何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山
目的 确定贾第虫滋养体内核糖核酸酶P(RNase P)RNA 3'端序列及其存在形式.方法 提取贾第虫滋养体总RNA,大肠埃希菌(E coli)Poly(A)聚合酶加polyA尾后,进行反转录,扩增出加polyA尾后的cDNA,经PCR及测序进行鉴定,确定其3 '端序列.应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分别检测RNase P-GLsR15共转录体与RNase PRNA成熟体的总表达量,两者之差即为RNase P RNA成熟体的表达量,确定贾第虫RNase P RNA的存在形式.结果 RNase P RNA 3'cDNA大小约300 nt,3'端序列与GLsR15 3'端序列一致；RNase P-GLsR15共转录体和RNaseP RNA成熟体的总表达量与RNase P-GLsR15共转录体表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 已成功克隆了RNase P RNA 3'端序列,证实RNase P RNA和GlsR15的共转录体即为RNase P RNA成熟体的存在形式.
作者：高珺珊；吴威；宫鹏涛；李建华；杨举；李赫；张国才；张西臣 刊期： 2013年第08期
目的 在大肠埃希菌中高效表达重组犬干扰素α1(canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,并对其抗病毒活性进行初步研究.方法 根据大肠埃希菌密码子的偏嗜性,人工合成犬干扰素α1成熟蛋白编码基因,同时引入大肠埃希菌EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,将改造后合成的CaIFNα1核苷酸序列定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-CaIFNα1,并进行PCR及双酶切鉴定；将鉴定正确的重组表达质粒pET-CaIFNα1转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗VSV病毒活性.结果 重组表达质粒经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确；重组融合蛋白CaIFNα1相对分子质量约39 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的61.5％,可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗CaIFNα1多克隆抗体特异性识别,在MDCK细胞上呈现较高的抗病毒活性,为2.0× 106U/ml.结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在大肠埃希菌中实现了高效表达,表达产物具有较高的抗病毒活性.
作者：徐晓娟；王怡飞；王玉；米政实；黄永亮；郭霄峰 刊期： 2013年第08期
目的 探讨不同解吸附处理对肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量检测结果的影响.方法 将七价肺炎球菌结合疫苗分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附或未解吸附处理,十三价肺炎球菌结合疫苗(制品1和制品2)分别用胰蛋白酶、NaOH解吸附(10、30、90 s)处理,应用免疫化学分析系统(IMMAGE 800)测定各型多糖含量.结果 除14型外,未经解吸附处理的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均显著低于经胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理后的多糖含量(P＜0.05)；除23F型多糖外,经胰蛋白酶解吸附处理后的七价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量均低于经NaOH解吸附处理后的多糖含量.经胰蛋白酶解吸附处理后,制品1中的14型和制品2中的1型多糖含量低于经NaOH解吸附处理后的50％；随着NaOH解吸附处理时间的增加,制品1和制品2中19A型多糖含量急剧下降.结论 肺炎球菌结合疫苗进行各型多糖含量检测之前需进行解吸附处理,胰蛋白酶解吸附和NaOH解吸附处理对多糖含量检测结果均有影响.
作者：陈琼；石继春；王春娥；王珊珊；叶强 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用.方法 采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘Notch信号分子mRNA的表达情况,筛选调控脊椎正常生长发育的重要信号分子,并采用免疫组化法进行验证.用重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在髓核(nucleus pulposus,NP)细胞中过表达,RT-PCR检测软骨细胞特征性标志物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞基质分泌情况.结果 小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子mRNA的表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著；Dll-1和Jag-1广泛表达于软骨细胞胞膜,随着小鼠年龄的增大,二者在椎间盘中的表达显著下降；BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,ACAN和COL2A1表达升高,甲苯胺蓝染色增强；Dll-1、Jag-1过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应.结论 Notch信号分子,尤其是Dll-1、Jag-1对正常脊椎生长及椎间盘软骨细胞的成熟分化具有明显的负性调节作用.
作者：曹光彪；李明；何通川；毕杨；罗庆；罗聪；何昀；宿玉玺；杨琼 刊期： 2013年第08期
目的 调查一起学校水痘暴发的流行因素,探讨水痘疫苗的保护效率.方法 采用1:1频数匹配病例对照研究方法,即以病例作为病例组,随机选择同班级、同性别,且无水痘患病史的相同数量未发病的健康学生作为对照组.使用自行设计的水痘危险因素调查表,对病例和对照进行问卷调查.结果 此次疫情共报告32例水痘病例,总罹患率为0.80％.波及深圳市龙岗区某学校4个班级,其中二年级23例,五年级9例,各班罹患率差异有统计学意义(P＜0.05)；接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间5d)比未接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间10 d)短；经常与其他年级或班级学生玩耍感染水痘的危险性是未与其他年级或班级学生玩耍的10.71倍,接触班里水痘病例的危险性是未接触的41.89倍；水痘疫苗的保护效率为6.76％,95％CI:10.00％～83.51％.接种进口水痘疫苗的罹患率远低于接种国产疫苗的罹患率(P＜0.05).结论 这是一起发生在某小学的水痘暴发疫情,经常与其他班级或年级的学生玩耍以及水痘疫苗保护效率欠佳,是此次疫情暴发的危险因素.
作者：罗念慈；李刚；李苑 刊期： 2013年第08期
目的 探讨含RGD (Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响.方法 取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响；分别用0.3、0.6、1.2 mg/kg RWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化.结果 随着RWR剂量增加,血小板大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L.随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加.结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ3(GPⅡb/Ⅲa)受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓.
作者：赵海霞；杨涛；杨利军 刊期： 2013年第08期
目的 建立一种安全、快速、经济的新型狂犬病病毒中和抗体的检测方法.方法 在狂犬病病毒弱毒株HEP-Flury基因组Ψ区插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein eGFP)基因,利用反向遗传技术,拯救重组病毒rHEP-eGFP,分别采用荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定及电镜观察等方法对rHEP-eGFP病毒进行鉴定；分别绘制rHEP-eGFP和亲本毒株HEP-Flury的生长动力学曲线；将rHEP-eGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,测定各代次rHEP-eGFP的滴度,荧光显微镜下观察eGFP的表达；采用TCID50法检测狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11和rHEP-eGFP的毒力；以rHEP-eGFP病毒为抗原,建立新型荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization,FAVN)-eGFP,对25份犬血清的抗体效价进行测定,并与标准FAVN检测结果进行比较.结果 经荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定和电镜观察表明,成功拯救出rHEP-eGFP病毒；重组病毒rHEP-eGFP与亲本病毒HEP-Flury的生长特性相似；rHEP-eGFP连续传代9次,均能稳定表达eGFP; CVS-11的毒力为l08 TCID50/ml,rHEP-eGFP的毒力为107.3 TCID50/ml；FAVN-eGFP与FAVN测定25份犬血清抗体效价的结果具有良好的一致性.结论 建立的新型狂犬病病毒中和抗体检测方法(FAVN-eGFP)准确度高,特异性好.
作者：薛向红；郑学星；盖微微；李岭；马金柱；冯娜；王铁成；黄耕；赵永坤 刊期： 2013年第08期
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
作者：熊冬梅；姚雪；李林；舒静；陈俊霞 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性.方法 经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64 ～ 223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.应用ProBondTM Resin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与Al(OH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平.结果 两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确；表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合；纯化的两种重组蛋白纯度均在95％以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平.结论 成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础.
作者：魏晓曼；闻晓波；冉旭华；崔玉东 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella) VirB 12蛋白.方法 利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB 12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 重组表达质粒pETV12经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约22 000,纯化的重组蛋白纯度达94％,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛种布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB 12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础.
作者：唐峰；闫广谋；唐雨顺；刘永华；李冰 刊期： 2013年第08期
水痘是由水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)引起的儿童期常见急性呼吸道传染病.水痘为该病毒原发感染的表现,主要侵染儿童,以皮肤和黏膜上出现疱疹为特征,症状较轻,但传染性强[1].水痘减毒活疫苗是由VZV传代毒株制备而成,是预防VZV感染的有效手段[2].水痘疫苗的免疫持久性、普遍的耐受性和良好的安全性均已被广泛证实[3].在美国水痘疫苗接种实施后,水痘的发病率和死亡率有明显的降低[4-5].
作者：陈震；邱平；赵慧；王剑锋；袁力勇；方捍华；李长贵 刊期： 2013年第08期
目的 探讨miR-451对肾小球系膜细胞Ywhaz基因表达的靶向调控.方法 应用生物信息学技术对miR-451的靶基因进行预测,PCR法扩增靶基因3'UTR全长片段,插入荧光素酶报告载体pmiR-RB-REPORTTM vector中,构建荧光素酶报告质粒pmiR-Ywhaz-3'UTR.将miR-451 mimics和NC mimics分别转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,将miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,采用Real-time RT-PCR和Western blot法检测miR-451和Ywhaz的表达水平；将miR-451 mimics和NC mimics分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,检测各组细胞荧光素酶活性.结果 Ywhaz基因3'UTR区有11个碱基与miR-451种子序列匹配,其中7个碱基呈高度保守性；荧光素酶报告质粒经测序鉴定构建正确；miR-451在miR-451 mimics组呈高表达,在miR-451 inhibitor组表达降低；miR-451可抑制Ywhaz的蛋白表达；荧光素酶活性检测发现,miR-451可通过与Ywhaz3'UTR的结合,抑制Ywhaz的表达.结论 miR-451可直接靶向糖尿病相关基因Ywhaz,抑制其蛋白表达,为进一步研究miR-451调控早期糖尿病肾病发生发展的机制提供了依据.
作者：查何；彭惠民；马晶；周吉；王瑞敏；尹频；文利；张政 刊期： 2013年第08期
目的 采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异.方法 采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称“Roche试剂”)及国产(简称“国产试剂”)乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性.结果 两种试剂定性结果阳性符合率为60.6％(134/221),阴性符合率为100％(94/94),总符合率为72.4％,检测结果差异有统计学意义(P＜0.01)；无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均＜0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因；定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性.结论 不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高.
作者：吴星；周诚；黄维金；蓝海云；辜文洁；梁争论 刊期： 2013年第08期
目的 优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性.方法 基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件；采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性.结果 在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100 ～ 200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的“S”型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc).采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91％.结论 优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好.
作者：何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山 刊期： 2013年第08期
半纤维素分解微生物在自然界的物质循环过程中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一,而木聚糖则是半纤维素的主要成分.木聚糖酶(xylanase)可催化木聚糖的水解,在各种生物体内均发现木聚糖酶.在过去几十年中,已有上百种木聚糖酶基因被克隆至同源或异源宿主内来表达木聚糖酶,以期改变宿主特性并适于商业应用.本文综述了木聚糖酶基因的克隆和表达,并对基因工程技术在木聚糖酶上的应用前景进行了展望.
作者：王丹丹 刊期： 2013年第08期
目的 评价注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)在恒河猴体内的安全性.方法 将恒河猴随机分为4组:低、中、高剂量RCT-18组和对照组,每组8只,低、中、高剂量RCT-18组分别经皮下注射4.6、16.1、57.5 mg/(kg·次)RCT-18,对照组经皮下注射0.7ml/(kg·次)0.9％氯化钠注射液,每3d上午同一时间给药1次,共给药91次.每天上午观察记录恒河猴的一般体征,每周常规监测体温1次,并在第1、2、3、13、14、15、28、29和30次给药前、给药后0.5、1、2、4和24h增加测量动物体温次数.给药0.5、1.5、3、4.5、6、7.5、9个月(停药次日)及停药48 d(恢复期结束),分别对心电图、眼科、血液学、血液生化学、尿常规、血清抗RCT-18抗体、外周血单个核细胞(PBMC)分类计数、血清免疫球蛋白水平(IgG、IgA和IgM)等各项指标进行检查.给药3、6、9个月和恢复期结束,每组各解剖2只猴,进行脏器大体观察,计算脏器系数,并进行组织病理学观察.结果 临床反应主要表现为给药后的体温升高；血液学指标出现具有一定剂量-反应关系的单核细胞(monocyte,MONO)数和网织红细胞(reticulocyte,RETIC)升高或网织红细胞平均体积(mean reticulocyte volume,MCVr)降低；3个剂量RCT-18组恒河猴的脏器重量和脏器系数与同期对照组相比,均无明显变化,且未见明显的脏器大体病变；3个剂量RCT-18组均出现无明显剂量相关但可逆的脾小结和淋巴滤泡萎缩；在整个试验期内未检测出血清中的抗RCT-18抗体；3个剂量组外周血淋巴细胞中IgD+细胞(成熟B淋巴细胞)比率均略有下降,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；血清IgG、IgA和IgM从给药0.5～1.5个月后开始明显下降,恢复期结束时,除了中剂量的IgA水平,其他3个剂量RCT-18组的IgG、IgA和IgM水平均出现不同程度的回升.结论 RCT-18对恒河猴具有明显的但可恢复的免疫抑制作用.
作者：陈智勤；陈云祥；卢觅佳；辛艳飞；陈浩；张丽丽；黄敏；王文祥；房健民 刊期： 2013年第08期
目的 建立测定重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的体积排阻高效液相色谱法(size exclusionhigh performance liquid chromatography,SE-HPLC),并进行验证.方法 应用SE-HPLC法测定重组人干扰素α2a对照品及供试品蛋白质含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性及准确性进行验证.采用建立的SE-HPLC法检测5家企业生产的24批样品中干扰素α2a蛋白含量,同时每批样品按《中国药典》三部(2010版)方法测定生物学活性,并计算比活性(IU/mg).结果 重组人干扰素α2a在0.3648～ 11.67μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 9).用建立的方法连续进样6次,检测对照品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.4％；同一批样品进样12次,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.8％；同一批样品取6份进样,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.1％；5家企业生产的24批样品,平均加标回收率为103.5％,平均比活性为1.65×108 IU/mg.结论 建立了测定重组人干扰素α2a蛋白含量的SE-HPLC法,该方法简便,精密度、稳定性、重复性及准确性好,可用于重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的测定及比活性评价.
作者：李永红；裴德宁；陶磊；韩春梅；饶春明 刊期： 2013年第08期
目的 建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法.方法 将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态；MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响；对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性.结果 随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎；MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系；10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584 ～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58％ ～ 24.17％,批间变异系数15.08％ ～ 16.95％,总变异系数为15.81％,均符合细胞实验变异系数应小于30％的标准；PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109 ～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格.结论 建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究.
作者：石继春；朱洁；叶强 刊期： 2013年第08期
目的 采用双内参实时荧光定量PCR法检测肝癌中易洛魁族同源盒2(Iroquois homebox 2,IRX2)基因信使RNA(mRNA)的水平,探讨其对肝癌诊断及治疗的潜在意义.方法 采用荧光定量PCR法检测21份肝癌组织和21份癌旁组织中IRX2基因的表达水平,并以双内参β-actin和GAPDH为标准对照,计算每个样本IRX2基因的相对表达量,经Pfafl法进行相对定量,分析基因表达差异.结果 42份肝组织中均存在IRX2基因的表达,85.71％(18/21)的肝癌组织中IRX2基因表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.01).结论 肝癌组织中IRX2基因表达水平较低,表明IRX2基因在肝癌中出现异常表达,为从基因水平诊断及治疗肝癌提供了一个潜在靶点.
作者：余爽；王静；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第08期
目的 对2011年吉林省肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)分离株全基因组进行序列分析.方法 将手足口病伴发重症脑炎患者的粪便样品接种至Vero细胞,分离EV71；采用RT-PCR法分8段扩增全基因组序列,进行双酶切及序列测定；应用Mega5软件构建EV71系统进化树；通过DNAMAN7和DNASTAR7软件进行EV71分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性比较；经RDP4软件对EV71分离株进行同源重组分析.结果 粪便样品接种至Vero细胞2d后,细胞出现圆缩、透亮、聚堆的病变现象；各PCR扩增产物经双酶切鉴定,均可见与预期大小一致的目的条带；经种系进化树分析显示,EV71分离株属C4a亚型,命名为EV71-JiLin-1 1-China;其与A、B和C亚型间核苷酸序列的平均同源性分别为22.44％、17.72％和11.96％,与A、B和C亚型间氨基酸序列的平均同源性分别为96.0％、97.2％和97.3％；全基因同源重组分析显示,EV71分离株的165 ～1 946和7 289 ～7 366核苷酸区有重组现象,分别源于分离自湖北的C4a-EV71-Hubei-09-China及马来西亚的B4-SB2864-SAR-00和C1-S18062-SAR-98.结论 2011年吉林地区流行的EV71为C4a基因型,为EV71基因特征及流行病学的研究提供了实验依据.
作者：罗永彬；曾韦锟；黄芬；井申荣 刊期： 2013年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
