学术投稿

食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析

王朝阳;许丽艳;荣举;韩溟;吉坤美;沈忠英;李恩民

关键词:基因, 重组融合蛋白类/生物合成, 大肠杆菌, 基因表达
摘要:目的:筛选出能高效表达且可溶性好的NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)融合表达载体.方法:将NGAL cDNA全长片段分别定向克隆到表达载体的BamHI+EcoRI位点,构建NGAL基因的4种融合表达载体,然后分别转化大肠杆菌并进行IPTG诱导小样表达,监测各NGAL融合蛋白在不同诱导时间内的表达量及其可溶性等.选择pHis-NGAL 和 pDsbA2.0-NGAL进行IPTG诱导大样表达,通过SDS-PAGE比较表达产物的量与可溶性.结果:成功构建出4种NGAL融合表达载体.经IPTG诱导小样表达后,4种载体的表达水平及其可溶性明显不同,DsbA2.0-NGAL、His-NGAL和 Trx-NGAL融合蛋白表达量分别占菌体总蛋白的33.3%、32.3%、28.7%,而它们的可溶性部分分别占各自总NGAL融合蛋白的96.8%、95.3%和63.0%.对pDsbA2.0-NGAL和pHis-NGAL进行IPTG诱导大样表达后发现,DsbA2.0-NGAL融合蛋白的表达量与可溶性较好.结论:pDsbA2.0-NGAL表达载体是能高效表达且可溶性好的NGAL融合蛋白表达载体.
中华肿瘤防治杂志相关文献
  • 肿瘤分子分期的应用前景

    肿瘤的分子分期是当代肿瘤学的新概念,对肿瘤的预防、治疗、预后都较以往的临床分期具有更大的实用价值,随着分子分期的临床应用,肿瘤治疗学必将开始新的篇章.

    作者:于志勇;左文述;吴泰璜 刊期: 2003年第10期

  • 畸胎瘤螺旋CT诊断与病理对照分析

    收集经螺旋CT诊断及手术病理证实的畸胎瘤30例,均行螺旋CT平扫+增强扫描和病理组织学检查,并将螺旋CT表现与病理表现进行对照分析.结果良性囊性畸胎瘤28例,恶性畸胎瘤2例.CT扫描对于瘤内的脂肪、钙化以及类似牙齿和骨骼状组织等多种成分均可清楚显示,对于灶周的转移病灶亦可较全面的显示.螺旋CT表现与手术病理表现基本一致.

    作者:曾庆勇;何志辉;蓝博文;杨清绪 刊期: 2003年第10期

  • 血管内皮生长因子表达水平与非小细胞肺癌的预后

    目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)表达水平及与预后的关系.方法:应用 SABC 免疫组化方法检测 58 例 NSCLC 中 VEGF 表达情况,并结合随访资料进行分析.结果:NSCLC 中 VEGF 阳性率为 75.86%,明显高于癌旁正常肺组织(20.00%),P<0.01.NSCLC 中 VEGF 表达与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移情况显著相关.VEGF 表达阴性组 1、3、5 年生存率分别为 92.8%、85.7%、71.4%,弱阳性组分别为 87.5%、62.5%、41.6%,强阳性组分别为 85.0%、35.0%、15.0%,经 Log-Rank 时序检验,差异有显著意义.COX 回归多因素分析提示,VEGF 表达水平是死亡的危险因素,即表达水平越高,预后越差.结论:VEGF 可作为临床上预测 NSCLC 预后的可靠指标,是影响预后的独立因素.

    作者:崔言刚;王潍博 刊期: 2003年第10期

  • 双吻合器在直肠癌低位前切除术中的应用及并发症分析

    分析1999年4月以来采用双吻合器技术治疗的中低位直肠癌30例的疗效,肿瘤复发及并发症的发生与预防情况.30例中近期均有不同程度的腹泻,无远期排便障碍;术后1例局部复发;吻合口瘘1例;吻合口狭窄1例;炎性肉芽肿1例.双吻合器技术的应用可以扩大Dixon手术适应证的范围,但必须严格掌握根治原则及无瘤原则.

    作者:孙民昌;侯新丽;燕归如;刘小明;赵立志 刊期: 2003年第10期

  • 艾迪序贯治疗中晚期肝癌疗效观察

    目前,肝动脉插管化疗栓塞术(TAE)用于治疗中晚期肝癌已成为中晚期肝癌的首选治疗方法,经TAE治疗后,多数患者的临床症状改善,肿瘤体积缩小在2/3以上,但完全消失困难,而且每次隔1个月治疗缺乏连续用药,对癌细胞控制不力.为此,我们进行了TAE静脉滴入艾迪序贯治疗中晚期肝癌的临床研究,结果总结报道如下.

    作者:袁胜安;李明东;黄坤明;石磊;于峰;李淑芳 刊期: 2003年第10期

  • E-cadherin与CD44V6及nm23蛋白在鼻咽癌中的表达及临床病理学意义

    目的:探讨E-cadherin、nm23及CD44V6蛋白与鼻咽癌(NPC)的组织病理,转移及预后的关系.方法:采用Elivision免疫组织化学方法检测其59例鼻咽癌组织中E-cadherin、nm23及CD44V6基因产物的表达情况,分析它们与鼻咽癌患者的病理分型、颈部淋巴结转移情况、分期,以及生存期的关系.结果:E-cad蛋白在角化型鳞状细胞癌、分化型非角化性癌和未分化型癌组中的缺失表达率分别为1/7、41.8%(14/34)、72.2%(13/18),P<0.05.nm23蛋白保留表达组颈部淋巴结转移率为23.8%(5/21),缺失表达组为86.8%(33/38),P<0.05.其中在Ⅲ期鼻咽癌(25例)中,CD44V6蛋白阳性表达组和阴性表达组5年生存率分别为15.4%(2/13)和66.7%(8/12),P<0.05;nm23蛋白保留表达和缺失表达组的5年生存率分别为6/9和25.0%(4/16),P<0.05.结论:E-cad蛋白表达与鼻咽癌的分化有关,nm23蛋白表达与鼻咽癌的颈淋巴结转移有关;CD44V6蛋白阳性表达及nm23蛋白缺失表达是鼻咽癌预后不良的因素.

    作者:马长春;李德锐;吴名耀;吴贤英 刊期: 2003年第10期

  • 奥沙利铂与氟尿嘧啶及亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌

    目的:研究奥沙利铂(L-OHP)与氟尿嘧啶(5-FU)及亚叶酸钙(CF)联合应用治疗晚期大肠癌的疗效和毒副反应.方法:采用L-OHP 130 mg/m2,静脉滴入2 h,d1;CF 200 mg/m2,静脉滴入2 h,d1~d5;5-FU 300 mg/m2(≤500 mg/d),静脉滴入4 h,d1~d5(CF滴完后);21 d为1个周期.结果:总有效率为30%,毒副反应以骨髓抑制、感觉神经毒性为主,白细胞下降发生率为45%,神经毒性发生率80%,本组无Ⅳ度毒副反应.结论:L-OHP、5-FU、CF联合应用治疗晚期大肠癌疗效肯定,毒副反应能耐受.

    作者:徐洪祥;尹淑燕 刊期: 2003年第10期

  • 化放疗联合治疗晚期子宫颈癌疗效观察

    目的:观察化疗加放疗治疗晚期子宫颈癌的疗效.方法:100例患者均经病理证实为宫颈癌,50例接受CFP方案或CMP方案化疗,1~3个疗程后放疗.配对抽取单纯放疗患者50例供疗效对比观察.结果:单放组和化放组5年生存率分别为46.0%和66.0%,P<0.05;Ⅲ期5年生存率化放组高于单放组,P<0.05.化放组副作用主要是胃肠反应及骨髓抑制,单放组副反应不明显.结论:化放疗联合治疗晚期子宫颈癌疗效优于单纯放射治疗.

    作者:邵学叶;杨兆禄;赵明军 刊期: 2003年第10期

  • 局部晚期和晚期非小细胞肺癌的治疗新观点--来自第39届ASCO年会的报告

    局部晚期和晚期非小细胞肺癌一直是治疗上的难点.对2003年ASCO大会有关这一方面的进展作概要性的综述.

    作者:吴一龙 刊期: 2003年第10期

  • 端粒酶基因在脑胶质瘤中的原位表达

    目的:研究端粒酶基因(hTR)在脑胶质瘤中的原位表达状况及其与分型、分级的关系,评估其对胶质瘤诊断的价值.方法:用原位杂交技术检测了79例甲醛固定、石蜡包埋的胶质瘤蜡块标本中端粒酶基因(hTR)的表达状况并分析与组织学分级、WHO分型之间的关系.用ABC法检测PCNA的表达.6例正常脑组织作对照.结果:端粒酶基因(hTR)在脑胶质瘤中的检出率为59.2%(47/79).端粒酶基因(hTR)在胶质瘤组织学分级中的分布为Ⅱ级11/32,Ⅲ级12/20,Ⅳ级24/27,各级胶质瘤组间比较,差异有显著意义,P<0.05.端粒酶基因(hTR)的表达强度与胶质瘤的组织学分级、WHO分型之间有相关性,P<0.05,Ⅲ级、Ⅳ级的检出率明显高于Ⅱ级.正常脑组织中未检出端粒酶基因.端粒酶阳性组与阴性组PCNA阳性细胞密度差异有显著意义,P<0.05.结论:胶质瘤中端粒酶基因(hTR)表达状况可能与胶质瘤的分化程度、组织学分级相关,提示端粒酶基因的过表达可能对胶质瘤的演化和进展具有一定重要作用,并可能作为胶质瘤的一个新的诊断标志物,结合PCNA评价胶质瘤的生物学行为更为可靠.

    作者:王东林;施公胜;鄂群;黄华 刊期: 2003年第10期

  • 青年女性乳腺癌预后因素分析

    目的:探讨<30岁青年乳腺癌的PCNA和p53蛋白表达的意义及与临床各指标和预后的关系.方法:采用免疫组化S-P法对66例<30岁的青年乳腺癌进行检测,用有关统计学方法结合随访资料进行分析.结果:<30岁青年乳腺癌的PCNA阳性率为63.6%,p53表达率为43.9%;PCNA蛋白表达阳性与月经初朝年龄(P=0.028)、临床分期(P=0.016)、核组织分级(P<0.05)、腋淋巴结转移(P<0.000 1)、雌孕激素受体(P<0.01)及预后(P<0.01)有密切关系;p53蛋白表达仅与核组织分级(P=0.038)、腋淋巴结转移(P=0.018)及预后(P<0.01)有关.结论:1)PCNA可以反映青年乳腺癌细胞的增殖活性,并与预后有关.2)p53为预测青年乳腺癌预后的一个有价值的客观标记物.3)<30岁青年乳腺癌细胞增殖活性强、预后差,其细胞增殖活性可能与激素水平有关.

    作者:耿翠芝;王小玲;王桂兰;杨会钗;林梅;吴祥德 刊期: 2003年第10期

  • Fas和FasL及Caspase-8在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

    目的:研究Fas、FasL及Caspase-8在宫颈癌组织中的表达及其临床意义,探讨Fas系统在宫颈肿瘤细胞免疫逃避中的作用.方法:采用免疫组化S-P法检测52例宫颈癌、18例宫颈上皮内瘤样病变、10例慢性宫颈炎及10例正常宫颈上皮Fas、FasL和Caspase-8蛋白表达情况.结果:Fas及FasL在宫颈癌中的表达与在慢性宫颈炎及正常组织中表达差异有显著意义;Fas阳性表达率随着组织学分级的升高而降低,FasL则增高,P<0.01;Fas及FasL与患者的年龄和临床分期无关,P>0.05.Caspase-8在宫颈癌中的表达明显低于正常宫颈上皮及慢性宫颈炎,P<0.01;Caspase-8表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及组织学类别无关.结论:宫颈癌能通过Fas、Caspase-8低表达及FasL高表达逃避机体免疫监视以促使肿瘤发生发展及转移.

    作者:杨文武;洛若愚;刘元姣;张蔚 刊期: 2003年第10期

  • 食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析

    目的:筛选出能高效表达且可溶性好的NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)融合表达载体.方法:将NGAL cDNA全长片段分别定向克隆到表达载体的BamHI+EcoRI位点,构建NGAL基因的4种融合表达载体,然后分别转化大肠杆菌并进行IPTG诱导小样表达,监测各NGAL融合蛋白在不同诱导时间内的表达量及其可溶性等.选择pHis-NGAL 和 pDsbA2.0-NGAL进行IPTG诱导大样表达,通过SDS-PAGE比较表达产物的量与可溶性.结果:成功构建出4种NGAL融合表达载体.经IPTG诱导小样表达后,4种载体的表达水平及其可溶性明显不同,DsbA2.0-NGAL、His-NGAL和 Trx-NGAL融合蛋白表达量分别占菌体总蛋白的33.3%、32.3%、28.7%,而它们的可溶性部分分别占各自总NGAL融合蛋白的96.8%、95.3%和63.0%.对pDsbA2.0-NGAL和pHis-NGAL进行IPTG诱导大样表达后发现,DsbA2.0-NGAL融合蛋白的表达量与可溶性较好.结论:pDsbA2.0-NGAL表达载体是能高效表达且可溶性好的NGAL融合蛋白表达载体.

    作者:王朝阳;许丽艳;荣举;韩溟;吉坤美;沈忠英;李恩民 刊期: 2003年第10期

  • 人非小细胞肺癌组织p63和p73的表达及意义

    目的:探讨p53家族新成员p63和p73在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法:利用免疫组化S-P法对60例NSCLC和7例正常肺组织检测p63和p73基因的蛋白表达.结果:在NSCLC中,p63和p73蛋白表达的阳性率分别为80.0%(48/60)、73.3%(44/60);与正常肺组织相比,p63和p73蛋白阳性表达的差异均有显著意义,P<0.05.p63蛋白表达与肺癌组织学类型(P=0.000 3)和淋巴结转移有关,P=0.028;而与分化程度和临床分期无关,P>0.05.p73蛋白表达与肺癌组织学类型、淋巴结转移、分化程度和临床分期均无关,P>0.05.在肺癌中,p63蛋白和p73蛋白表达之间呈显著正相关,P=0.000 1.结论:p63和p73高水平的表达协同促进肺癌的形成,p63是肺鳞癌恶性进展的一个标志物.

    作者:陈洪雷;陈福春;王敏;陶鸿潮;张玉霞;叶波;刘铭球 刊期: 2003年第10期

  • 皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤的诊断及文献复习

    目的:观察皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床表现并分析SPTCL的病理组织学形态、诊断及鉴别诊断.方法:报道3例发生在四肢、躯干的多发性病灶的病例,从临床病理组织学及免疫组化、临床表现等方面进行了观察.结合文献,探讨SPTCL的发病学、临床表现、实验室检查、治疗及转归.结果:SPTCL主要表现四肢、躯干皮肤水疱、皮下结节、多发溃疡.2例合并噬血细胞综合征,临床进展迅速,于发病后4个月及8个月内死亡.组织病变均呈脂膜炎样改变,瘤细胞主要浸润皮肤真皮及皮下组织,瘤组织可见明显大片状坏死,肿瘤细胞浸润血管壁并见血管壁的凝固性坏死.免疫组化肿瘤细胞LCA、CD45R0阳性,证实瘤细胞为T细胞型.结论:SPTCL是一种特殊类型的皮肤原发性恶性肿瘤,具有特殊生物学行为,预后差.

    作者:马涛;韩恩善;王宁菊 刊期: 2003年第10期

  • 高龄胃癌患者临床病理学特点分析

    分析高龄胃癌的临床、病理特点.对所有病例按年龄分组≥70岁,60~69岁,31~59岁,≤30岁,高龄胃癌与各组之间对照观察.结果提示高龄胃癌发病率男性高于女性,组织学类型以高分化腺癌为主,占64.7%.Ⅲ、Ⅳ期病例占86.3%.手术切除率为62.7%.3年、5年生存率分别为20.9%和13.9%.临床分期较晚是高龄胃癌预后差的重要原因.X线双重造影及纤维胃镜是高龄胃癌早期诊断的重要方法.尽可能手术切除以提高生存率.

    作者:苗瑞政;姜言明;张敏 刊期: 2003年第10期

  • 微波治疗口咽部乳头状瘤80例

    口咽部乳头状瘤多发生于悬雍垂、软腭、腭弓、舌部及扁桃体表面.常规治疗方法为手术切除,术中常易出血.2000年12月-2002年12月,我院对门诊收治的口咽部乳头状瘤患者80例采用微波疗法治疗,取得满意疗效,总结报道如下.

    作者:张淑娟;齐斌 刊期: 2003年第10期

  • 多发性肝占位的鉴别诊断--附肝脓肿2例报道

    影像学证实存在多发性肝占位的患者,临床上往往首先考虑为原发或转移性肝癌,有时甚至接受抗肿瘤综合治疗,给患者身心健康及经济造成损失.2002年8月-2002年11月,2例多发性肝占位中年患者经肿瘤科等科室会诊终确诊为肝脓肿并治愈,报道分析如下.

    作者:邹征云;刘宝瑞 刊期: 2003年第10期

  • 食管高分化平滑肌肉瘤一例

    1 病例报告患者男性,65岁.进食梗噎2个月,加重20天,于2003年4月28日入院.查体:胸廓对称,呼吸动度一致.心脏无明显异常.生化检查:总蛋白56.00 g/L,白蛋白27.00 g/L,白/球0.90.胸部CT检查:食管中段(隆突平面)后壁可见较大的软组织肿块突入管腔使其基本闭塞.

    作者:蔺小倩 刊期: 2003年第10期

  • 三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

    目的:应用体外培养的肝癌细胞株(SMMC-7721)观察砷剂(As2O3)的凋亡诱导作用.方法:采用MTT 法检测As2O3对肝癌细胞增殖的影响,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响.结果:As2O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量-时效关系;As2O3可使肝癌细胞周期改变,与浓度有关,与作用时间未见明显关系;As2O3诱导肝癌细胞发生凋亡,并与浓度、时间有关.结论:As2O3能抑制肝癌细胞增殖,改变肝癌细胞周期,诱导肝癌细胞凋亡.

    作者:苏颖;陈增;邹长棪;林可焴;林华妹 刊期: 2003年第10期

中华肿瘤防治杂志

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主管:齐鲁肿瘤杂志;肿瘤防治杂志;当代肿瘤学杂志

主办:国家卫生和计划生育委员会