叶程；邵坤彦；王亚南；覃桂；代风娇；何冬兰
目的 纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性.方法 将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测.结果 透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9％,11.6;16.7％,11.2;16.7％,18.6.结论 成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性.该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础.
作者：于保锋；刘志贞；张悦红；解军；程牛亮；王建华；牛勃 刊期： 2013年第05期
目的 利用AdEasy系统构建携带人GINS2基因的重组腺病毒表达质粒,并进行鉴定.方法 以pcDNA3.1-GINS2质粒为模板,PCR扩增GINS2基因,克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdT-GINS2,经双酶切及测序鉴定正确的阳性质粒与骨架质粒pAdEasy-1同时转化感受态大肠杆菌BJ5183,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAdE-GINS2,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒Ad-GINS2,大量扩增后,测定病毒滴度,进行PCR鉴定.Western blot法检测重组腺病毒感染的人HL60细胞中GINS2蛋白的表达,MTT法检测重组腺病毒感染对HL60细胞增殖的影响.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAdT-GINS2经双酶切及测序证明构建正确;经酶切鉴定证明重组腺病毒质粒pAdE-GINS2构建正确;经PCR鉴定证明重组腺病毒Ad-GINS2包装成功,经3轮扩增后病毒滴度可达1.35×1012 IU/ml;与空载体感染及未感染的HL60细胞相比,重组腺病毒感染的HL60细胞内GINS2蛋白的表达及细胞增殖水平均明显升高(P＜0.05).结论 已成功构建携带人GINS2基因的重组腺病毒表达质粒,感染人HL60细胞后可促进其增殖,为进一步研究该基因在急性髓细胞白血病发生发展中的作用奠定了基础.
作者：张曦；刘北忠；钟梁；高远梅；胡秀秀；王慧；马鹏鹏；朱新瑜 刊期： 2013年第05期
目的 构建表达肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因的重组腺病毒质粒,并进行鉴定.方法 以质粒pEGFP-N2-hepaCAM为模板,PCR扩增hepaCAM基因,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV上,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将重组腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-hepaCAM经Pme Ⅰ线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中进行同源重组.重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM经Pme Ⅰ线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒AdI-hepaCAM,经大量扩增后,检测病毒滴度.RT-qPCR及Westernblot检测感染的BIU-87细胞内hepaCAM的表达.结果 酶切鉴定证实重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM构建正确,重组腺病毒AdI-hepaCAM滴度可达1.6×1012pfu/ml,与空载体腺病毒组比较,经重组腺病毒感染的BIU-87细胞中hepaCAM mRNA及蛋白的表达均明显升高(P＜0.05).结论 已成功构建携带hepaCAM的重组腺病毒载体AdI-hepaCAM,为研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞增殖的调控提供依据.
作者：陶佳；王秋菊；范砚茹；杜红飞；宋学东；罗春丽；吴小侯 刊期： 2013年第05期
目的 制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5.方法 将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞.经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化.间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性.结果 共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～ 1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好.结论 已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在“内影像”关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术.
作者：贾彦琼；黄建芳；向军俭；邓宁；唐勇；骆敏儿；王宏 刊期： 2013年第05期
目的 探讨尿苷二磷酸(Uridine diphosphate,UDP)与尿苷三磷酸(Uridine triphosphate,UTP)两种佐剂对HAV抗原和HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 分别在HBsAg(1 μg)和HAV抗原(18 EU)中加入不同浓度的UDP和UTP(HBsAg组:UDP和UTP均500μg及1、2、5、10 mg,HAV抗原组:UDP和UTP均500 μg及1、2mg),均经腹部皮下多点注射免疫ICR小鼠(HBsAg组:2针,间隔2周,0.1ml/只;HAV抗原组:单针免疫,0.2ml/只),并设空白对照组(生理盐水100μl)、抗原组对照组(HBsAg 1 μg;HAV抗原18 EU)、铝佐剂组对照组(铝佐剂300μg)、UDP+铝佐剂复合组(HBsAg 1μg+铝佐剂300 μg+UDP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300 μg+UDP 2 mg)和UTP+铝佐剂复合组(HBsAg 1 μg+铝佐剂300 μg+ UTP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300 μg+ UTP 2 mg),分别于末次免疫后(HBsAg组:第4、8、12和16周;HAV抗原组:第4、8、12周)采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-HBsAg IgG和抗-HAV IgG水平.免疫18周后,分别取HBsAg组中UDP和UTP佳浓度组及空白对照组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏及肺组织进行病理观察.结果 除空白对照组小鼠血清检测不到抗-HBsAg IgG外,其余各组小鼠血清抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均在第8周达到峰值,以后逐渐下降.末次免疫后,UDP及UTP各组抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均高于抗原对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).HBsAg组UDP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P＜0.05);HAV抗原组UTP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P＜0.05).在两种抗原中,UDP和UTP的佳浓度均为2 mg/只.在设置的浓度范围内,UDP和UTP佐剂均未观察到毒性反应.结论 UDP和UTP均能明显增强HBsAg及HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答.
作者：王越；王丽萍；王海漩；胡凝珠；胡云章 刊期： 2013年第05期
目的 探讨凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27(Interleukin-27,IL-27)表达的影响.方法 分别将小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW细胞)和小鼠腹腔巨噬细胞分为6组:空白对照组、LPS刺激组、凋亡细胞刺激组、LPS+凋亡细胞刺激组、IFNγ+LPS刺激组及IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组.用IL-27 p28启动子荧光素酶报告基因瞬时转染RAW细胞,检测各组细胞中IL-27 p28启动子荧光素酶活性;RT-PCR法检测各组RAW细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平,实时定量PCR法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27的表达水平.结果 瞬时转染的RAW细胞中,IFNγ+ LPS刺激组中IL-27 p28启动子荧光素酶活性明显高于空白对照组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P＜0.05);RAW细胞与腹腔巨噬细胞中,LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28基因mRNA的转录水平明显高于空白对照组、LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组(P＜0.05);LPS刺激组和IFNγ+ LPS刺激组细胞中IL-27的表达水平明显高于LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+ LPS+凋亡细胞刺激组.结论 巨噬细胞在摄取凋亡细胞后,IL-27 p28亚基的表达水平下降,从而导致IL-27的表达水平下降,为进一步研究其机制及临床应用奠定了理论基础.
作者：黄琦；秦新月 刊期： 2013年第05期
目的 动态检测小鼠感染附红细胞体后CD4+T淋巴细胞相关细胞因子的变化情况,探讨CD4+T淋巴细胞发挥的免疫学效应.方法 将小鼠随机分为实验组(纯化的附红细胞体)和对照组(生理盐水),均经腹腔免疫接种,0.5ml/只.分别于感染后第3、5、7、9d,经小鼠尾尖采血,镜下观察附红细胞体形态并进行PCR鉴定.建模成功后,分别于感染后第3、5、7、9d无菌取小鼠脾脏,采用RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-4、IL-17、IFNγ基因的转录水平.结果 各时间点感染小鼠的红细胞均出现不同程度的变形,边缘被附红体附着,PCR扩增产物可见602 bp的特异条带.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ均有不同程度的表达,IL-17在感染在第3天上调,5d达到高峰,7d开始下降;IFNγ在感染第3天表达上调,5d明显下降,7d表达上升,9d达到高峰;IL-4始终处于低表达状态.实验组小鼠脾脏IL-4、IL-17、IFNγ的转录水平均高于对照组(P＜0.01),IL-17和IFNγ的表达呈相互抑制状态,IL-4呈被抑制状态.结论 附红细胞体感染后,IL-17在早期发挥了促进炎症发生和抵抗感染的免疫学作用;IFNγ在感染后期发挥保护炎性反应,避免炎性反应过度发生的免疫学效应;IL-4在此感染过程中作用不明显.
作者：韩喜彬；杨蕾芳；魏文红；席会娟；朱亚琴；马明妍；巴彩凤 刊期： 2013年第05期
目的 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠可溶性IL-5α受体(Soluble IL-5 receptor α,sIL-5Rα)蛋白,并对其抗原性进行鉴定.方法 应用Vector NTI AdvanceⅡ软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子后合成序列,将sIL-5Rα克隆至pFastbacI中,构建重组穿梭质粒pFastbacI-sIL-5Rα,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,采用Reed-Muench法检测扩增后病毒滴度;将P3、P4代病毒以0.05 MOI感染sf9细胞,SDS-PAGE鉴定sIL-5Rα蛋白的表达,表达产物应用阳离子交换层析法进行纯化,并对纯化的sIL-5Rα蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα经PCR鉴定,证明构建正确;P3代重组杆状病毒的病毒滴度为1.7× 107pfu/ml;表达及纯化的sIL-5Rα蛋白在相对分子质量约43 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠IL-5Rα多克隆抗体发生特异性反应.结论 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠可溶性IL-5Rα受体蛋白,为进一步研究其生物学功能及在哮喘模型动物中的治疗作用奠定了实验基础.
作者：张悦鸣；段跃强；罗德炎；姚惠娟；王希良；李志奎 刊期： 2013年第05期
目的 通过重叠延伸PCR法,定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)基因.方法 根据GenBank中登录的Streptomyces sp.H197基因中MTG序列及重叠延伸PCR定点突变技术的原理,利用DNA-MAN5.0软件设计引物,以提取的Streptomyces sp.H197基因组DNA为模板,PCR扩增MTG基因,以扩增的MTG基因片段为模板,采用重叠延伸PCR技术对一个位点进行定点突变,胶回收PCR产物,与克隆载体pMD 19-T连接后,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,经PCR及单、双酶切鉴定,并测序.结果 重叠延伸PCR产物可见含有酶切位点和突变位点的特异性片段;重组质粒pMD19-T-MTG经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;测序结果表明,与野生型序列比对,仅有一个碱基发生改变,即第773位腺嘌呤突变为胞嘧啶,突变位点与预期一致,实现了目标位点的定点突变.结论 重叠延伸PCR法对MTG基因序列预定位点突变成功,证明阳性克隆子含突变位点,为下阶段突变型功能表达奠定基础.
作者：叶程；邵坤彦；王亚南；覃桂；代风娇；何冬兰 刊期： 2013年第05期
目的 探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetie protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制.方法 用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/ β-catenin信号途径中β-catenin的表达.结果 AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P＜0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P＜0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01),迁移能力明显下降(P＜0.01),β-catenin的表达量明显减少(P＜0.01).结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡.
作者：吴丽美；叶立伟；武睿；段亮；张昀源；陈娴；王海燕；周兰 刊期： 2013年第05期
目的 观察不同剂量南极磷虾粉及其与钙联合对骨质疏松模型大鼠的作用.方法 将大鼠随机分为10组,即虾粉低、中、高剂量组、钙组、联合低、中、高剂量组、氟化钠组、假手术组、模型对照组,每组10只,通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型,假手术组仅切除卵巢附近部分脂肪组织.各实验组分别灌胃低、中、高剂量虾粉、钙、低、中、高剂量虾粉+钙、氟化钠,假手术组与模型对照组正常饮食.12周后,经腹动脉取血,分离血清,检测钙离子浓度及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性;取股骨观察骨密度及生物力学差异,并检测骨灰分含量;取胫骨检测骨氟含量.结果 虾粉低、中、高剂量组及联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度随虾粉剂量的增加逐渐降低,虾粉高剂量组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度高于模型对照组;虾粉低、中、高剂量组ALP活性均高于模型对照组(P＜0.05),且随着虾粉剂量的增加,ALP活性增强.联合低、中、高剂量组大鼠骨密度均高于模型对照组(P均＜0.05),且优于低、中、高剂量虾粉组;与模型对照组相比,虾粉低剂量组及联合中、高剂量组均可明显增加骨大力学载荷值(P均＜0.05);与模型对照组相比,低、中、高剂量虾粉组随虾粉剂量增加骨氟含量增多,与钙联合应用后,降低了骨氟含量(P均＜0.01),联合低、中、高剂量组与相同剂量的虾粉组相比,骨氟含量均降低;虾粉低、中、高剂量组与模型对照组相比,骨灰分含量升高(P均＞0.05).结论 使用虾粉治疗骨质疏松时,低剂量效果佳;若虾粉与钙联合治疗,中剂量虾粉加钙改善骨质疏松效果佳.
作者：蔡维望；张俊忠；佟加贝；成航；葛鲁娜；李俊玲；王世立 刊期： 2013年第05期
目的 分析钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)基因多态性与西门塔尔杂交牛胴体和肉质性状的相关性.方法 选取95头西门塔尔杂交牛,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(Restriction fragment length polymor-phism-polymerase chain reaction,RFLP-PCR)对CAST基因外显子1(Exon1)和外显子5(Exon5)区域的片段的多态性进行检测,并对突变位点与西门塔尔肉牛胴体和肉质性状的相关性进行分析.结果 在所分析的片段中,仅引物4扩增的片段(Exon1)存在一个G→C碱基的置换突变(E1 256 g＞c),为同义突变;该突变位点为Ras Ⅰ酶的自然酶切位点,酶切后存在GG、GC和CC 3种基因型,CC基因型与西门塔尔牛的净肉率性状显著相关(P＜0.05),而对其他胴体和肉质性状无显著影响.结论 CAST基因Exon1处存在的突变位点与西门塔尔肉牛的净肉率显著相关,因此该位点将有助于筛选与牛肉质相关的辅助选择标记,该基因将为鉴定与肉质相关的功能基因提供参考.
作者：沈冰蕾；刘博洋；赵志辉；杨润军 刊期： 2013年第05期
目的 构建携带血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达.方法 将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC (rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达.结果 重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108 pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白).结论 已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路.
作者：欧霞；Yuri Kusov；郭莉莉；米锴；吴晋元；尹娜；张光明；李鸿钧；孙茂盛 刊期： 2013年第05期
目的 建立负载Ag+ D72树脂色谱柱分离纯化花生四烯酸(Arachidonic acid,AA或ARA)的工艺.方法 采用负载Ag+ D72树脂色谱柱对微生物油脂中的ARA进行分离纯化,确定佳分离纯化参数,利用气相色谱法检测ARA的含量.结果 负载Ag+ D72树脂的大饱和吸附量约为9 mg/g干树脂,在吸附温度0℃、不饱和脂肪酸甲酯上样质量浓度5 mg/ml,5％丙酮正己烷溶液(体积比)洗脱、解吸温度30℃、洗脱流速2ml/min的条件下,ARA的纯度达89.4％,收率达79.3％.结论 负载Ag+ D72树脂色谱柱可有效分离纯化微生物油脂中的ARA,为进一步生产高纯度的ARA,进而规模化生产ARA产品提供了参考.
作者：齐佳；于长青 刊期： 2013年第05期
目的 优化重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,以提高菌体浓度及可溶性目的蛋白的表达量.方法 采用摇瓶培养,利用单因素和正交试验对工程菌自诱导的培养条件(接种量、诱导时间、诱导温度、装瓶量)和培养基组分(有机氮源、无机氮源、碳源、有机酸)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量及质粒稳定性.结果 确定适自诱导培养条件为装瓶量20ml/250ml、接种量2％,28℃诱导25 h;适自诱导培养基组分为:蛋白胨2％、酵母浸粉0.5％、Na2HPO425 mmol/L、KH2PO425 mmol/L、硫酸铵25 mmol/L、葡萄糖0.05％、甘露醇1％、乳糖0.6％、苹果酸钠20 mmol/L、MgSO40.5 mmol/L.此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的1.76和2.12倍,质粒稳定性由87％提高至98％.结论 优化了重组免疫毒素IL-6(T23)-PE38KDEL在大肠杆菌中的自诱导表达条件,为其工业化生产奠定了基础,也为自诱导在其他重组蛋白药物生产中的应用提供了参考.
作者：丛楠；卢士英；任洪林；李岩松；翟新新；柳增善 刊期： 2013年第05期
目的 比较鱼精蛋白1 (Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平.结果 结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P＜0.05),总体阳性率为96.23％(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔.结论 结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值.
作者：侯文佳；陈芳芳；任平；张海燕；冯野 刊期： 2013年第05期
目的 观察阿苯达唑(Albendazole,ABZ)对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及其对Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同终浓度的ABZ(0.5、1.0、2.0及4.0mg/ml)处理SW480细胞24、48、72 h,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),CCK-8法检测ABZ对SW480细胞增殖活力的影响,并计算增殖抑制率及IC50.用不同终浓度的ABZ(1.0、2.0 mg/ml)处理SW480细胞,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2 mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,0.5、1.0、2.0及4.0 mg/ml ABZ处理组A值均明显降低(P＜0.05),随着作用浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强,且呈时间-剂量依赖性,2.0 mg/ml ABZ处理组24、48、72 h的IC50值分别为3.18、1.96和1.03 mg/ml;与对照组比较,1.0、2.0mg/mlABZ处理组细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低(P＜0.05).结论 ABZ能抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并显著促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达有关.
作者：刘劲松；刘俊 刊期： 2013年第05期
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(Protease activated receptor-2,PAR-2)在胃间质瘤组织中的表达及其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.方法 采用RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测PAR-2在72例胃间质瘤患者的瘤中心组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.结果 瘤旁组织和瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于正常组织(P＜0.05或P＜0.01),瘤中心组织中的表达水平明显高于瘤旁组织(P＜0.01).瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均随着NIH分级的升高而上调(P＜0.05或P＜0.01),且与黏膜受侵情况密切相关(P＜0.05).结论 胃间质瘤组织中PAR-2的表达水平明显高于瘤旁组织和正常胃组织,PAR-2的高表达可能与间质瘤的侵袭与转移相关.
作者：王贵军；邓蓓蓓；王玉彬；李迪诺 刊期： 2013年第05期
目的 探讨氢氧化锌与硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响.方法 取64只ICR小鼠随机分为8组,每组8只,分别为复合佐剂(0.27 mg氢氧化锌,100 μg HS,0.125 IU狂犬病疫苗)1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗常规5次免疫组,生理盐水对照组.均经小鼠胫骨前肌免疫,除狂犬病疫苗常规5次免疫组于0、3、7、14、28 d进行免疫外,其他各组均为隔周免疫.分别于初免疫后1、2、3、4、8、12、16周经尾静脉采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-狂犬病毒(Rabies virus,RABV)IgG水平.结果 初免后1周,除生理盐水对照组小鼠血清未检测到抗-RABV IgG外,各实验组均产生抗-RABV特异性IgG;所有复合佐剂组在初免后3周均可产生高水平的IgG,初免后12周反弹性升高达到峰值,第16周仍维持较高水平.初免后1、2、3、4、8、12、16周,复合佐剂1、2、3次免疫组IgG水平均高于狂犬病疫苗相同次数免疫组,差异均有统计学意义(P均＜0.05),且IgG水平持续时间较长.初免后2周,复合佐剂2、3次免疫组的IgG水平均高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(3次免疫后);初免后3周,复合佐剂3次免疫组的IgG水平高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(4次免疫后)(P均＜0.05).结论 氢氧化锌和HS复合佐剂能增强狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答.
作者：蔡泓志；孙静；王海漩；胡凝珠；胡云章 刊期： 2013年第05期
目的 构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒.方法 将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经Pac Ⅰ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50).电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平.结果 重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25 TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达.结论 已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒.
作者：杨洋；宫婷；米立娟；赵敬慧；陈奇；钱方；刘晔；张守峰；扈荣良 刊期： 2013年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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