学术投稿

大鼠表皮基底层干细胞体外分离与培养

邓先见;姚波;李力;徐苗苗;顾玮;杨策;蒋建新

关键词:成体干细胞, 细胞培养技术, 表皮干细胞, 基底层干细胞
摘要:目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤,采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞,将慢黏附细胞作为对照组细胞,均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素和角蛋白19(K19)双重荧光染色鉴定细胞表型,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力。结果分离培养的细胞为多角形、呈铺路石样排列,倍增时间约为24 h ,细胞形态和生长规律符合基底层干细胞的特征。免疫荧光鉴定显示细胞共表达β1-整合素和K19,基底层干细胞克隆形成能力显著强于对照细胞。结论两步消化联合Ⅳ型胶原差速贴壁法获取基底层干细胞简易可行,培养的细胞活力好、表型可靠。
重庆医学杂志相关文献
  • 重庆市九龙坡区民营医院患者满意度调查报告

    民营医院近年来发展迅速,遍布中国大陆及港澳台地区。然而,民营医院是否真如其宣传那般美好,以及患者是否愿意选择民营医院就医,对民营医院的各项服务是否满意,既关系到民营医院的发展前景,又关系到人民的身体健康和生命安全,影响社会和谐和稳定[1-2]。所以,关注民营医院的发展意义重大[3-5]。本文拟就患者对于民营医院的服务满意度的问题进行调查研究。具体采用问卷调查法,在重庆市九龙坡区近20家民营医院汇总随机抽取5家,对就诊的患者进行访谈,记录结果,后将问卷汇总,采用百分比法对数据进行统计。

    作者:张馨月;雷寒;刘德均 刊期: 2013年第21期

  • 38例涎腺基底细胞腺瘤临床病理学观察

    目的分析和总结涎腺基底细胞腺瘤的临床和病理学特征,以提高对基底细胞腺瘤的认识和诊断水平。方法收集该院38例基底细胞腺瘤的临床和病理资料,对标本进行病理形态学观察,免疫组织化学采用Envision法染色。并对治疗和预后进行总结分析。结果患者发病年龄13~74岁,平均48岁,临床表现为无痛性腮腺区肿块,并且影像学检查发现腮腺区占位;38例基底细胞腺瘤中,12例为实性型,14例为梁状型,7例为管状型,5例为膜性型;随访其中30例患者,均未发现肿瘤复发、恶性变等。结论基底细胞腺瘤罕见,发病年龄较广,缺乏特征性的临床表现,手术切除效果好,预后好,终诊断及分型依靠 HE形态和免疫组织化学的表达。

    作者:唐坚清;张声;陈林莺 刊期: 2013年第21期

  • 2012年某医院临床病原菌分布及耐药监测性分析

    目的了解2012年该院患者送检血液、痰液、尿液等标本中分离出病原菌分布特点及耐药情况。方法收集2012年临床标本中分离的病原菌,采用全自动分析仪和API进行鉴定和药敏试验,采用WHONET5.6进行分析。结果临床分离的病原菌3454株中,革兰阳性菌占36%,革兰阴性菌占64%,专性厌氧菌占1%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率分别为33%,耐万古霉素肠球菌检出率为1.6%。在肠杆菌科细菌中,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的检出率分别为60.6%及35.8%。非发酵菌以鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌为主,耐药率高。结论医院感染的病原菌种类在不断增加;分离的病原菌耐药现象较普遍。持续做好细菌耐药监测工作,对指导临床合理使用抗菌药物有重要意义。

    作者:瞿渝佳;张秀瑜;王云英 刊期: 2013年第21期

  • 电针治疗对AD大鼠学习记忆能力及细胞周期蛋白P53、P21表达的影响

    目的观察电针(EA)对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及血浆中SOD、MDA 的含量,大脑 P53、P21表达的影响。方法选取正常SD大鼠36只,随机分成假手术组、模型组和EA组。EA组针刺“百会”、“太溪”、“足三里”穴治疗,通过Morris水迷宫检测大鼠的行为学改变、分光光度法观察大鼠血浆中SOD及MDA的水平;免疫荧光法观察大鼠大脑P53、P21的表达。结果与模型组比较:EA组逃避潜伏期缩短,在第三象限的活动时间延长,跨越原平台位置的次数增多,血浆SOD水平升高、MDA水平降低,大脑P53、P21的表达减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 EA能够改善Aβ1-42诱导的AD大鼠空间学习记忆能力,可能与提高SOD活性,降低MDA含量,下调P53,P21蛋白表达有关。

    作者:苏琦;徐德恩 刊期: 2013年第21期

  • 脂联素与老年性痴呆的研究进展

    老年性痴呆(A D )是一组由多种病因引起、发病机制复杂、多见于老年人群的慢性进行性脑变性疾病。临床上以进行性记忆衰退、精神和行为异常为主要表现。近年来的研究提示,糖代谢异常特别是2型糖尿病(T2DM )、脂代谢异常等与 AD发病密切相关,可能通过干扰胰岛素细胞信号转导通路等分子机制上调了淀粉样前体蛋白(A PP )的淀粉样代谢途径(β-分泌酶途径),导致β淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体异常增多和沉积,形成老年斑,进而启动Aβ的级联反应,如促进tau蛋白的异常磷酸化和神经原纤维缠结、氧化应激、线粒体损伤、神经元凋亡等。近期学者们对糖脂代谢异常与 AD的研究中发现脂联素(adiponectin)代谢异常是一个重要因素。本文就脂联素与AD的研究概况作简要综述。

    作者:刘悦(综述);晏勇(审校) 刊期: 2013年第21期

  • 阿司匹林抵抗在2型糖尿病患者心血管事件中的影响研究

    目的探讨阿司匹林抵抗(AR)在2型糖尿病(T2DM )患者心血管事件中的影响。方法收集该院2006年6月至2010年9月,确诊为T2DM的患者496例,连续4周给予口服阿司匹林100 mg/d ,用光比浊法检测血小板聚集率,将患者分为AR组、阿司匹林半抵抗(ASR)组与阿司匹林敏感(AS)组,分别比较临床生化指标之间的差异,随访1~4年后比较发生不良心血管事件的差异。结果发生AR的占总人数的11.69%;发生ASR的占总人数的37.90%。女性在AR组与ASR组中人数较多(67.48%);AR组与ASR组患者较AS组的餐前空腹血糖高,差异有统计学意义(P<0.05);AR组糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油均高于AS组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。3组间不良心血管事件发生率差异有统计学意义(P<0.05)。结论应对T2DM患者进行AR相关检测,推荐服用阿司匹林时应注意推荐的服用剂量,并且密切监视心血管事件的发生。

    作者:武刚;程璐 刊期: 2013年第21期

  • 小剂量轻比重腰麻-硬膜外联合麻醉在老年下肢骨折手术中的应用

    目的研究小剂量轻比重腰麻-硬膜外联合麻醉在老年下肢骨折中的应用效果。方法选取2012年1月至2012年10月在该院住院的下肢骨折老年患者50例,将其随机分为小剂量轻比重腰麻-硬膜外联合麻醉组(观察组)和连续硬膜外麻醉组(对照组),对比所用麻醉药物剂量、麻醉阻滞起效时间、麻醉阻滞完善时间。结果观察组所用麻醉药物剂量小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组麻醉阻滞起效的时间和麻醉阻滞完善的时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小剂量轻比重腰麻-硬膜外联合麻醉在老年患者下肢骨折手术中麻醉药物用量少,神经阻滞完善,镇痛效果确实,是一种比较安全、良好麻醉手段,值得推广。

    作者:赵卫兵;杨小春 刊期: 2013年第21期

  • 子宫颈扩张球囊用于足月妊娠促宫颈成熟和引产的临床评价

    目的评价子宫颈扩张球囊用于足月妊娠促宫颈成熟和引产的有效性和安全性。方法将132例妊娠足月、宫颈Bishop评分小于或等于6分的初产妇随机分为球囊组和缩宫素组,比较两组促宫颈成熟和引产的效果。结果球囊组促宫颈成熟的显效率和总有效率分别为91.04%和100.00%,缩宫素组为30.77%和73.85%,两组比较差异有统计学意义( P<0.05)。球囊组引产至临产的时间为(472.52±416.26)min ,临产至阴道分娩的时间为(247.68±156.34)min;缩宫素组分别为(654.24±562.36)min和(476.14±354.73)min ,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。剖宫产率、产后2 h出血量、胎儿和新生儿情况,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫颈扩张球囊用于足月妊娠促宫颈成熟和引产的效果明显优于缩宫素,是一种安全有效、使用便捷的引产方式。

    作者:柳怡;付稼虹 刊期: 2013年第21期

  • 孕期血脂参考值范围对妊娠糖尿病孕妇血脂评估的意义

    目的以妊娠期血脂特异性参考区间作为判断依据,对妊娠期糖尿病(GDM )患者及其胎儿脐血的血脂状态进行更为科学地评估。方法选取该院定期产前检查直至分娩的GDM患者81例设为GDM组,健康对照组86例,GDM 患者胎儿脐血65例及健康孕妇胎儿脐血47例。采用全自动生化分析仪检测总胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TRIG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、载脂蛋白A1(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白(a)[LP(a)]含量。分别采用本研究组建立的正常妊娠特异性血脂参考区间(PSR)及正常非孕参考区间(NPR)对GDM 患者血脂状态进行评估比较,并随访妊娠结局。结果与健康对照组相比,GDM组ApoA、HDL、LDL显著降低(P<0.05);GDM 脐血 HDL、LDL、LP(a)显著降低(P<0.05)。以妊娠特异性参考区间作为判断标准,低水平HDL的GDM 孕妇其子代新生儿体质量明显增高(P<0.05),高水平LDL的GDM子代出生体质量明显偏低(P<0.05),而用健康非孕参考区间评估无此发现。母体 HDL与新生儿体质量无相关性(r=-0.190, P=0.103);母体LDH与新生儿体质量明显负相关(r=-0.252,P=0.029)。结论本研究所建立的健康妊娠特异性血脂参考区间对GDM孕妇及其胎儿脐血的血脂状态的评估具有重要意义。

    作者:曹芳;虞斌;朱自强;黄瑞萍;史烨;杨宇奇;王秋伟 刊期: 2013年第21期

  • 入院时静息呼吸频率与GRACE评分在ACS 心血管死亡风险评估的价值研究

    目的评估入院时静息呼吸频率与全球急性冠状动脉事件注册评分系统(GRACE)评分在急性冠脉综合征(ACS)风险分层中的作用和价值。方法前瞻性的收集符合纳入标准的ACS患者,在入院时检测患者呼吸频率并进行GRACE评分,根据呼吸频率分级和GRACE评分分级进行分组,观察近期心血管疾病病死率。随访时间为30 d。结果死亡组呼吸频率明显高于存活组。Kapian-M eier生存曲线分析揭示呼吸频率和GRACE危险积分高者近期预后明显较差;多变量Cox比例风险模型表明GRACE危险积分和呼吸频率是ACS患者近期病死率的独立危险因素。结论入院时静息呼吸频率与GRACE评分联合对ACS患者危险分层具有重要的临床应用价值,可用于近期死亡风险预警。

    作者:敖泽惠;佘强;杜建霖 刊期: 2013年第21期

  • 某医学院校强化教学督导工作的探索与实践

    在当前全面提高高等教育质量的大背景下,本科教学仍然是高校基础、根本的工作。如何加强高校自我评估,健全校内质量保障体系,努力提高本科教育教学质量是高校教学工作的中心任务,而教学督导工作是这个中心任务得以完成的重要保障。

    作者:宗晓琴;钱光玲;曾照芳;徐晨 刊期: 2013年第21期

  • 危重创伤休克患者外科手术麻醉的临床研究

    目的探讨危重创伤休克患者的麻醉处理方法和临床体会。方法将该院收治的48例重度创伤休克手术患者按麻醉处理方法的不同随机分为两组,延迟复苏组(A组)和常规组(B组),各24例。结果患者均按预计完成手术,术中生命体征平稳。术后3~4 h内完全清醒,恢复自主呼吸。A组有4例(16.6%)患者死亡,B组有12例(50.0%)患者死亡。A组病死率明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论危重创伤休克患者选择合适的麻醉管理可维护各脏器功能,为手术的顺利进行创造良好条件,提高该类危重患者的生存率。

    作者:赵卫兵;杨小春 刊期: 2013年第21期

  • 胎盘多肽注射液对四肢骨折患者骨折愈合时间及感染发生率的影响研究

    目的探讨研究胎盘多肽注射液对四肢骨折患者的骨愈合时间及感染发生率的影响。方法收集该院2010年2月至2012年2月收治的行手术治疗的四肢骨折患者138例,按入院时间顺序随机分为两组,每组69例。对照组术后给予常规用药,观察组在对照组的基础上给予胎盘多肽注射液,观察两组患者的骨愈合时间及感染率。结果观察组患者的四肢骨折愈合时间均明显短于对照组患者,差异有统计学意义( P<0.05);观察组患者的感染率为1.45%显著低于对照组的10.14%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胎盘多肽注射液辅助治疗四肢骨折患者,可有效促进骨折愈合时间,并显著降低感染率。

    作者:徐海栋;陈勇 刊期: 2013年第21期

  • 轻度结膜炎症对93例干眼病患者泪膜破裂时间的影响研究

    目的探讨干眼病患者轻度结膜炎对泪膜破裂时间的影响。方法收集2007年9月至2011年9月来该院眼科就诊,经角膜荧光素染色,泪膜破裂时间小于或等于5 s的93例患者。将患者分为伴有轻度结膜炎(实验组)和不伴有结膜炎组(对照组)两组,比较两组泪膜破裂时间。结果54例合并轻度结膜炎,40例可以观察到结膜乳头,平均泪膜破裂时间为(3.54±1.02)s ;对照组39例,平均泪膜破裂时间为(3.41±1.04)s ,两组间无显著差异性( P=0.56)。结论干眼并发轻度结膜炎不影响泪膜破裂时间。

    作者:陈俊涛;张委;云斌 刊期: 2013年第21期

  • 模拟介入围手术期IFN-α联合ATRA治疗肝癌的效果观察

    目的探讨介入围手术期干扰素-α(IFN-α)联合全反式维甲酸(ATRA)治疗肝细胞癌的疗效。方法选取28只Wistar大鼠,建立肝癌细胞CBRH7919的动物模型,并将瘤块组织移植于大鼠体内。1个月后,待瘤块完全形成后将所有大鼠的肝动脉进行结扎,并将所有大鼠随机分为实验组与对照组,各14只。对照组给予腹腔注射生理盐水,实验组给予腹腔注射IFN-α联合ATRA进行治疗。10d后将所有大鼠处死,并检测肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)mRNA及蛋白的表达水平、癌细胞的凋亡情况与瘤体内的微血管密度。结果实验组外周血VEGF水平、肿瘤微血管密度及肿瘤细胞凋亡指数[(91.8±12.7)pg/mL,(115.7±11.8)个/HP,(12.29±4.53)%]均明显低于对照组[(67.4±18.3)pg/mL,(65.3±7.2)个/HP,(3.81±1.52)%],差异有统计学意义(P<0.05);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法检测的结果均显示,实验组bFGF及VEGF表达要明显低于对照组。结论围介入手术期IFN-α联合ATRA的使用能够抑制新生肿瘤血管的生成,提高介入手术的临床疗效,值得推广。

    作者:赵书元;吴李鸣 刊期: 2013年第21期

  • 大鼠表皮基底层干细胞体外分离与培养

    目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤,采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞,将慢黏附细胞作为对照组细胞,均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素和角蛋白19(K19)双重荧光染色鉴定细胞表型,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力。结果分离培养的细胞为多角形、呈铺路石样排列,倍增时间约为24 h ,细胞形态和生长规律符合基底层干细胞的特征。免疫荧光鉴定显示细胞共表达β1-整合素和K19,基底层干细胞克隆形成能力显著强于对照细胞。结论两步消化联合Ⅳ型胶原差速贴壁法获取基底层干细胞简易可行,培养的细胞活力好、表型可靠。

    作者:邓先见;姚波;李力;徐苗苗;顾玮;杨策;蒋建新 刊期: 2013年第21期

  • 柯氏评估模型在提升临床护士岗位胜任能力中的应用探讨

    传统的培训方法由于对培训内容的确定缺乏针对性、培训设计过程中培训成员参与程度不够、对培训效果缺乏科学的评价方法,导致培训效果不理想[1]。采用美国学者唐纳德·柯克帕特里克在1959年提出的“柯氏评估模型”,通过反应、学习、行为和结果4个评估层级对培训的目标、内容和培训后的效果进行评估,发挥其对培训活动的导向、鉴定和改进作用[2]。

    作者:谭昌菊 刊期: 2013年第21期

  • 缺血预适应对大鼠肢体缺血再灌注后小肠损伤的保护效应及NO的作用

    目的观察缺血预适应(IPC)对肢体缺血再灌注(LIR)后小肠损伤的保护效应,探讨一氧化氮(NO)在该过程中的作用机制。方法雄性Wistar大鼠52只,随机分为4组(n=13):假手术(Sham)组,肢体缺血再灌注(IR)组,缺血预适应(IPC)组,Nω-硝基-L-精氨酸甲酯处理(L-NAME)组,测定各组大鼠血浆和小肠组织二胺氧化酶(DAO)、NO含量,血浆异硫氰酸荧光素标记的脂多糖(FITC-LPS)浓度,小肠组织丙二醛(MDA)、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量;采用免疫组织化学法检测蛋白P-选择素(P-selection)和凋亡蛋白酶(Caspase-3)的表达情况,利用原位脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测各组小肠组织细胞的凋亡情况,使用自动图像分析系统对其结果进行定量分析。结果 IPC组与IR组比较,血浆DAO和FITC-LPS明显降低,NO升高(P<0.01),小肠组织NO、DAO和cGMP浓度升高,MDA浓度下降(P<0.01),小肠组织黏膜上皮细胞P-selection、Caspase-3的表达明显下降,AI降低(P<0.01);L-NAME组与 IPC组比较,血浆NO浓度明显下降,DAO 和 FITC-LPS明显升高(P<0.01),小肠组织NO、DAO和cGMP浓度明显下降,MDA浓度升高(P<0.01),P-selection、Caspase-3表达均明显上调,AI明显升高(P<0.01)。结论 IPC可明显改善LIR后小肠黏膜肠通透性升高、组织脂质过氧化损伤及肠细胞凋亡, NO参与IPC的保护效应。

    作者:刘燕;彭海兵;张博;周洪霞;杨秀红;张连元 刊期: 2013年第21期

  • 两种术式经尿道手术治疗小体积前列腺增生的比较

    目的比较经尿道前列腺电切术(TURP)和TURP联合经尿道膀胱颈切开术(TUIBN)治疗小体积前列腺增生的疗效。方法分析2002年3月至2010年10月小体积前列腺增生患者的治疗资料,患者共124例,随机分为TURP组62例,有完整随访资料的54例,TURP联合TUIBN组62例(联合组),有完整随访资料的50例。比较两组患者术前、术后国际前列腺症状评分(IPSS)、大尿流率(Qmax)、残余尿量(PVR)等指标,以评估疗效。结果术前两组患者年龄、病程、前列腺质量、IPSS、Qmax、PVR之间差异无统计学意义(P>0.05);术后两组IPSS、Qmax和PVR相比较,差异有统计学意义(P<0.01);联合组术后膀胱颈挛缩的发生率为4%,明显低于TURP组11%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);术中组织切除量、术后随访时间相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论与TURP相比,TURP联合TUIBN是治疗小体积前列腺增生的一种较为理想的术式。

    作者:刘南;李元;罗宏;戴君勇;鲜鹏;宋彦平;彭健康 刊期: 2013年第21期

  • 影响精神分裂症患者抗精神病药物治疗效果的因素分析

    目的对影响精神分裂症患者抗精神病药物治疗效果的因素进行Logistic回归分析。方法分析该院精神科2008年5月至2010年3月146例精神分裂症患者抗精神病药物治疗前后的效果,并采用Logistic回归模型分析影响疗效的因素。结果抗精神药物治疗后的症状评分情况均优于治疗前;Logistic回归分析,抽烟史、饮酒史、糖尿病史、病程、民族、类型、首次发病、nAchR(rs 1355920)及DISCl(rs 821597)是影响抗精神病药物治疗效果的主要因素。结论影响抗精神病药物治疗效果的因素较多,应根据患者的具体情况制定方案。

    作者:陆晓星 刊期: 2013年第21期

重庆医学杂志

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主管:重庆市卫生和计划生育委员会

主办:重庆市卫生信息中心,重庆市医学会