治愈4例.D-HUS组50%为学龄儿童,无前驱腹泻史,有家族史1例;3例腹膜透析,2例血液透析,2例血浆置换;急性期存活9例,死亡1例;复发3例中放弃治疗2例,治愈1例;1例2年后进入ESRD,余4例痊愈.结论:小儿D-HUS较之D+HUS预后差、复发率高,可有家族史.早期透析治疗是降低死亡率的关键,血浆置换对治疗D-HUS有一定疗效.

作者：庄捷秋刊期： 2004年第02期
牙周病的正畸治疗

目的:探讨正畸治疗对牙周病的治疗作用.方法:通过对28例患有牙周病的错(牙合)畸形患者采取正畸及牙周联合治疗并对患牙牙周、牙槽骨情况进行对比观察以了解正畸治疗对患有牙周病的错(牙合)畸形患者的治疗作用.探讨治疗成功的关键因素.结果:28例患者的错(牙合)畸形得到矫正达到个别正常(牙合).矫治结束时牙周情况较矫治前明显改善,治疗时间18～30个月.结论:口腔正畸治疗可去除不利因素、改善患者的牙周情况.

作者：黄妙琼；冯航刊期： 2004年第02期
早产儿预防性应用肺表面活性物质的疗效观察

目的:探讨对于肺透明膜病(HMD)发病危险性高的早产儿预防性应用肺表面活性物质的疗效.方法:治疗组预防性应用肺表面活性物质(PS),对照组待确诊HMD后使用PS,比较两组的重症HMD(三、四级)发病率、机械通气概率、脑室内出血(IVH)发生率、死亡率,并进行统计学分析.结果:两组重症HMD发病率、机械通气、IVH发生率比较,P＜0.01,差异均有显著意义.结论:HMD高危发生儿预防性应用PS的疗效肯定,值得临床推广.

作者：唐建平；陈东晓；郑莉；郭铁军刊期： 2004年第02期
脑外伤后脑积水诊治28例

目的:回顾分析脑外伤后脑积水的诊治经验.方法:统计本院6年来收治脑外伤后脑积水患者28例,分析其发病机制、临床特征及治疗效果.结果:急性型脑积水3例,以梗阻性脑积水为主,慢性型脑积水25例,以交通性脑积水为主,均依据头颅CT确诊.全部行侧脑室-腹腔分流术(V-P分流术),26例显效,2例失败.结论:脑外伤后脑积水是脑外伤后可诊治的并发症之一,掌握特征,依据头颅CT影像行V-P分流术可收到满意效果.

作者：石巧玲；黄性敏；杨锋刊期： 2004年第02期
自发性肿瘤溶解综合征的诊断和治疗

目的:探讨自发性肿瘤溶解综合征(STLS)的发病情况、诊断、治疗及预后.方法:报道本科1例STLS患者的诊断和治疗情况,并结合文献进行讨论.结果:STLS并非少见,其危险因素有:肿瘤负荷重、血尿酸水平高、血LDH水平高、存在脱水和酸性尿等.若能及时诊断、合理治疗,STLS本身常能治愈.结论:应提高对STLS的认识,及时发现、及时治疗,以提高其预后率.

作者：马大庆；吴红华；杜红卫刊期： 2004年第02期
肺含铁血黄素沉着症3例误诊分析

特发性肺含铁血黄素沉着症(idiopathic pulmonary hemosiderosis,IPH)是一种肺泡毛细血管出血性疾病.临床上以反复咳嗽、咯血或咳血丝痰为特征.反复的肺泡出血,含铁血黄素沉积在肺泡间质,导致广泛的肺间质纤维化,影响肺循环,引起肺动脉高压、肺心病和呼吸循环衰竭.临床上常以贫血为首发症状而造成误诊或延误诊断.现将本院收治的3例IPH报告如下.

作者：李静；岑丹阳；麦贤弟刊期： 2004年第02期
人巨细胞病毒先天性感染的研究现状

人巨细胞病毒(human cytomegolovirus,HCMV)属于疱疹病毒一类,是导致胎儿先天性感染常见的病原体[1].据统计,在所有活产儿中感染率为0.5%～2.5%.约10%的感染儿出生时有临床症状,如小头畸形、脑水肿、颅内或腹腔内钙化[1,2].其余90%出生时虽无临床症状,但10%～15%将会产生后遗症,包括听力障碍、智力发育迟缓等[3].尽管近年来先天性CMV感染的诊断方法有较大进展,但仍缺乏安全有效的治疗和预防措施,对于终止妊娠的指标仍有争论.

作者：闻良珍刊期： 2004年第02期
交锁髓内钉治疗股骨干骨折53例

目的:探讨交锁髓内钉治疗股骨骨折的临床效果.方法:回顾性分析53例股骨骨折应用带锁髓内钉治疗的结果,其中男38例,女15例,平均年龄31岁.闭合性骨折35例,开放性骨折15例,陈旧性骨折3例.开放性骨折15例采用不扩髓固定,陈旧性骨折3例和闭合性骨折35例扩髓固定.结果:平均随访1年2个月,骨折全部愈合,无延迟愈合或不愈合;无感染病例;1例发生远端锁定螺钉折断.全部患者术后邻近关节的功能均恢复正常.结论:应用带锁髓内钉治疗股骨骨折具有稳定性高,疗效确切和并发症少等优点,是一种治疗股骨干骨折的较理想方法.

作者：程继武；肖德明刊期： 2004年第02期
大便后阴囊严重血肿1例

患者男,36岁,排便后阴囊肿大2 h入院.患者排便后出现左侧阴囊进行性肿大,伴坠胀,无其他不适.查体:左侧阴囊及左腹股沟下1/3皮肤严重青紫,左侧阴囊约12cm×10cm大小,左侧睾丸触诊不满意,全腹无压痛.血常规:Hb 126g/L,WBC 7.8×109/L,N 0.74,PLT 156×109/L,小便常规无异常.彩超示:右侧睾丸3.4 cm×2.0 cm×2.5 cm,左侧睾丸3.0 cm×2.0 cm×1.9 cm,左侧阴囊内见大片强回声此处3.4 cm包绕左侧睾丸,双侧睾丸血供丰富.入院后给以卧床休息、托起阴囊、冰敷、加压包扎、用止血药、预防感染治疗10 d基本痊愈出院.

作者：姜道彬刊期： 2004年第02期
综合性治疗面神经炎102例

我院自1986年至2003年3月以来,对102例而神经炎采用综合性治疗并随访性门诊治疗,效果满意,现报告如下.1临床资料1.1一般情况102例中,男性54例,女性48例,年龄9～62岁,平均32.7岁,首次发病96例,复发6例,病程均为3个月以内.

作者：周同；董长龙刊期： 2004年第02期
HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端真核表达载体的构建及表达

目的:将HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端进行重组,构建真核表达载体,建立HPV16 E6阳性细胞株,终制备抗宫颈癌的DNA疫苗.方法:用分子重组技术,设计相应的酶切位点,直接将HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端进行尾首连接,使位于同一个阅读框架.以pCDNA3.1(+)为载体,构建真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N.用电穿孔的方法转染HeLa细胞,细胞免疫化学及Western blot鉴定转化细胞中HPV16 E6的表达.结果:正确构建了真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N,在转化细胞中检测到了HPV16 E6的表达.结论:成功构建了真核表达载体pCDNA3.1/E6-HSP70N,建立了稳定表达HPV16 E6的HeLa细胞株.

作者：徐波；肖伟秋；林红浪；卞度宏刊期： 2004年第02期
肺栓塞12例误诊分析

肺栓塞是急性肺部疾患主要的致死原因之一.在国外,肺血栓栓塞(PTE)在临床死亡原因中居第三位.据北京协和医院病理资料PTE的尸检检出率为3%,中国医学科学院心血管病研究所于心肺血管尸检中,检出率为11%,因此东方人PTE的发病可能较低,但近年发病率也有进行性增多的趋势.能及时做出诊断及治疗的PTE病人只有7%死亡,而没有被诊断的PTE病人60%死亡,其中33%在发病后第1小时迅速死亡[1].由此可见,早期正确诊断PTE对提高其抢救成功率有重要意义.现将我院12例肺栓塞误诊为其他疾病的教训总结如下.

作者：卢锦莲刊期： 2004年第02期
子宫肌瘤合并妊娠198例分析

目的:探讨子宫肌瘤合并妊娠对妊娠的影响及其处理方法.方法:通过与同期198例正常妊娠对照研究,以观察两组的妊娠结局.结果:子宫肌瘤合并妊娠时,与对照组相比,易引起孕妇流产、早产、难产、足月率降低,剖宫产率增加及产后出血等(P＜0.05或＜0.01).结论:孕期B超检查能够帮助早期诊断子宫肌瘤和因肌瘤出现的不同临床症状,及时处理很重要.

作者：陈青；莫凤莲；江艳萍刊期： 2004年第02期