廖新学；杨春涛；杨战利；李建平；王礼春；黄雪；郭瑞鲜；陈培熹；冯鉴强
目的 从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase of Naja atra venom, NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用.方法 应用阳离子交换层析和亲和层析方法 分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及细胞小管形成实验观察NAV-LAAO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长和血管生成的影响.结果眼镜蛇毒粗毒经两步层析法得到的LAAO,分子量约为58 ku.NAV-LAAO抑制HUVEC细胞的生长和细胞小管形成,其抑制细胞生长的IC50为21.42 mg*L-1 .与对照组相比,LAAO组caspase-3、caspase-8升高.结论 应用两步层析法从眼镜蛇毒中分离出的NAV-LAAO具有剂量依赖性的抑制HUVEC细胞的生长和影响细胞小管形成的作用.
作者：陈洲；黄剑钧；薛玲；许云禄；林丽珊 刊期： 2009年第08期
谷氨酸的过量释放在多种神经系统疾病的发生发展过程中发挥着重要作用.虽然离子型谷氨酸受体拮抗剂在动物模型中取得了一定的治疗效果,但因其同时阻断了正常的兴奋性传递,限制了这类化合物的临床应用;而mGluRs通过突触前机制抑制谷氨酸的释放,有望成为某些神经系统疾病治疗的新靶点.该文就近年来国内外mGluRs在这些神经疾病中的研究进展作一综述.
作者：龙锐；杜俊蓉 刊期： 2009年第08期
目的 探讨钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)藻蓝蛋白(C-phycocyanin,CPC)对体外人宫颈癌细胞(HeLa细胞)凋亡的影响及分子机制.方法 首先通过MTT法检测藻蓝蛋白对HeLa细胞增殖的影响,然后通过电镜观察藻蓝蛋白处理后的细胞的凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA结构变化,流式细胞仪显示不同浓度藻蓝蛋白对HeLa细胞的细胞周期变化的影响,免疫组化法检测藻蓝蛋白对细胞表面凋亡相关基因表达的影响,检测凋亡相关的caspase的活性及细胞色素C的释放,以揭示藻蓝蛋白诱导HeLa细胞凋亡的作用机制.结果与未用藻蓝蛋白作用的对照组相比,藻蓝蛋白组的HeLa细胞存活率明显降低,并存在浓度剂量效应.藻蓝蛋白处理后的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞皱缩、细胞膜微绒毛消失、起泡,染色体密集,形成凋亡小体.凋亡细胞的DNA出现断裂,呈梯状的电泳带(DNA ladder),分子量为180～200 bp及其倍体.并且发现藻蓝蛋白处理后的处于亚二倍体峰HeLa细胞数蛋白浓度随藻蓝蛋白浓度的增高而明显增多.另外藻蓝蛋白能促进HeLa细胞内促凋亡基因(Fas、ICAM-1)的表达并抑制抗凋亡基因(Bcl-2)的表达,从而促进细胞内凋亡信号的传导.藻蓝蛋白可以激活caspase酶并可促进凋亡蛋白--细胞色素C从线粒体到细胞质释放.结论 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白具有诱导体外HeLa细胞凋亡的作用,通过促进凋亡信号在HeLa细胞内的传导从而达到抗肿瘤的效果.
作者：李冰；褚现明；高美华；张学成 刊期： 2009年第08期
目的 观察H2S对氯化钴 (CoCl2) 诱导的H9C2心肌细胞缺氧性损伤的影响,探讨其作用机制.方法 用CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型.NaHS(H2S的供体)在CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cleaved Caspase-3的表达;GSSG试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH) 的比值;双氯荧光素 (DCFH-DA) 染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS);罗丹明123 (Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位 (MMP).结果在400～800 μmol·L-1浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地降低细胞存活率.在600 μmol·L-1 CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min,应用400 μmol·L-1 NaHS可明显地抑制CoCl2对细胞的损伤作用,使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3表达降低;并使H9C2心肌细胞内GSSG/(GSH+GSSG) 比值及ROS水平明显降低,同时明显地改善MMP.结论 H2S能明显地对抗化学性缺氧诱导的心肌细胞损伤,此保护作用与其降低GSSG/(GSH+GSSG)比值和ROS水平,改善MMP,抑制Caspase-3活化等机制有关.
作者：廖新学；杨春涛；杨战利；李建平；王礼春；黄雪；郭瑞鲜；陈培熹；冯鉴强 刊期： 2009年第08期
目的 探讨脑内灌流6-羟基多巴胺(6-OHDA)对大鼠纹状体细胞外液氨基酸类神经递质的影响以及美多芭的作用.方法 SD大鼠,随机分为对照组、模型组及美多芭高、低剂量组.采用微透析技术脑内灌流6-OHDA造模,邻苯二甲醛柱前衍生,高效液相-荧光检测技术,动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液氨基酸神经递质水平.结果 6-OHDA脑内灌流40 min后,模型组大鼠纹状体细胞外液谷氨酸(Glu)浓度有4个时间点、γ-氨基丁酸(GABA)浓度有1个时间点、牛磺酸(Tau)浓度有8个时间点较对照组升高(P<0.05或P<0.01).美多芭高、低剂量组与模型组比较分别有5个和4个时间点Glu浓度降低、有7个和2个时间点GABA水平升高(P<0.05或P<0.01).结论 6-OHDA脑内灌流引起大鼠纹状体细胞外液氨基酸类神经递质变化,美多芭可以剂量依赖性地抑制其引起的Glu升高,并进一步增加GABA的浓度.
作者：焦玥；王丹巧；吴兆恩；范斌；彭娟；汪晓燕 刊期： 2009年第08期
HIV-1病毒包膜蛋白gp120和gp41在病毒感染中起着重要的作用.在病毒进入细胞的过程中,gp120先和CD4分子结合,发生构象改变,进而导致gp41构象的变化,使病毒包膜和细胞膜融合而感染细胞.与gp120或者gp41相结合的多肽、大分子和小分子化合物,都可能影响HIV-1病毒包膜和靶细胞膜结合的过程,从而起到抗HIV-1病毒的作用.该文对gp120和gp41的结构及其相互作用,以及以HIV-1包膜糖蛋白为靶点的病毒进入抑制剂类抗艾滋病药物进行综述.
作者：夏承来；姜世勃；刘叔文 刊期： 2009年第08期
目的 比较雌激素及植物雌激素对去卵巢大鼠子宫组织VEGF和形态表达的影响.方法 48只Wistar大鼠随机分为8组:假手术组(Sham)、去卵巢组(Ovx)、17β-雌二醇组(Ovx+Est)、17-β雌二醇+黄体酮组(Ovx+Est+Pro)、黄体酮组(Ovx+Pro)、染料木素组(Ovx+Gen)、白黎芦醇组(Ovx+Res)、根皮素组(Ovx+Phl).给药21 d,用蛋白免疫印迹法观察各组子宫VEGF的表达、并用免疫组化对VEGF的表达部位和其形态学变化进行观察.结果与Sham 组比较,Ovx组的VEGF表达下调;与Ovx比较,Ovx+Est和Ovx+Est+Pro两组VEGF表达均明显上调.Gen、Res和Phl对卵巢切除大鼠VEGF无影响.大鼠卵巢切除后,子宫明显萎缩且重量下降.皮下注射Est或Est合并Pro后,子宫组织密度增加,子宫被覆上皮细胞和腺体明显增生.皮下注射Gen和Phl后,子宫形态变化类似卵巢切除大鼠,注射Res可促进去卵巢大鼠子宫腺体的增生,但作用没有雌激素强.结论 雌孕激素使 VEGF 表达明显上调;植物雌激素Res有促进腺泡增生作用.
作者：杨丽娜；段颖；张英福；田治锋；邱小青；李红芳 刊期： 2009年第08期
目的 研究五甲基槲皮素(PMQ)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所诱导的大鼠心肌间质纤维化的作用及其机制.方法 SD大鼠30只随机分为5组,试验持续21 d.①空白组:每晨生理盐水灌胃;② PMQ组:每晨PMQ 50 mg*kg-1灌胃;③ AngⅡ组:于d 15开始皮下注射AngⅡ 288 μg*kg-1*d-1;④ PMQ+AngⅡ组:PMQ和AngⅡ处理同前;⑤溶剂+AngⅡ组:每晨溶剂灌胃,AngⅡ处理同前.d 22处死大鼠,测量心肌羟脯氨酸含量,SOD活力、MDA含量,RT-PCR检测collagenⅠ、collagenⅢ及NADPH oxidase亚单位Nox2和p47phox mRNA的表达,免疫组化测collagenⅠ、collagenⅢ容积分数(CVF)及其比值CVFⅠ/CVFⅢ.结果 AngⅡ能明显提高大鼠心肌羟脯氨酸含量,上调collagenⅠ、collagenⅢ及NADPH oxidase亚单位Nox2和p47phox的mRNA表达,增加collagenⅠ、Ⅲ容积分数及CVFⅠ/CVFⅢ比值,并降低心肌SOD活力、增加MDA含量.PMQ能明显抑制AngⅡ引起的上述改变.结论 PMQ能对抗AngⅡ引起的心肌间质纤维化,此效应可能与其抗氧化及下调NADPH oxidase mRNA表达有关.
作者：毛张凡；孙宗全；杜心灵 刊期： 2009年第08期
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者蛋氨酸合酶(MTR)A2756G、蛋氨酸合酶还原酶(MTRR)A66G基因多态性与甲氨蝶呤(MTX)治疗的疗效和不良反应相关性.方法 采用实时荧光定量PCR方法 检测107例单用MTX的RA患者的MTR A2756G及MTRR A66G基因多态性,并与其治疗疗效和不良反应结合分析.结果 MTR A2756G及MTRR A66G的单基因多态性与RA患者服用MTX的疗效及不良反应无相关性(P>0.05).两基因联合作用分析显示,同时是MTR AG型和MTRR AG/GG型者较同时是MTR AA型和MTRR AA型的RA患者对MTX治疗效果差(OR=0.19,95%可信区间为0.04～0.88),差异有统计学意义(P=0.03),没有发现两者联合作用与其不良反应有相关性(P>0.05).结论 MTR和MTRR基因多态性可能对于RA患者服用MTX的疗效存在预示作用.
作者：申世华；徐建华；徐胜前；连莉；李迎伟；肖会 刊期： 2009年第08期
目的 研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度((FI-FI0)/FI0,%;FI0:对照;FI:给药)表示.结果①茶黄素(10,20,40 μmol·L-1)对正常台氏液中心肌细胞内游离钙浓度没有影响,却可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加.②预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可大部分取消茶黄素(20 μmol·L-1) 在模拟缺血液中的作用.③茶黄素( 20 μmol·L-1)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加.④当细胞外液钙浓度由1 mmol·L-1增加到10 mmol·L-1而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,茶黄素(20 μmol·L-1 )可降低钙波发生的频率和持续时间,终阻断钙波并降低[Ca2+]i.结论 茶黄素可抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网的内钙释放从而降低[Ca2+]i.
作者：马会杰；马慧娟；李茜；袁芳；张翼 刊期： 2009年第08期
Visfatin由Fukuhlara等[1]2005 年发现,主要由内脏脂肪分泌.具有促进脂肪形成、降低血糖等类胰岛素作用,与肥胖、2型糖尿病有着密切联系.吡格列酮改善胰岛素抵抗的部分机制可能是通过调节脂肪因子的产生[2].本研究通过高脂喂养建立肥胖SD大鼠实验模型,用吡格列酮干预来观察其对visfatin表达的影响,探讨吡格列酮改善胰岛素敏感性的可能作用机制.
作者：吕齐欢；王佑民；丁晓洁；程媛 刊期： 2009年第08期
目的 构建含人/鼠嵌合粘附分子CD44拼接变异体6(chimeric human and mouse CD44 splice variant 6,h/mCD44v6)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,并进行表达.方法 通过PCR扩增h/mCD44v6的全基因cDNA,将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6细胞株中h/mCD44v6全段基因cDNA.结果经4轮PCR,成功扩增出h/mCD44v6的cDNA全长基因,成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,通过RT-PCR方法 证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6.结论 成功克隆和构建了h/mCD44v6的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,为进一步研究h/mCD44v6的新功能和免疫治疗奠定了基础.
作者：许铁峰；夏立平；陈兴；阎瑾琦；于继云 刊期： 2009年第08期
车前子多糖(polysaccharides isolated from the seed of Plantago asiatica L,PLPS),是车前子中含量较高且极具开发价值的生物活性物质之一.研究表明[1],PLPS的持水性、吸水膨胀能力强,具有润肠通便、降血糖、降血脂、免疫调节活性等功效.
作者：陈一晴；聂少平；黄丹菲；韩澄；谢明勇 刊期： 2009年第08期
目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用.方法 将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法 转染HEK293T细胞;在 5 μmol·L-1 的 As2O3孵育 48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法 检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及 JNK的表达变化.结果 5μmol·L-1 As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组.结论 SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关.
作者：司云凤；祝晓春；孙东升；齐琦；王果元；金成艳；王丽娜；徐长庆；田野；张力 刊期： 2009年第08期
目的 观察异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的心肌细胞凋亡的影响并探讨可能的机制.方法 采用SD新生大鼠进行心肌细胞原代培养.实验分为5组:正常对照组、t-BHP组和异丙酚1、10、30 μmol·L-1组.分光光度计法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物岐化酶(SOD)活性;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞线粒体活性,罗丹明123(Rhodamine123)荧光染色、流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3的表达.结果与正常对照组相比,100 μmol兰州大学基础医学院生理学教研室;甘肃省新药临床前研究重点实验室·L-1的t-BHP处理心肌细胞4 h后,细胞内GSH水平明显下降(P<0.05),MDA含量增加(P<0.01),抗氧化酶SOD活性降低(P<0.01),细胞线粒体活性降低(P<0.01),线粒体膜电位ΔΨm明显下降(P<0.01),细胞凋亡率和caspase-3 的表达明显升高(P<0.01);异丙酚10、30 μmol·L-1能减少过氧化氢所致的细胞中MDA含量升高;提高SOD活性和GSH水平;提高线粒体活性、膜电位;抑制心肌细胞凋亡和caspase-3 的表达升高(P﹤0.05,P﹤0.01).结论 异丙酚能减弱过氧化氢所致的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是通过减少活性氧自由基导致的细胞膜氧化损伤、提高线粒体活性、维持线粒体的膜电位,从而抑制心肌细胞凋亡的发生.
作者：赵松；解丽君；张建新；李兰芳 刊期： 2009年第08期
多糖具有较强的免疫调节及抗肿瘤作用,已经成为肿瘤治疗的研究热点之一.目前,从海洋中获得了越来越多结构新颖、作用独特的活性多糖,有望成为肿瘤治疗中新的药物资源,该文通过对国内外相关文献进行检索,综合了国内外近年来的研究,对近年来海洋多糖的抗肿瘤作用机制的研究进展作一概述.
作者：周庆峰；李明月；那广水；李成伟 刊期： 2009年第08期
目的 应用Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODNs,ASPO)靶向诱导20例原代急性白血病细胞凋亡,并与多种常用化疗药联合,观察ASPO对原代急性白血病细胞及HL60细胞系的协同效应.方法 ①应用MTT比色法分析ASPO与常用化疗药物配伍协同作用特点;②细胞免疫化学染色检测 P26 Bcl-2蛋白表达;③台盼蓝拒染试验检测白血病细胞倍增时间;④丫啶橙(AO)染色, 流式DNA Content分析细胞凋亡率,电镜及DNA电泳观察凋亡细胞形态及分子水平的变化.结果① ASPO与除DNR,NVT外的7种(HHRT,VCR、MTX、Ara-c、 VP16、ACR、DEX)化疗药物均有联合增强或相加作用.② 12例Bcl-2蛋白抑制率大于0.4为A组,8例小于0.4为B组.A组的凋亡率和B组的凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),且A组的凋亡率高于B组(P<0.05).③原代急性白血病细胞ASPO组,Ara-c组和ASPO+Ara-c组,72 h细胞生长抑制检测发现ASPO+Ara-c组的细胞抑制率高于单用ASPO与单用Ara-c的细胞抑制率之和(P<0.01);④ A组的ASPO对细胞的抑制与细胞生长的倍增时间102.89±37.97呈正相关γ=0.577(P<0.05).结论 Bcl-2 ASPO能特异抑制白血病细胞(系)的Bcl-2蛋白表达;Bcl-2 ASPO 对倍增时间慢、BCL-2 蛋白表达高的原代白血病细胞作用效果好;Bcl-2的ASPO与多种化疗药物联合有潜在临床应用前景.
作者：林艳娟；吕联煌；陈志哲；张臣青；林振兴 刊期： 2009年第08期
目的 利用Caco-2和MDCK细胞单层模型研究绿原酸(chlorogenic acid,CGA)的跨细胞转运过程及其机制.方法 ① Caco-2和MDCK细胞单层模型建立:Caco-2、MDCK细胞分别按密度1×105、5×104个细胞/cm2接种到Millicell-CM culture plate inserts上培养,待细胞单层达到一定致密程度后进行透过实验.②透过实验:用M2e酶标仪测定CGA在不同方向、不同浓度下的跨细胞转运情况并计算累积透过量.结果在两种细胞模型上CGA均有不同程度的双向跨细胞转运(吸收和分泌),P-gp抑制剂维拉帕米能明显减少CGA的分泌.结论 CGA跨细胞转运同时存在吸收和分泌的动力学过程.P-gp部分参与CGA的分泌机制.
作者：葛建丹；陈媚；宋必卫 刊期： 2009年第08期
目的 研究新型钙通道阻断剂盐酸双苯氟嗪在Beagle犬的药代动力学.方法 Beagle犬18只,随机分为低、中、高3个剂量组,分别单次股静脉注射1.5、3.0和6.0 mg·kg-1的盐酸双苯氟嗪溶液,后肢股静脉分时取血,处理,反相高效液相法(RP-HPLC)测定血浆中盐酸双苯氟嗪的浓度,应用3P97软件计算主要药代动力学参数.结果所建立测定方法 的特异性、低检测限、低定量限、提取回收率、日内和日间精密度及稳定性均符合药代动力学分析方法 的要求.单次静脉注射后,盐酸双苯氟嗪在Beagle犬体内的药代动力学过程符合开放二房室模型,低、中、高3个剂量的主要药代动力学参数:T(1)/(2)β分别为24.7、24.2和29.6 h;AUC分别为0.44、1.12 和2.86 g·min·L-1;Vc分别为1.30、1.22和1.28 L·kg-1;CL分别为3.4×10-3、2.7×10-3和2.1×10-3 L·kg-1·min-1.结论 本研究建立的RP-HPLC法能够满足盐酸双苯氟嗪药代动力学研究的要求,静脉注射盐酸双苯氟嗪在犬体内消除过程属于两相消除,AUC与剂量呈线性相关.
作者：胡会青；王永利；绳晶伟；王海燕；许彦芳 刊期： 2009年第08期
目的 为新药发现阶段α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法 .方法 以α-葡萄糖苷酶为酶源,96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间对酶活力的影响,确定酶反应佳条件.在确定筛选模型运行条件后,对阳性药物和492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究.结果 采用正交试验法成功构建了实用灵敏的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型.492种植物提取物筛选结果表明,有145种提取物的抑制率达到了50%以上.结论 本研究构建的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型具备了简便、快速、灵敏、高效、经济的优点,适用于大规模筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂.
作者：杨付梅；孙黔云 刊期： 2009年第08期
中国药理学通报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国药理学会
