学术投稿

荧光定量聚合酶链反应检测人乳腺癌C-erbB2基因扩增及过度表达的研究

邓君;黄文方;饶绍琴;杨洋

关键词:荧光定量聚合酶链反应, C-erbB2, 乳腺癌
摘要:目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测C-erbB2基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用.方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中C-erbB2的表达量.结果C-erbB2表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),β2-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05).81例乳腺癌患者阳性率为50.6%,良性乳腺疾病组为0.C-erbB2表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P>0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级以及腋淋巴结转移相关(P<0.05).结论FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测C-erbB2方法,可有效地诊断乳腺癌并对其疗效、转移和预后进行监测.
现代检验医学杂志相关文献
  • HITACHI/BM-717全自动生化分析仪常见故障分析及处理

    我院引进BM717已一年半,该仪器每小时800个测试,具有操作简单,测试速度快,试剂用量少,控温精度高等特点.自运行以来状态良好,但在使用过程中也遇到一些报警信息提示和故障,影响测试和工作,现就故障现象及处理方法总结如下,供使用该仪器的同行参考.

    作者:杨洪芬 刊期: 2005年第06期

  • 急性心肌梗死患者血清m-AST的变化及意义

    目的探讨线粒体天门冬氨酸转氨酶同工酶(m-AST)在急性心肌梗死(AMI)患者血清的变化及其临床意义.方法用全自动生化分析仪测定了19例AMI患者血清m-AST活性,同时观察其它4种心肌酶AST、CK、CK-MB、LDH动态变化.结果AMI患者,发病6 h血清m-AST即升高,与对照组相比有极显著差异,P<0.001.12 h迅速升高,24 h达峰值(256.5±69.5 IU/L),此后,逐渐下降,120 h时基本正常,与对照组相比无显著差异,P>0.05.m-AST升高的幅度差别较大,6h m-AST升高幅度略低于CK-MB、AST;12 h迅速升高,是正常的16.2倍;48 h达高,是正常的21.9倍;随后迅速下降,120 h时是正常的1.3倍,升高曲线与CK-MB相当,比AST、CK及LDH敏感.与AST、CK、CK-MB、LDH的异常检出率进行比较,发病6 h异常检出率依次为CK-MB>CK>AST>m-AST>LDH,24 h内不断上升,其中以m-AST与CK-MB异常检出率高,达100%,CK、AST次之,为89.5%和84.2%,LDH较低,为73.6%.48 h后检出率逐渐下降,下降速度是AST3.9倍,是CK2.7倍,CK-MB 1.2倍,LDH 5.1倍.结论检测并动态观察m-AST酶活性,可作为诊断AMI并评价疗效、判断预后的一项新的生化指标.

    作者:阴斌霞;王华;王香玲;赵丽华;柴丽华;岳天海;何谦;樊晓燕;王幼利 刊期: 2005年第06期

  • 自身免疫病患者自体造血干细胞移植后CD4+CD45RA+及CD4+CD45RO+T辅助淋巴细胞亚群的改变

    目的检测严重自体免疫病(SAID)患者自身造血干细胞移植(AHSCT)前后外周血中CD4+CD45RA+(naive Th细胞)及CD4+CD45RO+(记忆Th细胞)T辅助淋巴细胞亚群的变化,探讨naive Th细胞和记忆Th细胞在AHSCT诱导自身免疫病缓解中的作用.方法使用三色流式细胞术检测SAID患者AHSCT前1 w及移植后1~3 mo外周血中CD4+CD45RA+及CD4+CD45RO+T辅助淋巴细胞亚群的改变,naive Th细胞表型为CD4+CD45RA+,记忆Th细胞表型为CD4+CD45RO+.分析各细胞亚群占CD4+T辅助淋巴细胞的百分比,并比较移植前后naive Th、记忆Th细胞的变化.结果AHSCT后,患者外周血中记忆Th细胞显著增高,P<0.05;naive Th细胞和CD45RO+CD45RA+双阳性细胞均显著下降,P<0.05.结论AHSCT治疗SAID患者,患者体内naive Th细胞和CD45RO+CD45RA+双阳性Th细胞百分率显著减少,这是AHSCT诱导SAID缓解的机制之一.

    作者:陈军浩;欧阳建;孙雪梅;耿东进 刊期: 2005年第06期

  • 大肠埃希菌耐消毒剂基因的检测分析

    目的检测临床分离的65株大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE-sull的存在情况.方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测65株大肠埃希菌及1株ATCC25922的qacE-sull基因.结果65株大肠埃希菌的qacE-sul1基因的阳性率为58.46%.结论大肠埃希菌耐消毒剂的qacE-sull基因携带率较高,可能是该菌引起院内感染的重要原因,应引起我国医院消毒界的重视.

    作者:王家平;王苏建;张洪亚;张晓梅;糜祖煌 刊期: 2005年第06期

  • 肌钙蛋白Ⅰ水平与急性心肌梗死患者预后的关系

    目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平与近期预后的关系.方法通过测定76例AMI患者的血清cTnI水平,根据cTnI水平分为二组,观察住院期间心力衰竭、心脏性死亡的发生率,测定左心室射血分数(LVEF),分析cTnI水平与它们的关系.结果A、B两组的心力衰竭、心脏性死亡的发生率存在显著差异.结论血清cTnI是AMI患者住院期间预后的独立预测因子.

    作者:黄小琪;唐耀平 刊期: 2005年第06期

  • 早期西洛他唑治疗对急性冠脉综合征血清可溶性CD40L水平的影响

    目的观察急性冠脉综合征(ACS)早期西洛他唑治疗对血清可溶性CD40L的影响,了解西洛他唑对ACS斑块稳定性和免疫炎症抑制的作用.方法92例初次确诊为ACS患者分为常规治疗组44例和西洛他唑治疗组48例,用ELISA法测定92例ACS患者治疗前后血清sCD40L水平的变化.结果西洛他唑治疗组ACS患者治疗后血清sCD4OL水平明显下降,与常规治疗组比较有显著统计学差异(P<0.01).结论ACS患者早期予以西洛他唑治疗,可以明显降低血清炎症因子水平,从而改善该病进程.

    作者:王维;徐邦牢;黎镇赐;贝春花 刊期: 2005年第06期

  • 不同检测系统孕酮测定结果的可比性研究

    目的探讨不同检测系统测定孕酮(PRGE)结果的可比性.方法取Bayer、德普和自制不同水平的质控物,以及35例不同浓度的患者新鲜血清,在四个不同的化学发光检测系统(强生VITROS ECI、拜尔ACS180、拜尔CENTAUR、德普immulite-1000及其配套的校准物、试剂、质控物等,分别命名为检测系统1~4)上进行PRGE检测,并对数据进行相关的统计学分析.结果经随机区组设计资料的方差分析,不同水平的质控物和不同浓度的患者新鲜血清PRGE测定结果在各检测系统的组间总体差异均有显著性(P<0.001);各检测系统PRGE测定结果的可靠性系数a接近1,各检洲系统间的相关系数均大于0.975.以检测系统1作为目标检测系统,对其它检测系统作临床可接受性能评价,检测系统2和3临床均接受,检测系统4临床部分接受.结论4个检测系统测定PRGE结果的精密度符合临床要求,临床可接受性能评价除检测系统4外均有可比性.

    作者:冯妙芙;黄宪章;徐宁;庄俊华;张秀明;梁伟雄 刊期: 2005年第06期

  • 义务献血前ALT初筛的意义及成本效益分析

    目的探讨义务献血前ALT初筛的意义和分析成本效益.方法用干式生化法进行ALT初筛,并与微板速率法检测结果相比较,同时核算初筛的成本和效益.结果干式生化法与微板速率法检测结果无显著性差异(t=1.108,0.20<P<0.50).初筛组和未初筛组的ALT异常血液报废率分别为0.078%和3.97%,两者有显著性差异(u=22.95,P<0.001).结论实行ALT初筛可大大降低血液报废率和避免浪费血源,具有良好的社会效益和经济效益.

    作者:邬旭群;鲍自谦;陈云龙 刊期: 2005年第06期

  • Panasonic多媒体呈像检查阴道分泌物中线索细胞

    阴道分泌物检查是妇科诊断和治疗女性泌尿生殖系统炎症的一种常用的检查方法.传统的生理盐水涂片法是妇科阴道分泌物常规检查方法[1],但由于是多细菌混合感染,给细菌的鉴定带来困难.根据病原体革兰氏染色后易与其它有形成分相区别,我科在原有计算机软件基础上进行开发,利用Panasonic多媒体呈像检测仪呈像后容易观察的特点,提高了细菌性阴道病(BV)检测的灵敏度和准确度,现报告如下:

    作者:汪文明;杨夕;游树林;黄仁河 刊期: 2005年第06期

  • 结核分枝杆菌标本的不同处理方法对PCR扩增敏感性的影响

    目的探讨检测标本中血红蛋白(Hb)浓度对PCR扩增管中Taq酶活性的影响及消除影响的方法;探讨胰酶消化痰液的应用价值;比较淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、十二烷基硫酸钠(SDS)溶血液处理全血标本对检测结果敏感性的影响;观察SDS在结核分枝杆菌DNA(TB DNA)提取液中存在的价值及对Taq酶的影响.方法将经梯度稀释的Hb标准品与结核分枝杆菌(TB)定值质控品混匀制备成待检标本进行PCR检测;将定值Hb标准品与TB质控品混匀制备成待检标本,观察提取时100℃煮沸时间对Hb抑制Taq酶能力的影响;将结核患者的痰液分成两管,分别用4 g/dl NaOH消化、1 g/dl胰酶消化、1 g/dl胰酶消化+4 g/dl NaOH处理,比较PCR检测结果的敏感性;将结核患者的外周抗凝血分别用淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、SDS溶血剂处理,比较PCR检测结果的敏感性;用10 g/LSDS、1%(v/v)Triton、1 g/LSDS的1%(v/v)Triton、0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton提取液对相同的TB质控品进行TB DNA提取,观察PCR检测结果敏感性;56份痰液、34份全血按痰液、全血标本的方法处理,进行PCR扩增,比较检测结果的阳性率.结果当Hb≥10-5g/L时,Hb对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强;提取时100℃煮沸40 min与煮沸10 min的对照管结果完全一致;痰液标本处理方法的敏感性顺序为:胰酶消化+NaOH处理>胰酶消化>NaOH消化;全血标本处理方法的敏感性顺序为:红细胞裂解液法=淋巴细胞分离法>SDS溶血法;提取方法PCR检测结果敏感性顺序为:0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton>1%(v/v)Triton>1 g/L SDS的1%(v/v)Triton>10 g/L SDS,SDS对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强.56份痰标本按上述方法处理的阳性率分别为57.1%(32/56),82.1%(46/56),91.0%(51/56),通过配对资料卡方检验,胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理与NaOH消化法之间具有显著性差异(P<0.005),胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理之间差异无显著性(0.1<P<0.25);34份全血标本按上述方法处理的阳性率分别为79.4%(27/34),79.4%(27/34),47.0%(16/34),通过配对资料卡方检验,红细胞裂解液法和淋巴细胞分离法与SDS溶血法之间具有显著性差异(0.005<P<0.01).结论检测TB DNA标本的预处理有必要规范化.

    作者:周步全;朱建峰;王迎春;王义凤;董川 刊期: 2005年第06期

  • 自配MEK-4200血细胞分析仪稀释液应用评价

    使用日本光电公司生产的血细胞分析仪MEK-4200,购买原装试剂成本高,其稀释液用量大,为解决依赖进口试剂价格昂贵、运输不便等问题,查阅了大量资料[1~4],自配了稀释液,经几次改动,经过一段时间使用,效果良好.其实验评价报告如下:

    作者:郝万鹏;沈萍 刊期: 2005年第06期

  • Sysmex-CA530血凝仪故障两例原因分析及排除

    Sysmex-CA530全自动血凝仪因操作简单,耗材少,结果准确而被广泛使用,但是在工作中也遇到一些问题,现将一次仪器检修过程中遇到的两例故障介绍如下.

    作者:陈风 刊期: 2005年第06期

  • 蛋白指纹技术在肿瘤诊断中的应用与进展

    蛋白指纹技术(protein fingerprinting)是表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,缩写SELDI-TOF-MS,简称SELDI-TOF或SELDI)的俗称,它指的就像每个人的指纹不同于他人一样,每种疾病在发生发展过程中所形成的特定蛋白组或其降解产物也不一样,所以对此各种特异性蛋白指纹图谱的识别和判断,就可达到对各类疾病进行准确诊断的目的.

    作者:汪隆海 刊期: 2005年第06期

  • 不同检测系统血小板测定结果的可比性研究

    目的探讨7个血液分析检测系统血小板测定结果的可比性.方法以可溯源的Bayer120全自动血液分析仪及其配套的校准物、试剂和质控物为目标检测系统,与其它6个检测系统(Coulter、CD3500、Bayer60、3台CD1700血液分析仪及其配套的校准物、试剂和质控物)为待评检测系统.在21个工作日内分别测定3种水平的四川通广全血质控物各10次、7次、7次和不同浓度新鲜全血样本55份.通过医学决定水平和相应回归方程计算目标检测系统与待评系统之间的相对偏差(%SE),以美国临床实验室修正法规(CLIA′88)规定的室间质量评价允许误差(T±25%)范围的1/2(T±12.5%)为标准,判断不同检测系统之间的可比性.结果3种水平的四川通广全血质控物和新鲜血标本经随机区组设计资料的方差分析各组间的总体差异均有显著性(P<0.001),各水平质控物的变异系数(CV%)和总CV值均小于CLIA′88允许误差范围的1/3(T±8.3%).新鲜全血样本各系统间测定结果的信度系数a为0.996 4,各检测系统间相关系数均大于0.975;临床可接受性能评价均为部分或全部超过CLIA′88允许范围的1/2.结论各检测系统血小板测定的精密度符合临床要求,各检测系统间均存在不可比性,应采取改进措施,以保证检验结果具有可比性.

    作者:吕国全;顾耀松;黄宪章;王美兰;卢妙莲 刊期: 2005年第06期

  • Bayer1650全自动生化分析仪测定总胆汁酸交叉污染的解决方案

    我科于2003年4月安装并使用Bayer1650全自动生化分析仪,发现总胆汁酸(TBA)测定受其它项目的影响较大,几乎不能和其它项目同时测定,如同时测定,TBA的结果普遍都增高,只有单独测定时结果才理想,这给日常工作带来巨大的麻烦.为了解决这个问题我们做了如下探索.

    作者:冯磊;年士艳;山德生;徐文波 刊期: 2005年第06期

  • 19例地中海贫血的基因诊断

    目的探讨遗传性血液病地中海贫血(mediterranean anemia)的基因诊断.方法运用聚合酶链式反应(polymerase chin reaction,PCR)、反向斑点杂交法(reverse dot blot,RDB)对不明原因的33例溶血性贫血、重型贫血患儿进行基因分型、突变点位检测.结果通过对33例全血标本的检测,19例确诊为地中海贫血,其中4例为α-地中海贫血,15例为β-地中海贫血.β-地中海贫血患儿中,男11例,女4例;α-地中海贫血患儿中,男3例,女1例;19例患儿中单基因位点突变有16例,双重基因位点突变有3例.结论运用基因检测技术对血液病地中海贫血的临床诊断及治疗具有重要意义.

    作者:胡双林;倪林仙;樊茂;奎莉越 刊期: 2005年第06期

  • 影响IFMA效果的常见问题与对策

    IFMA是时间分辨免疫荧光分析测定法的简称,是继免疫吸附试验和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术.它以免疫学反应为基础,将抗原与抗体的特异性反应与金属铕标记抗体作用相结合,再加入增强液将复合物标记抗体上的Eu3+解离到溶液中,并与增强液中有效成分形成高荧光强度的螯合物,其荧光强度与溶液中的待测物质的浓度成正比.

    作者:李祥安;杨焕涛 刊期: 2005年第06期

  • 干化学法测定血浆乳酸的应用与评价

    目的对全自动干化学法测定血浆乳酸进行应用与评价.方法在VITROS250干式生化分析仪上测定血浆乳酸,并同时在日立7170全自动生化分析仪上检测.结果血浆乳酸的检测限为0.50~12.00mmol/L;高、中、低浓度的批内CV分别为3.1%,3.6%和3.8%;批间CV分别为3.9%,4.3%和4.9%;回收率为96.3%~104.8%;与日立7170全自动生化分析仪(X)相关系数r=0.981,相关方程y=0.972X+0.13;血红蛋白浓度1.0 g/L以下,胆红素浓度342 μmol/L以下,甘油三酯浓度8.6mmol/L以下,维生素C浓度30mg/L以下,对干化学法测定基本无干扰.结论此法测定乳酸简便、快速、准确可靠,适用于急诊检测.

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  • RNA荧光定量标准品制备新方法的探讨

    目的以丙型肝炎病毒(HCV)为例,介绍一种简便快速的RNA定量标准品的制备方法.方法RT-PCR扩增目的片段,产物以pGEM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,经筛选和测序鉴定,阳性质粒体外转录合成cRNA,准确定量后作为标准品.结果RNA标准品具有较大的线性范围(109copies/ml~10 copies/ml),批内和批间重复性也较好,CV分别为1.68%~5.97%和6.40%~10.581%.结论此法制备的RNA标准品具有较好的检测灵敏度和特异性,适合临床推广应用.

    作者:黄竺筠;张冬雷;施建;崔之础 刊期: 2005年第06期

  • DSI-905电解质分析仪日常维护及常见故障原因及排除

    上海迅达医疗仪器公司产的DSI-905电解质分析仪是一种具有自动定标、自动进样、操作简便、分析速度快、一次进样可同时测出K+、Na+、Cl-、Ca2+、nCa2+、pH等六项参数的分析仪,深受检验工作者欢迎.由于用户维护使用不当,该机也常常出现一些故障,现介绍一些日常维护必须注意的事项,以及几例常见故障的原因及排除方法.

    作者:游跃星 刊期: 2005年第06期

现代检验医学杂志

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主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院