探讨HBV-DNA荧光定量分析在HBV感染诊疗中的合理应用

李庆科；杨含腾；王兴昌

关键词：HBV, HBV-M, HBV-DNA荧光定量

摘要：目的了解HBV感染后,9种常见血清学组合模式下,如何选择HBV-DNA荧光定量检测.方法对照545份血清标本同时进行ELISA方法测定HBV-M及PCR荧光定量检测HBV-DNA.结果①HBsAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(+)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,185份标本HBV-DNA在5×102～107copies/ml之间,阳性率为100%(185/185);②HB-sAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,42份标本HBV-DNA在5×102～107copies/ml之间,阳性率为59.15%(42/71);③HBsAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,79份标本HBV-DNA在5×102～106copies/ml之间,阳性率为34.80%(79/227);④HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,8份标本HBV-DNA为5×102～103copies/ml,阳性率为38.10%(8/21);⑤HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,2份标本HBV-DNA在5×102～104copies/ml之间,阳性率为40.00%(2/5);⑥HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,1份标本HBV-DNA为5×102～103copies/ml,阳性率为33.33%(1/3);⑦HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(-)组,3份标本HBV-DNA在5×102～104copies/ml之间,阳性率为16.67%(3/18);⑧HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,1份标本HBV-DNA小于5×102copies/ml,阳性率为0%(0/1);⑨HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(-)组,14份标本HBV-DNA小于5×102copies/ml,阳性率为0%(0/14).结论在常见9种血清学组合模式中,只有HBsAg(+)的血清学组合模式下,行HBV-DNA荧光定量检测,对临床诊断治疗HBV感染有重要价值.因其它血清学组合模式下,应结合肝功能状况或为进一步确诊HBV是否感染而行HBV-DNA的荧光定量检测.

现代检验医学杂志相关文献

荧光定量聚合酶链反应检测人乳腺癌C-erbB2基因扩增及过度表达的研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测C-erbB2基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用.方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中C-erbB2的表达量.结果C-erbB2表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P＞0.05),乳腺癌组均高于前两组(P＜0.05),β2-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P＞0.05).81例乳腺癌患者阳性率为50.6%,良性乳腺疾病组为0.C-erbB2表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P＞0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级以及腋淋巴结转移相关(P＜0.05).结论FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测C-erbB2方法,可有效地诊断乳腺癌并对其疗效、转移和预后进行监测.

作者：邓君；黄文方；饶绍琴；杨洋刊期： 2005年第06期
探讨HBV-DNA荧光定量分析在HBV感染诊疗中的合理应用

目的了解HBV感染后,9种常见血清学组合模式下,如何选择HBV-DNA荧光定量检测.方法对照545份血清标本同时进行ELISA方法测定HBV-M及PCR荧光定量检测HBV-DNA.结果①HBsAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(+)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,185份标本HBV-DNA在5×102～107copies/ml之间,阳性率为100%(185/185);②HB-sAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,42份标本HBV-DNA在5×102～107copies/ml之间,阳性率为59.15%(42/71);③HBsAg(+)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,79份标本HBV-DNA在5×102～106copies/ml之间,阳性率为34.80%(79/227);④HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,8份标本HBV-DNA为5×102～103copies/ml,阳性率为38.10%(8/21);⑤HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(+)组,2份标本HBV-DNA在5×102～104copies/ml之间,阳性率为40.00%(2/5);⑥HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,1份标本HBV-DNA为5×102～103copies/ml,阳性率为33.33%(1/3);⑦HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(-)组,3份标本HBV-DNA在5×102～104copies/ml之间,阳性率为16.67%(3/18);⑧HBsAg(-)、抗HBs(+)、HBeAg(-)、抗HBe(+)、抗HBc(+)组,1份标本HBV-DNA小于5×102copies/ml,阳性率为0%(0/1);⑨HBsAg(-)、抗HBs(-)、HBeAg(-)、抗HBe(-)、抗HBc(-)组,14份标本HBV-DNA小于5×102copies/ml,阳性率为0%(0/14).结论在常见9种血清学组合模式中,只有HBsAg(+)的血清学组合模式下,行HBV-DNA荧光定量检测,对临床诊断治疗HBV感染有重要价值.因其它血清学组合模式下,应结合肝功能状况或为进一步确诊HBV是否感染而行HBV-DNA的荧光定量检测.

作者：李庆科；杨含腾；王兴昌刊期： 2005年第06期
自制改良Miller窥盘计数网织红细胞及应用

当今网织红细胞(下称网红)计数虽已有先进的自动分析技术的应用,但迄今国内仍以显微镜目测法为主.目测计数原用缩小视野法,费工费时,计数精确性差,用Miller窥盘[1]后有了改善,但仍感不便,且市场上不易购得.本文设计一种改进的窥盘,改变原Miller窥盘大小方格比例和小方格位置,用电脑绘图,打印于透明投影胶片上,制成两方格面积比为10 : 1、小方格居中的改良Miller窥盘,制作简易,经济实用,效果好.

作者：陈高远；周文良；陈秀华刊期： 2005年第06期
HITACHI/BM-717全自动生化分析仪常见故障分析及处理

我院引进BM717已一年半,该仪器每小时800个测试,具有操作简单,测试速度快,试剂用量少,控温精度高等特点.自运行以来状态良好,但在使用过程中也遇到一些报警信息提示和故障,影响测试和工作,现就故障现象及处理方法总结如下,供使用该仪器的同行参考.

作者：杨洪芬刊期： 2005年第06期
大Y染色体与不良生育之间关系的探讨

Y染色体的异态性是否会导致生殖异常,是近年来医学遗传界一直争论的议题.有些学者认为大Y是一种正常的遗传多态变异,没有什么临床意义;但是很多的研究指出大Y与流产频率增加有关,有学者认为大Y是由于异染色质中的DNA过多重复,造成有丝分裂发生错误或影响基因调节及细胞分化,从而导致不良妊娠.本文将对大Y染色体核型与不良生育之间的关系进行探讨研究.

作者：张玲；史化民；周友泉刊期： 2005年第06期
结核分枝杆菌标本的不同处理方法对PCR扩增敏感性的影响

目的探讨检测标本中血红蛋白(Hb)浓度对PCR扩增管中Taq酶活性的影响及消除影响的方法;探讨胰酶消化痰液的应用价值;比较淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、十二烷基硫酸钠(SDS)溶血液处理全血标本对检测结果敏感性的影响;观察SDS在结核分枝杆菌DNA(TB DNA)提取液中存在的价值及对Taq酶的影响.方法将经梯度稀释的Hb标准品与结核分枝杆菌(TB)定值质控品混匀制备成待检标本进行PCR检测;将定值Hb标准品与TB质控品混匀制备成待检标本,观察提取时100℃煮沸时间对Hb抑制Taq酶能力的影响;将结核患者的痰液分成两管,分别用4 g/dl NaOH消化、1 g/dl胰酶消化、1 g/dl胰酶消化+4 g/dl NaOH处理,比较PCR检测结果的敏感性;将结核患者的外周抗凝血分别用淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、SDS溶血剂处理,比较PCR检测结果的敏感性;用10 g/LSDS、1%(v/v)Triton、1 g/LSDS的1%(v/v)Triton、0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton提取液对相同的TB质控品进行TB DNA提取,观察PCR检测结果敏感性;56份痰液、34份全血按痰液、全血标本的方法处理,进行PCR扩增,比较检测结果的阳性率.结果当Hb≥10-5g/L时,Hb对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强;提取时100℃煮沸40 min与煮沸10 min的对照管结果完全一致;痰液标本处理方法的敏感性顺序为:胰酶消化+NaOH处理＞胰酶消化＞NaOH消化;全血标本处理方法的敏感性顺序为:红细胞裂解液法=淋巴细胞分离法＞SDS溶血法;提取方法PCR检测结果敏感性顺序为:0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞1%(v/v)Triton＞1 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞10 g/L SDS,SDS对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强.56份痰标本按上述方法处理的阳性率分别为57.1%(32/56),82.1%(46/56),91.0%(51/56),通过配对资料卡方检验,胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理与NaOH消化法之间具有显著性差异(P＜0.005),胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理之间差异无显著性(0.1＜P＜0.25);34份全血标本按上述方法处理的阳性率分别为79.4%(27/34),79.4%(27/34),47.0%(16/34),通过配对资料卡方检验,红细胞裂解液法和淋巴细胞分离法与SDS溶血法之间具有显著性差异(0.005＜P＜0.01).结论检测TB DNA标本的预处理有必要规范化.

作者：周步全；朱建峰；王迎春；王义凤；董川刊期： 2005年第06期
放免检测室内质控血清的制备及初步应用

目的建立一种相对长久、稳定的放免检测室内质控方法.方法将健康体检者的血清样本混合后分装,冷冻保存在-20℃冰箱中.每批次放免检测时,取一支插入常规标本中进行测定后,观察其质控血清的稳定性,并建立放射免疫检测的L-J质控图.结果自制室内质控血清在-20℃条件下保存12 mo结果稳定.结论自制质控血清可以用于放免检测的常规室内质控.

作者：黄绍光；黄学忠；周平；陈晓飞；林佩佩刊期： 2005年第06期
自身免疫病患者自体造血干细胞移植后CD4+CD45RA+及CD4+CD45RO+T辅助淋巴细胞亚群的改变

目的检测严重自体免疫病(SAID)患者自身造血干细胞移植(AHSCT)前后外周血中CD4+CD45RA+(naive Th细胞)及CD4+CD45RO+(记忆Th细胞)T辅助淋巴细胞亚群的变化,探讨naive Th细胞和记忆Th细胞在AHSCT诱导自身免疫病缓解中的作用.方法使用三色流式细胞术检测SAID患者AHSCT前1 w及移植后1～3 mo外周血中CD4+CD45RA+及CD4+CD45RO+T辅助淋巴细胞亚群的改变,naive Th细胞表型为CD4+CD45RA+,记忆Th细胞表型为CD4+CD45RO+.分析各细胞亚群占CD4+T辅助淋巴细胞的百分比,并比较移植前后naive Th、记忆Th细胞的变化.结果AHSCT后,患者外周血中记忆Th细胞显著增高,P＜0.05;naive Th细胞和CD45RO+CD45RA+双阳性细胞均显著下降,P＜0.05.结论AHSCT治疗SAID患者,患者体内naive Th细胞和CD45RO+CD45RA+双阳性Th细胞百分率显著减少,这是AHSCT诱导SAID缓解的机制之一.

作者：陈军浩；欧阳建；孙雪梅；耿东进刊期： 2005年第06期
Bayer1650全自动生化分析仪测定总胆汁酸交叉污染的解决方案

我科于2003年4月安装并使用Bayer1650全自动生化分析仪,发现总胆汁酸(TBA)测定受其它项目的影响较大,几乎不能和其它项目同时测定,如同时测定,TBA的结果普遍都增高,只有单独测定时结果才理想,这给日常工作带来巨大的麻烦.为了解决这个问题我们做了如下探索.

作者：冯磊；年士艳；山德生；徐文波刊期： 2005年第06期
国际输血协会血型2004红细胞表面抗原术语

人类100年以前发现了血型,在20世纪用不同的形式术语表达.1980年国际输血协会建立了一个工作组,采用基于遗传的数字术语对红细胞表面抗原进行分类.1990年工作组出版了专著,用数字术语描述了242个红细胞抗原.

作者：刘孟黎；牛姗姗刊期： 2005年第06期
阿利新蓝染色法检查新型隐球菌

新型隐球菌墨汁染色检测法,一直以来以其操作简便、成本低而延用,尤其在疑为中枢神经系统隐球菌感染的脑脊液标本检测时.但在实际应用中,墨汁染色法受杂质及细胞成分干扰大,检出率低,特别在中枢感染的初期及恢复期,隐球菌数量较少,易漏检.现介绍一种简便快速的特殊染色法,提高隐球菌的检出率,供同行参考.

作者：杜本丽刊期： 2005年第06期
KX-21N血细胞分析仪常见故障及错误信息处理

KN-21N全自动血细胞分析仪是日本东亚公司生产的产品,我院使用该仪器已有2年多,在临床试验中检测了4万余例,提示该仪器具有自动化程度高、操作简单、重复性好、准确率高,无氰化物试剂、故障低等优点.但随着使用时间的延长,仪器会出现一些问题.现就该仪器在临床操作中出现的几种常见故障及错误信息处理作一分析,以供同行参考和实际操作.

作者：何爱湘刊期： 2005年第06期
荧光产物增强逆转录酶活性检测方法的建立及应用

目的采用荧光产物增强逆转录酶活性分析(STF-PERT),建立逆转录酶活性荧光定量方法,用于临床标本和献血员中逆转录病毒的检测.方法用荧光产物增强逆转录酶活性分析方法检测500份献血员血液样本;同时测定此方法的敏感性.结果将AMV逆转录酶经连续梯度稀释后,经PCR循环反应,得到与理论值完全相符合的PCR荧光值曲线.500份献血员样本有19份逆转录酶(RT)活性阳性,阳性率为3.8%;用常规筛选方法检测,有1份HIV可疑结果,2份HCv阳性,5份HBV阳性,共8份,筛检率为1.6%.结论常规的献血员血样筛选方法,并不能完全包含所有被检测献血员血样中的逆转录病毒;STF-PERT对及时发现逆转录病毒感染,提高临床输血安全性有着十分重要的意义.

作者：岳乔红；苏明权；杨柳；王宝燕；周萍；李银太；郝晓柯刊期： 2005年第06期
免疫比浊法定量检测D-二聚体的实验程序优化及实际价值

目的优化实验程序以拓展免疫比浊法定量检测D-二聚体的检测范围.方法分别以未稀释样本及预稀释样本方式在CA1500全自动血凝仪上建立两套程序.应用D-二聚体标准品分别建立两套程序相应的定量标准曲线,一条为未稀释标准曲线,另一为预稀释标准曲线.在两条标准曲线模式下,分别对D-二聚体高值质控血浆和临床收集的43例D-二聚体异常升高血浆样本进行D-二聚体测定.结果未稀释标准曲线与预稀释标准曲线对应的D-二聚体检测线性范围分别是124～3 980μg/L和498～7 960μg/L.在未稀释标准曲线模式下,上述样本的D-二聚体均不能直接测出;而在预稀释标准曲线模式下,所有样本D-二聚体均可直接测出,其中D-二聚体高值质控血浆的D-二聚体测定结果为3 328±194μg/L,43例临床样本D-二聚体结果在1 386～6 185μg/L之间,平均为3 009±1 497μg/L.结论在应用免疫比浊法进行D-二聚体测定中,另外建立一套预稀释程序可以拓展免疫比浊法定量检测D-二聚体的检测范围,而且可以较好地解决D-二聚体异常升高样本不能直接测定的问题.

作者：郑卫东；曾淑燕刊期： 2005年第06期
DSI-905电解质分析仪日常维护及常见故障原因及排除

上海迅达医疗仪器公司产的DSI-905电解质分析仪是一种具有自动定标、自动进样、操作简便、分析速度快、一次进样可同时测出K+、Na+、Cl-、Ca2+、nCa2+、pH等六项参数的分析仪,深受检验工作者欢迎.由于用户维护使用不当,该机也常常出现一些故障,现介绍一些日常维护必须注意的事项,以及几例常见故障的原因及排除方法.

作者：游跃星刊期： 2005年第06期
自配MEK-4200血细胞分析仪稀释液应用评价

使用日本光电公司生产的血细胞分析仪MEK-4200,购买原装试剂成本高,其稀释液用量大,为解决依赖进口试剂价格昂贵、运输不便等问题,查阅了大量资料[1～4],自配了稀释液,经几次改动,经过一段时间使用,效果良好.其实验评价报告如下:

作者：郝万鹏；沈萍刊期： 2005年第06期
AVL COMPACT2型血气分析仪常见故障及解决办法

AVL COMPACT2型血气分析仪,是一台微型全自动血气分析仪,该仪器具有精密度高、操作简单、方便、标本用量少等特点.我院引进已有多年,临床反应良好.但笔者在实际工作中遇见了该仪器经常出现的几个故障,并探索了一些解决办法,现作如下介绍.

作者：罗书久；唐中刊期： 2005年第06期
血清CysC作为肾小球滤过率指标在慢性肾功能衰竭中的意义

目的探讨血CysC作为肾小球滤过率指标在慢性肾功能衰竭中的应用价值.方法将81例住院病人分为肾功能正常组及慢性肾功能衰竭Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,测定各组病人的血、尿肌奸、血CysC和β2-MG,并与正常对照组比较.结果各期肾衰病人血清CysC、β2-MG及Ccr与肾功能正常组比较有显著性差异(P＜0.01),而各组病人CysC和β2-MG与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01);血Cr与血β2-MG和CysC的相关系数r分别为0.704 3和0.831 5,Ccr与血β2-MG和CysC的相关系数r分别为-0.672 3和-0.798 2.结论血CysC作为肾小球滤过率指标更为适合.

作者：张耀祖刊期： 2005年第06期
强直性脊柱炎患者HLA-B27、B7、B13、B40抗原表达及免疫学指标的分析

目的探讨强直性脊柱炎患者HLA-B27、B7、B13、B40的抗原表达,发现抗原相互杂合与交叉反应,以及强直性脊柱炎患者的免疫学指标的变化.方法采用NIH微量淋巴细胞毒法对HLA-B27等抗原进行检测,抗核抗体采用间接免疫荧光法,免疫球蛋白及补体均采用免疫速率散射法测定.结果126例初诊患者中HLA-B27阳性率为34.1%,HLA-B7、B13、B40的阳性率分别为6.3%,13.5%,11.1%.HLA-B27阳性组中HLA-B13阳性率为27.9%,HLA-B40阳性率为23.3%,分别高于HLA-B27阴性组(6.0%,4.8%),而HLA-B7的阳性率两组无显著性差异.HLA-B27阳性组的免疫球蛋白、补体、抗核抗体指标均显著高于HLA-B27阴性组(P均＜0.05).结论检测强直性脊柱炎患者HLA-B27及相关B抗原有助于疾病诊断和抗原交叉反应的分析,体液免疫异常及自身抗体的出现与HLA-B27密切相关.

作者：李士军；袁宏；王滨；曹华军刊期： 2005年第06期
蛋白指纹技术在肿瘤诊断中的应用与进展

蛋白指纹技术(protein fingerprinting)是表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,缩写SELDI-TOF-MS,简称SELDI-TOF或SELDI)的俗称,它指的就像每个人的指纹不同于他人一样,每种疾病在发生发展过程中所形成的特定蛋白组或其降解产物也不一样,所以对此各种特异性蛋白指纹图谱的识别和判断,就可达到对各类疾病进行准确诊断的目的.

作者：汪隆海刊期： 2005年第06期