学术投稿

RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用

许丽;杨应周;谭卫国;林世平;胡志上;吴清芳;张玉华

关键词:分枝杆菌, 非典型性, 结核杆菌, RAPD, 分型
摘要:目的探讨随机扩增多态性DNA (Randomly amplified polymorphic DNA, RAPD)技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值. 方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的条件,并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA,对比RAPD电泳条带特征. 结果以条带稳定、丰富、清晰为标准,确定引物1 RAPD佳反应条件为: 50μl反应体系中,含100ng模板DNA,2.5mmol/L MgCl2,2U DNA聚合酶,引物0.5μmol/L,dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol/L, 反应40个循环,每个循环为:94℃ 1min,36℃ 1min,72℃ 2min.所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰,各条带差异较明显. 结论 RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM.
中国热带医学杂志相关文献
  • 改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7

    目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7的快速方法. 方法根据GenBank公布O157:H7的rfbE保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5'端,建立改良分子信标实时PCR检测O157:H7的反应体系,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测. 结果共检测11种细菌,只有大肠杆菌O157:H7有荧光信号,其余10种全无荧光信号,且与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为64fg,菌液灵敏度为59cfu/ml或2cfu/PCR反应体系.应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157:H7均出现特异的荧光信号,无干扰.对89份食品样品进行检测,5份O157:H7实时PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2h.5份阳性样本,经传统方法培养,有3份检出大肠杆菌O157:H7. 结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于大肠杆菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.

    作者:贺连华;扈庆华;石晓路;郑琳琳;李庆阁;张佳峰;庄志雄;刘小立;张顺祥;王冰;吴平芳;刘涛 刊期: 2006年第05期

  • 减少日立全自动生化仪试剂死腔量浪费的方法

    近年来,随着医学科学技术的飞速发展,全自动生化分析仪在越来越多的医院得到广泛应用.从2005年7月1日起,大型仪器检查费用被大幅度下调,致使出现了有的检查项目维持保本经营,在这样的情况下节约开支、节省成本成为一个重要的环节,如何操作才能减少日立全自动生化仪试剂死腔量的浪费,我院检验科应用日立全自动生化仪已有多年,积累了一些经验,现介绍如下.

    作者:吕英 刊期: 2006年第05期

  • 医学女生亚健康的多因素研究

    目的探讨医学女生亚健康状态的现况及其影响因素. 方法采用统一的调查问卷对493名大学生进行现场问卷调查.调查内容包括个人一般情况、健康状况、网络成瘾情况.亚健康的确定采用康奈尔医学指数(CMI).用Logistic回归分析亚健康的影响因素. 结果医学女生亚健康发生率为42.5%.亚健康组不适应、抑郁、焦虑、敏感、紧张得分均比健康组高(P《0.05).学习压力大、上网时间长、缺乏体育锻炼、知心朋友少及网络成瘾是大学生亚健康的主要危险因素.另外,母亲学历低者亚健康发生率更高. 结论应通过健康教育、学校、家庭、社会的共同参与来干预亚健康的影响因素,促进医学女生的身心健康.

    作者:周玲玲 刊期: 2006年第05期

  • 1 100例支原体检验及药敏监测分析

    目的了解本地区泌尿生殖道支原体感染状况和药敏变化. 方法应用生物-梅里埃支原体 IST试剂盒,对泌尿生殖道有临床症状疑患支原体感染的患者采取标本进行支原体培养和药敏试验,并对检验结果进行分析. 结果 1 100例受检患者支原体培养阳性468株(份)(42.5%).其中解脲支原体(Uu)阳性266株(份)24.2%(266/1 100),人型支原体(Mh)阳性107株(份)9.7%(107/1 100),Uu+Mh混合阳性 95株(份)8.6%(95/1 100).男、女患者的阳性率分别为 24.5%(66/269)和 48.4%(402/831) ,差异有极显著性(χ2=47.25,P《 0.001).支原体对药物敏感率较高的药物依次是原始霉素( 90.6%)、交沙霉素(76.9%)、强力霉素 (69.9%);耐药较高的是红霉素(59.0%)、四环素(36.0%). 结论对疑患支原体感染的患者应采取标本进行支原体和药敏检测,参考实验结果有目的规范地选择药物治疗.

    作者:梁沛杨;林绍华 刊期: 2006年第05期

  • 常州市疟疾镜检站现状调查

    目的了解常州市疟疾镜检站现状. 方法对常州二市五区所辖医院、卫生院的部分门诊疟疾镜检站进行调查. 结果全市各级门诊镜检站已步入正常运行,大部分化验员对镜检工作比较认真负责. 结论常州市疟疾发病率连续年控制在1/万以下,但疟疾传播快、易反复,且疟疾传染源、传播媒介依然存在,血片镜检疟原虫迄今为止仍是确诊疟疾可靠的方法,仍需进一步巩固镜检站和镜检队伍,提高检验人员的积极性.

    作者:谢轶青;冷瑞珍;吴民义 刊期: 2006年第05期

  • 糖尿病并急性脑卒中的相关临床特点分析

    目的观察2型糖尿病(T2DM)并急性脑卒中在相关人群中的发病情况及其临床特点. 方法回顾分析近4年住院的T2DM并急性脑卒中388例,其中脑出血组93例,脑梗死组295例,分别与同期住院的非糖尿病(DM)脑出血组及非DM脑梗死组做对照分析. 结果 T2DM并急性脑卒中占同期住院T2DM人群的12.0%,急性脑卒中人群的17.0%;T2DM并急性脑梗死占T2DM并急性脑卒中的76.0%.与非DM脑出血组相比,T2DM并脑出血组的大出血灶多,死亡率高,治愈率低(P《0.01);与非DM脑梗死组相比,T2DM并脑梗死组的大病灶、多发病灶、复发病灶、腔隙病灶多,死亡率高,治愈率低(P《0.01). 结论 T2DM并急性脑卒中以缺血性卒中为主,病情较严重,预后差,应积极防治.

    作者:王庆开;翁雪燕;郑地明;林凌;叶苗苗 刊期: 2006年第05期

  • 清香型蒸馏酒生产工艺中HACCP系统的应用

    目的为提高清香型蒸馏酒的卫生质量,探讨HACCP 体系在蒸馏酒生产过程中的应用效果. 方法选择河南省宝丰酒业集团作为研究对象,在蒸馏酒GMP基础上,按照国际食品法典委员会发布的《HACCP 系统及其应用导则》,通过现场调查,了解加工工艺,对清香型宝丰酒的整个清蒸二次清工艺过程进行危害分析. 结果确定了生产清香型宝丰酒的4个关键控制点:①原料筛选;②辅料清蒸;③入缸发酵;④蒸馏;并对每一关键点进行分析,确定了相应的关键限值;建立了监控程序、纠偏措施、文件记录档案和验证程序. 结论本研究建立的HACCP 体系合理有效,能够充分保障清香型宝丰酒的卫生、安全.

    作者:余平;侯激流;申建业;宋付安;徐贵发 刊期: 2006年第05期

  • 湛江市2003~2005年乙型脑炎流行特征及控制效果分析

    目的调查湛江市流行性乙型脑炎(简称乙脑)的流行特征,探讨乙脑疫苗应急接种和纳入常规免疫对乙脑疫情的控制效果. 方法 2003年乙脑流行时对6月~10岁儿童采取突击应急接种方案,2004年起将乙脑疫苗纳入计划免疫常规接种,按程序8月龄,18~24月龄和6岁各接种1剂.并对2003~2005年乙脑疫情流行病学资料中2003年乙脑流行时的应急接种和2004年起的纳入计划免疫常规接种控制乙脑效果进行描述性分析. 结果湛江市2003~2005年共发生乙脑118例,发病率逐年下降.每年5~7月流行,5月下旬至6月上旬为发病高峰;年龄主要为10岁以下儿童,以4-6岁多,占总病例数的46.61%;地区分布为农村发病率高于城市. 结论乙脑疫苗应急接种及纳入计划免疫常规接种后,乙脑发病率逐年下降,显示应急接种和常规免疫对乙脑疫情的控制效果肯定.

    作者:何琼芬;陈治玲;陈轮;吴丽萍 刊期: 2006年第05期

  • 乙肝病毒基因分型与HBV-DNA水平及临床表现的研究

    目的探讨HBV各基因型与DNA水平及HBeAg关系,分析不同基因型引起不同的临床表现. 方法对108例HBV-DNA阳性患者进行基因分型、HBV-DNA定量检测、ELISA法检测HBeAg及肝功能检查后综合分析. 结果基因分型为B型29例,C型51例,混合型16例,D型4例和未分型8例;C型HBV-DNA水平和HBeAg阳性率分别为(6.87±1.55)log值和74.51%,明显高于B型的(5.32±1.04)log值和44.83%(P《0.01);C型发展为慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)和原发性肝细胞癌(HCC)分别为49.0%、17.6%、13.7%,明显高于B型的41.4%、6.9%和3.4%(P《0.05);乙型肝炎病人中C型ALT、AST、TBIL和γG水平及发病年龄等均高于B型(P《0.05). 结论广州地区HBV基因型以C型为主,B型次之.C型HBV-DNA水平显著高于B型,B基因型HBeAg阳性率较C基因型高.C型肝脏损害比B型严重.

    作者:区映研;杨海红;曾文铤;朱科伦;马佩球 刊期: 2006年第05期

  • 黄褐斑与甲状腺功能的关系探讨

    黄褐斑的发病机制尚未明确,一般多认为与内分泌失调、紫外线照射、遗传、药物与化妆品、氧自由基、微生物的影响、情绪以及其他慢性疾病等因素有关[1].

    作者:谢志杰;郑志昂;李毓阳 刊期: 2006年第05期

  • 术后患者做C-反应蛋白检测必要性的探讨

    目的讨论C-反应蛋白(CRP)对术后患者的临床应用. 方法用Orion Diagnostica透射比浊法检测200例术后患者血清中的CRP水平并观察其数值变化. 结果感染组和非感染组CRP差异无显著性(P》0.05).治疗前后比较,CRP在好转组治疗后明显减低,而恶化组治疗数值升高. 结论 CRP对术后患者感染诊断的特异性较差,但与炎症反应严重程度有一定关系,且对治疗效果及预后判断有一定指导意义.

    作者:黄秉廉 刊期: 2006年第05期

  • 2005年长沙市雨花区人群麻疹免疫水平监测分析

    目的了解长沙市雨花区人群麻疹抗体水平. 方法在辖区内随机抽取一个街(镇、乡),分别在2~5岁、6~8岁、12~15岁、30~39岁组人群各约30人,采手指血用ELISA法检测麻疹IgG抗体. 结果街道与乡镇人群麻疹抗体阳性率和GMT分别为84.00%和1:1002与76.47%和1:986(P》0.05);GMT水平以30~39组为高;麻疹疫苗预防阶段人群的GMT明显低于自然感染麻疹阶段的人群GMT(P《0.05). 结论雨花区人群麻疹抗体水平较低,未能形成免疫屏障,应及时进行免疫接种和补种.

    作者:邓婷;吴铁钢 刊期: 2006年第05期

  • 精浆中性粒细胞弹性蛋白酶检测的临床应用

    弹性蛋白酶是炎症过程中由分叶核中性粒细胞分泌的一种蛋白酶,其抑制剂结合物Ela/α1-PI被认为是男性隐匿性生殖道炎症标记物.应用酶联免疫分析技术检测精浆中的Ela/α1-PI,发现不育症组男性精液中的Ela/α1-PI水平明显高于有生育组.高水平的Ela/α1-PI与女性配偶输卵管损伤相关,抗生素治疗后,可以观察到Ela/α1-PI水平降低.但女性配偶输卵管损伤对抗生素治疗不敏感.除了诊断男性不育症之外,检测Ela/α1-PI还能帮助诊断前列腺及其他附性腺器官细菌性炎症.精浆Ela/α1-PI检测是一种易操作、可靠、定量的试验,可以用来诊断夫妇双方生殖道炎症及判断预后,而且,连续检测可以动态监测疗效.

    作者:魏小斌;白志明 刊期: 2006年第05期

  • 静脉炎的防治进展

    静脉输液是药物摄入的重要途径,静脉炎则是静脉输液治疗中常见的并发症之一.静脉炎多是由于输入浓度较高、刺激性较强的药物,或静脉内留置刺激性较大的塑料管时间太长,而引起局部静脉壁的化学炎性反应,也可以是同一根静脉反复多次穿刺造成的静脉感染.近年来,临床广大医务工作者对此作了大量研究,本文结合相关文献就静脉炎的预防及治疗作如下综述.

    作者:孙蕾蕾;何艳萍;杨莉;魏新 刊期: 2006年第05期

  • 应用纳络酮治疗中度及重度新生儿缺氧缺血性脑病

    纳络酮作为阿片受体特异性拮抗剂,目前己逐渐用于新生儿缺氧缺血性脑病的治疗.我们近3年应用纳络酮治疗中、重度新生儿缺氧缺血性脑病取得一定疗效,现报告如下.

    作者:刘志芳;张丽华;邓文华 刊期: 2006年第05期

  • 纤维连接蛋白检测在肝病中的临床意义

    目的探讨纤维连接蛋白(FN)在肝病中的意义. 方法采用免疫比浊法检测220例各种肝病患者血清FN水平,并与其他肝功能指标进行比较. 结果急性肝炎与轻/中度慢性肝炎之间差异无显著性(P》0.05);急性肝炎与重度慢性肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎之间差异有显著性(P《0.05、P《0.001、P《0.001);与血清白蛋白(ALB)、前白蛋白(PRE-A)、凝血酶原活动度(PTA)呈正相关(P《0.001). 结论血清FN水平在一定程度上能反映肝脏损伤的程度,检测血清FN对估计重度慢性肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎患者病情、预后、转归均有一定意义.

    作者:杨霞;许继涛;蒋立会;张占卿 刊期: 2006年第05期

  • 丹东市二次供水卫生现状调查

    目的调查丹东市二次供水水池(箱)的卫生现状,为制定改善对策提质依据. 方法通过对市区72个经清洗的水池(箱)水质及清洗前后两个水箱水质作五项指标检验,统计出各项指标、超标率. 结果余氯、浑浊度的超标率较高,分别为34.7%和20.8%;清洗后水箱的水质有明显改善. 结论对二次供水存在的问题及改善对策进行探讨.

    作者:贾庆毅;王旭 刊期: 2006年第05期

  • 原发性肺组织胞浆菌病的临床X线诊断与鉴别

    目的探讨原发性肺组织胞浆菌病的X线表现及鉴别诊断. 方法回顾性分析9例经临床治疗、实验室等检查确诊为原发性肺组织胞浆菌病的X线表现. 结果 9例原发性肺组织胞浆菌病人中,1例为淋巴结肿大型,3例为结节型,5例为粟粒播散型.其中1例合并有肺门阴影增大、增宽、增浓,肺门淋巴结呈蛋壳样钙化;其中3例合并有胸膜增厚,其中1例合并有叶间胸膜增厚. 结论原发性肺组织胞浆菌病活动期的X线表现特异性不强,须充分结合临床症状才能提出诊断,愈合期的X线表现以钙化为主.

    作者:王辉勇 刊期: 2006年第05期

  • RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用

    目的探讨随机扩增多态性DNA (Randomly amplified polymorphic DNA, RAPD)技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值. 方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的条件,并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA,对比RAPD电泳条带特征. 结果以条带稳定、丰富、清晰为标准,确定引物1 RAPD佳反应条件为: 50μl反应体系中,含100ng模板DNA,2.5mmol/L MgCl2,2U DNA聚合酶,引物0.5μmol/L,dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol/L, 反应40个循环,每个循环为:94℃ 1min,36℃ 1min,72℃ 2min.所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰,各条带差异较明显. 结论 RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM.

    作者:许丽;杨应周;谭卫国;林世平;胡志上;吴清芳;张玉华 刊期: 2006年第05期

  • 降钙素治疗绝经后骨质疏松症疗效观察

    目的探讨降钙素治疗绝经后骨质疏松症的疗效. 方法治疗组31例、对照组29例,均使用钙尔奇D 600mg,中药作基础治疗,治疗组加用密盖息肌注. 结果治疗组治疗12周镇痛有效率88%,24周为96%. 结论降钙素治疗骨质疏松症不仅能有效缓解骨痛,还能提高骨质量,降低骨质疏松性骨折发生率.

    作者:杨映娟;傅若珊;林宜生 刊期: 2006年第05期

中国热带医学杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会;海南疾病预防控制中心