学术投稿

人野生型P53与反义mdm2基因融合体真核表达载体的构建及其在Mc3细胞中的表达

饶国洲;李晓红;李昂;郅克谦;张引成

关键词:分子克隆, 基因表达, Me3细胞, 免疫印迹法, p53基因, mdm2基因
摘要:目的 构建P53与反义mdm2 cDNA序列真核表达载体,并探讨其在人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞中的表达.方法 应用分子克隆技术,将mdm2cDNA序列反向插入到含有P53基因序列pDOR-Neo中的P53基因序列下游,构成含有P53基因与反义mdm2基因融合基因的逆转录病毒表达载体.经酶切分析鉴定后命名为pDOR-Neo-p53-F mdm2并将重组载体通过脂质体转染Mc3细胞,通过G418筛选转染阳性细胞,并采用Western blot方法检测P53蛋白表达.结果 酶切鉴定证实重组载体含有P53与反义mdm2 cDNA片段,实验结果表明:转染后P53蛋白(1.35±0.14)较对照组P53蛋白(6.26±0.11)含量显著减低(P<0.01),转染空载体P53蛋白(6.24±0.12)与对照组比较无统计学差异(P>0.05).结论 P53与反义mdm2基因融合体真核表达载体构建成功,并表达野生型P53蛋白和封闭mdm2基因,为今后进一步研究打下了基础.
现代检验医学杂志相关文献
  • MTT法检测胃癌患者肿瘤细胞对化疗药物敏感度的研究

    目的 探讨3-(4,5)-2-噻唑-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)药敏试验法在指导临床胃癌化疗中的作用.方法 应用MTT法检测40例胃癌新鲜标本肿瘤细胞对20种化疗药物的敏感度.结果 对胃癌细胞抑制率强的药物为PTX,ADM,BCNU,eADM,Ara-C;对胃癌细胞抑制率较弱的化疗药物为CTX,OPT,VP-16,ICTX,PYM.结论 MTT药物敏感试验对于提高胃癌化疗效果,减少用药盲目性具有重要意义.

    作者:李胜水;李双标;张风梅;刘岩;许华 刊期: 2008年第06期

  • 生物安全柜动态条件下空气细菌污染监测与影响因素分析

    目的 研究生物安全柜在动态条件下柜内空气细菌污染情况及其影响因素分析.方法 采用平板自然沉降法对生物安全柜内消毒净化的空气及柜外周边区消毒空气,在静止和工作状态下每隔10 min进行空气采样并计数细菌数.设对照组、干预组(限制人员活动)、未干预组.分别取有代表性的从操作开始10,20,40,60 min四组的空气细菌数进行对比分析,经t,F检验,分析生物安全柜内空气细菌菌落数随时间变化的趋势.结果 在静止柜内空气细菌总数在不同时间段与周边区空气相比均明显降低,差别有统计学显著性意义(P均<0.01);在工作状态下柜内空气细菌总数不论是在干预组还是未干预组与静止状态下相比差别均无统计学显著性意义(P均>0.05);未干预组柜内空气细菌总数虽与干预组相比有所增加,但差别均无统计学显著性意义(P均>0.05);在工作状态下不论是在干预组还是未干预组柜内空气细菌总数均显著低于周边区,而周边区空气细菌总数随采样次数的增加有增加的趋势,而生物安全柜内空气却无此趋势.干预组还是未干预组柜内空气细菌总数在各时间段经方差分析差别均无统计学显著性意义(P均>0.05).空气中细菌以葡萄球菌属、草绿色链球菌检出率高.结论 生物安全柜在动态条件下可有效保证柜内空气细菌的洁净并保持稳定,人员活动并不影响柜内空气的洁净.

    作者:宋庆璋;刘瑞东;马志国 刊期: 2008年第06期

  • 中国汶川大地震受难者血清电解质特征

    目的 分析汶川地震受难者血清电解质异常状况,并探讨其可能的病理机制.方法 测定400例受难者(其中挤压伤206例、非挤压伤194例)血清K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+和P浓度,其结果经统计学处理.结果 挤压伤患者和非挤压伤患者之间各电解质成分均有显著差异.相关关系显示:除Cr--Mg2+和Ca2+-P之间的相关关系从正相关转变为负相关,无显著性差异;Mg2+-P之间从负相关(r=-0.306,P=0.997)转变成正相关(r=0.280.P=0.000),且差异有统计学显著性意义外,其余电解质成分之间在挤压伤和非挤压伤的相关变化基本一致.多元统计分析表明:风险因子高的是血清K+(OR=28.037),其次为Ca2+(OR=7.284),Cl-(OR=4.457),P(OR=2.754),Na+(OR=1.780)和Mg2+(OR=0.592).ROC曲线分析结果显示:诊断挤压伤特异度(Sp)高的是血清K+,为98.5%(cut off=5.8 mmol/L),其次是血清P.Sp=84.3%(cut off=1.61 mmol/L);灵敏度(Se)高的是Ca2+(cut off=1.75 mmol/L),Se=81.1%,其次是Cr-,Se=78.3%(cut off=90 mmol/L);曲线下的面积(AUC)以血清K+高,为0.859(95%可信限:0.819~0.898),其它依次为P,Na+,Cl-,Mg2+和Ca2+,结果分别是0.550(0.494~0.607),0.507(0.450~0.564),0.442(0.386~0.498),0.424(0.368~0.479)和0.358(0.303~0.412).结论 自然灾害发生后,挤压伤患者的血清电解质异常较多见,常规性检测受难者血清电解质对正确评估其体内代谢状况和救护生命很有帮助.

    作者:俸家富;曾平 刊期: 2008年第06期

  • XT-1800i血细胞分析仪不能提供完整血小板参数的原因及对策

    目的 探讨XT-1800i血细胞分析仪不能提供完整血小板参数的原因及解决措施.方法 将203例XT-1800i不能提供完整PLT参数的标本在ADVIA-120血细胞分析仪上检测,同时结合手工显微镜计数PLT并观察PLT直方图、红细胞及血小板异常形态.结果 在203例XT-1800i血细胞分析仪不能提供完整血小板参数标本中,非造血系统肿瘤、消化系统、造血及泌尿系统疾病高这70.9%;在134例PLT直方图异常标本中,59例并无PLT及RBC明显形态改变.197例标本经ADVIA-120、手工法及XT-1800i血细胞分析仪测定PLT数比较有显著差异(均P<0.01).结论 遇上述疾病时应将标本转移到ADVIA-120血细胞分析仪测定,不具备上述条件的实验室应重新采血后在XT-1800i血细胞分析仪上复查,如该仪器复查后仍然不能提供完整PLT参数的标本,应结合手工显微镜法以保证PLT计数结果的准确性,并与临床医生就患者治疗情况进行沟通.

    作者:闵迅;陈丽华;骆科允 刊期: 2008年第06期

  • SYBR Green I实时荧光定量多重PCR快速筛查葡萄球菌中常见大环内酯类耐药基因

    目的 评价SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合熔解曲线分析快速筛查葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因的可行性,利用此筛查方法了解深圳地区葡萄球菌中大环内酯类耐药基因的分布情况.方法 选取经测序鉴定携带有大环内酯类耐药基因ermA,ermB,ermC,msrA的葡萄球菌,用一个包括这四种耐药基因引物的SYBR Gteen I多重实时荧光定量PCR检测,经荧光定量曲线和熔解温度曲线(Tm值)确证和反应条件优化后建立针对大环内酯类常见耐药基因的初筛体系;随机选取临床136株葡萄球菌,利用此初筛体系对136株葡萄球菌是否携带常见大环内酯类耐药基因进行检测,并对检测结果和表型、电泳、测序结果进行比较,从而对此方法进行评价.对携带有大环内酯类耐药基因的细菌进行基因型别的鉴定,以了解大环内酯类耐药基因的分布情况.结果 此SYBR Green I实时荧光定量多重PCR初筛体系检测葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因与表型检测比较达到94.8%(129/136)的一致性,与琼脂糖凝胶电泳结果和测序结果比较达到100%的一致性.136株葡萄球菌检出msrA,ermA,ermB,ermC四种耐药基因,耐药基因总检出率为75.7%(103/136),并发现多株携带多种大环内酯类耐药基因的葡萄球菌.结论 SYBR Green I实时荧光定量多重PCR可以快速准确地筛查葡萄球菌是否携带有常见的大环内酯类耐药基因;深圳地区葡萄球菌大环内酯类耐药率较高,主要耐药基因是ermC 56.6%(77/136),msrA24.2%(33/136),ermA12.5%(17/136).

    作者:夏成静;黄烈;陆学东;刘键;杨来智;张海燕 刊期: 2008年第06期

  • ZMX988B型全自动洗板机常见故障原因及排除

    我科于2006年2月引进一台北京天石医疗用品制作所生产的ZMX988B型全自动酶标洗板机,该仪器操作简单,使用方便,功能齐全,洗涤效果干净,检测结果准确可靠,维护也十分简单.我们在长期使用过程中遇到以下常见故障现象,并总结出有效的预防排除方法,供同行参考:

    作者:王鹏 刊期: 2008年第06期

  • 血清CEA,CA125,NSE,CYFRA21-1联合检测对肺癌的诊断价值

    目的 探讨血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白片段21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)联合检测对肺癌的诊断价值.方法 采用电化学发光法对78例肺癌(其中鳞癌30例,腺癌28例,小细胞癌20例)、45例肺部良性病患者和36例健康人血清进行分析.结果 肺癌患者血清4种肿瘤标志物含量明显高于肺部良性疾病组(P<0.05)和健康对照组(P<0.01).肺癌组经病理分型后,NSE在小细胞肺癌中的水平明显高于其他类型的肺癌(P<0.05);CYFRA21-1的水平在鳞癌中升高尤为明显(P<0.05);CEA的水平在腺癌中显著升高(P<0.05).4种肿瘤标志物单项检测时,特异度较高(82.22%~95.56%),但敏感度不是很高(38.46%~56.41%).联合检测后,可提高肺癌的阳性检出率(64.10%).结论 CEA,CA125,NSE和CYFRA21-1对肺癌有一定的辅助诊断价值,且CEA,NSE和CYFRA21-1对不同组织类型肺癌均有一定诊断价值,联合检测可提高对肺癌的阳性诊断.

    作者:黄芳;耿燕;李婷婷;张西英 刊期: 2008年第06期

  • 狼疮肾炎相关血清学指标的研究进展

    狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)是SLE常见的临床表现.SLE患者的血清中某些自身抗体的滴度增加与LN有一定的相关性,这些指标可能是构成LN的危险因素.人们还发现抗粒细胞胞浆抗体(ANCA)也参与了肾损害.近年来,研究发现狼疮肾炎患者血清中可出现DNase I活性下降、抗SAP抗体、抗C1q抗体阳性及分泌型IgM的缺失,这些因素形成免疫稳态的紊乱,造成肾组织的免疫沉积和炎性反应,是促成狼疮肾炎的危险因素.各项血清学指标联合应用可提高狼疮肾炎的预测风险率,为早期诊断、早期治疗提供帮助.

    作者:栾海霞;李永哲 刊期: 2008年第06期

  • NaIO4有机药物的化学发光行为研究

    研究了无机含氧酸NaIO4氧化有机物的化学发光行为,发现H3PO4介质中,NaIO4氧化H2O2会产生弱的化学发光,某些本身具有荧光的物质或多羟基酚类物质存在于这个化学发光反应体系中时,能不同程度地增强体系的发光强度.实验还观察到,一些在体系中反应但不产生发光信号或发光信号很弱物质的试液在沸水浴中加热5~10 min,或在试液中加入少量Cu2+或Fe2+并在适当温度下水浴加热5~8 min后,反应会伴随着强烈的发光信号.据此,建立了NaIO4-H3PO4-H2O2-有机物化学发光新体系,结合流动注射技术建立了利用该体系进行药物分析的化学发光新分析法.方法的线性范围在1.0×10-9~5.0×10-6g/ml之间,检出限高可达4.7×10-10g/ml,方法的相对标准偏差(RSD)在2.5%~3.7%(n=11)之间.

    作者:聂峰;翟宝清;吴迎春 刊期: 2008年第06期

  • IL-6水平检测与重症并发感染者的相关性研究

    目的 探讨血清IL-6水平在重症并发感染及非感染者体内的变化规律及意义.方法 放射免疫分析法检测40例APACHE Ⅱ评分≥12分重症并发感染的病人,30例正常对照组,30例重症非并发感染病人血清IL-6水平并进行比较和相关性分析.结果 重症并发感染组血清IL-6水平比重症非并发感染组升高,但该两组的差别无统计学意义(P>0.05),他们与正常对照组比较均升高,差别有统计学意义(P<0.01).重症并发感染组血清IL-6水平与病人的预后呈正相关,与A-PACHE Ⅱ评分呈正相关,与白细胞数均值呈正相关.40例重症并发感染患者中有20例死亡,他们的血清IL-6水平较生存病例高.30例重症非并发感染病人的血清IL-6水平与APACHE Ⅱ评分呈正相关.IL-6水平的灵敏度和特异度分别为80%和90%.APACHE Ⅱ评分为65%和80%.结论 重症患者无论并发感染与否其血清IL-6水平均升高,其升高反应了损伤的严重程度,与预后有较好的相关性,IL-6的灵敏度和特异度更高.

    作者:卫俊杰;刘华;赵有成;王玉明 刊期: 2008年第06期

  • 浙江湖州地区健康成人血清尿酸参考范围的制定

    目的 了解湖州地区健康成人的血清尿酸水平并制定尿酸参考范围.方法 用BS-300全自动生化分析仪检测1080名健康成人血清尿酸浓度,分析其与年龄、性别等因素的关系.结果 1080名健康成人尿酸分布频数,以50μmol/L为组距,列频数表并制作直方图观察男女两组频数分布特征,发现男、女性血清尿酸浓度基本呈正态分布.结论 适合湖州地区尿酸参考范围为:20~49岁,男性207.3~477.3μmol/L;女性157.4~388.6μmol/L;50~85岁,男性211.9~466.3μmol/L,女性175.8~439.2μmol/L.

    作者:黄小华;龚志刚;沈国方;许金春 刊期: 2008年第06期

  • HELLP综合征中血乳酸增高原因探讨

    目的 探讨HELLP综合征患者血乳酸升高的原因.方法 动态追踪观察38例HELLP综合征患者血乳酸变化规律.结果 38例HELLP综合征组,第1,2,3天血乳酸均值为3.91±1.34,4.15±1.93,3.78±1.19 mmol/L,而正常孕妇对照组血乳酸含量为1.16±0.44,1.21±0.47,1.06±0.52 mmol/L,差异有统计学意义(t=12.0,P<0.01;t=9.26,P<0.01;t=11.65,P<0.01).HELLP综合征组血乳酸含量均明显高于正常孕妇组.38例HELLP综合征组,第1,2,3天血乳酸均值间无统计学意义(t=0.46,t=0.95,t=0.54,P均>0.05).其变化规律:38例HELLP患者有36例在病程中出现高乳酸血症,血乳酸含量在3.0~7.2 mmol/L之间,其中入院时存在高乳酸者22例、入院后新出现的高乳酸者14例;38例中36例血乳酸增加程度与病情恶化程度呈正相关,随着病情加重,血乳酸随之增高.结论 HELLP综合征时溶血、肝细胞损害及肾功能受损、剖宫产手术是造成患者血乳酸升高的原因.

    作者:耿素敏;赵勇;李福坤;胡秀敏;吴晶 刊期: 2008年第06期

  • IL-1与选择素CD62L,CD62P,CD62E在小儿早期颅内感染性疾病中的临床意义

    目的 研究白细胞介素及选择素在小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎的临床诊断、治疗、病情转归和判断预后的应用价值.方法 以ELISA法分别检测小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗前以及正常对照组脑脊液白细胞介素1(Interleukine-1,IL-1);用流式细胞仪测定选择素CD62L,CD62P,CD62E含量.并探讨各指标与颅内感染鉴别诊断与预后的关系.结果 小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗前脑脊液IL-1,选择素CD62P,CD62E,CD62L含量较对照组明显升高(P<0.01);急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗后以上各指标明显下降(P<0.05).结论 脑脊液IL-1,选择素CD62L,CD62P,C62E含量水平的变化与颅内感染的临床变化有较密切的关系,可以作为大脑炎症病情变化的监测指标和预后判断指标,同时也为在脑膜炎发病早期使用抗黏附分子抗体及药物治疗提供临床实验依据.

    作者:孙宗钦;陈永生 刊期: 2008年第06期

  • 阴沟肠杆菌对氟喹诺酮类药物防耐药变异浓度的测定

    目的 了解阴沟肠肝菌对3种氟喹诺酮类药物的防耐药突变能力,以指导临床合理用药.方法 采用标准琼脂二倍稀释法测定加替沙星、环丙沙星、氧氟沙星对阴沟肠杆菌的低抑菌浓度(MIC),计算MIC50和MIC90.采用涂布法将总量为1.2×1010CFU的细菌接种于含不同浓度药物的琼脂平皿上,48 h后无菌落生长的低药物浓度即为该药的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC),计算MPC50和MPC90值,并比较MPC90/MIC90.结果 加替沙星(GTF)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFL)的MPC90和MPC90/MIC90分别为6,4,24 μg/ml和8,10.5,6.结论 3种氟喹诺酮类药物大血药浓度几乎都位于MIC和MPC之间,提示单药治疗易导致耐药突变菌株的富集生长,应联合用药以限制细菌耐药的发生.

    作者:茆海丰;张鹏飞 刊期: 2008年第06期

  • LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性

    目的 建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶(LDH)测定法,了解肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的抗肿瘤活性,为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考.方法 采集肿瘤患者和健康成人外周血,常规分离PBMC.体外进行CIK的培养,用LDH释放法分别检测PBMC和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性.结果 肿瘤患者PBMC对K562的杀伤活力比正常人显著降低(P<0.05).经多种细胞因子诱导培养7~10 d后,健康人和肿瘤患者的CIK对K562的杀伤活力都有显著提高(P<0.01),肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人.结论 肿瘤患者PBMC细胞毒活性显著降低,但经诱导培养成CIK后则显著提高.用LDH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力,有助于CIK疗法适应病人的选择及个体疗效观察.

    作者:张蕾;李芳秋;张士新;黄海嵘;李德闵 刊期: 2008年第06期

  • 抗核抗体核型及滴度与免疫球蛋白和补体的关系

    目的 探讨抗核抗体(ANA)核型及滴度与免疫球蛋白和补体的关系.方法 采用散射比浊法对328例抗核抗体阳性患者血清进行免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM)和补体(包括C3,C4)检测,取120例抗核抗体阴性体检者为对照组.针对不同抗核抗体核型及滴度进行分组,分别研究各组免疫球蛋白和补体浓度情况.结果 抗核抗体滴度≥1∶100时,IgG,IgA显著升高(P<0.01),抗核抗体滴度≥1∶3200时,IgM显著升高(P<0.01),抗核抗体阳性各组中,当抗核抗体滴度≥1∶1000时,C3,C4水平显著降低(P<0.01).根据受检者血清中抗核抗体核型进行分组,各组间IgG,IgA,C3,C4水平比较,差异有统计学意义(P<0.01).各核型组IgG,IgA均比对照组显著增高(P<0.01),而C3,C47,有在胞荣型、核颗粒型、核均质型等靶抗原分布较广的核型组显著降低(P<0.01).结论 免疫球蛋白与补体的含量与ANA核型及滴度有一定的关系.

    作者:曹华军;程艳杰;李桂新;徐裕海;杨光晗 刊期: 2008年第06期

  • 急性冠状动脉综合征患者血清金属蛋白酶变化的临床意义

    目的 探讨急性冠状动脉综合征患者金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、屏氧酶1(paranoxonase-1,PON-1)变化的临床意义.方法 以ELISA法和生化方法检测87例急性冠状动脉综合征(ACS)患者、37例稳定型心绞痛(SAP)患者和23例健康人血清MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1.结果 急性心肌梗死(AMI)组和不稳定型心绞痛(UAP)组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1均显著高于对照组(P<0.01),尤其以AMI组高;AMI组、UAP组的检测结果与SAP组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1也存在显著性差异(P<0.01);SAP组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1的含量稍高于健康对照组(P<0.05).结论 MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1在ACS患者血浆中均显著增高,可作为ACS患者诊断的敏感性指标之一.

    作者:俞晓丽;闻平;郭月芳;陈蕾 刊期: 2008年第06期

  • Sysmex KX-21血细胞分析仪空气过滤器致管道堵塞及处理

    日本希森美康公司生产的Sysmex KX-21三分类全自动血细胞分析仪,因为它从设计上把液路系统和气路系统分开减少了故障的发生率,并且利用高压电灼烧产生的空气锤进行排阻降低了阻孔的产生,但它仍然会出现一些同题.近期出现一次较特殊的故障,现将其故障表现及处理过程作一介绍,以供同专业人员参考.

    作者:陈言伟;宋爱玲;郭虹霞;王朝鑫 刊期: 2008年第06期

  • HMGB1 A盒与LBPK95A融合基因的构建和原核表达

    目的 克隆、表达高迁移率族蛋白1 A盒(HMGB1 A box)与LBPK95A的融合基因.方法 经加端-PCR获得HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.该基因克隆到pGEX-4T-2载体中转化TOP10感受态细胞,测序鏊定.将A-LBP质粒转化E.coli BL21,30℃诱导表达4 h,超声裂解后经GSTrap FF蛋白纯化柱纯化,进行SDS-PAGE分析.结果 DNA测序证明,获得了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.SDS-PAGE分析表明,A-LBP融合蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的28%,GSTrap FF纯化后获得目的蛋白.结论 成功表达和纯化了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合蛋白.

    作者:姜南艳;于文彬;苏明权;沈建军;李立文;郝晓柯;张惠中 刊期: 2008年第06期

  • 聚醇醚碘消毒液杀菌效果及稳定性试验观察

    目的 观察聚醇醚碘的杀菌效果及稳定性.方法 采用悬液定量杀菌试验及37℃保存试验进行了实验观察研究.结果 以含有效碘300 mg/L的聚醇醚碘对悬演内金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌作用1 min,杀灭对数值均>5.00;对白色念珠菌作用1 min,杀灭对数值均>4.00;以原液涂擦皮肤表面作用1 min,对自然菌的杀灭对数值均>1.00;将该消毒液原包装于37℃恒温保存3个月,有效碘含量下降率为2.82%.结论 该消毒液杀菌效果良好,性能稳定.

    作者:刘小娥;王继红;苏宝凤;苍金荣 刊期: 2008年第06期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院