魏晓曼；闻晓波；冉旭华；崔玉东
目的 采用双内参实时荧光定量PCR法检测肝癌中易洛魁族同源盒2(Iroquois homebox 2,IRX2)基因信使RNA(mRNA)的水平,探讨其对肝癌诊断及治疗的潜在意义.方法 采用荧光定量PCR法检测21份肝癌组织和21份癌旁组织中IRX2基因的表达水平,并以双内参β-actin和GAPDH为标准对照,计算每个样本IRX2基因的相对表达量,经Pfafl法进行相对定量,分析基因表达差异.结果 42份肝组织中均存在IRX2基因的表达,85.71％(18/21)的肝癌组织中IRX2基因表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.01).结论 肝癌组织中IRX2基因表达水平较低,表明IRX2基因在肝癌中出现异常表达,为从基因水平诊断及治疗肝癌提供了一个潜在靶点.
作者：余爽；王静；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第08期
目的 优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性.方法 基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件；采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性.结果 在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100 ～ 200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的“S”型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc).采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91％.结论 优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好.
作者：何彦林；张璘；张继鹏；张齐明；刘晓；杨晓东；张安山 刊期： 2013年第08期
目的 确定贾第虫滋养体内核糖核酸酶P(RNase P)RNA 3'端序列及其存在形式.方法 提取贾第虫滋养体总RNA,大肠埃希菌(E coli)Poly(A)聚合酶加polyA尾后,进行反转录,扩增出加polyA尾后的cDNA,经PCR及测序进行鉴定,确定其3 '端序列.应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分别检测RNase P-GLsR15共转录体与RNase PRNA成熟体的总表达量,两者之差即为RNase P RNA成熟体的表达量,确定贾第虫RNase P RNA的存在形式.结果 RNase P RNA 3'cDNA大小约300 nt,3'端序列与GLsR15 3'端序列一致；RNase P-GLsR15共转录体和RNaseP RNA成熟体的总表达量与RNase P-GLsR15共转录体表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 已成功克隆了RNase P RNA 3'端序列,证实RNase P RNA和GlsR15的共转录体即为RNase P RNA成熟体的存在形式.
作者：高珺珊；吴威；宫鹏涛；李建华；杨举；李赫；张国才；张西臣 刊期： 2013年第08期
目的 探讨miR-451对肾小球系膜细胞Ywhaz基因表达的靶向调控.方法 应用生物信息学技术对miR-451的靶基因进行预测,PCR法扩增靶基因3'UTR全长片段,插入荧光素酶报告载体pmiR-RB-REPORTTM vector中,构建荧光素酶报告质粒pmiR-Ywhaz-3'UTR.将miR-451 mimics和NC mimics分别转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,将miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,采用Real-time RT-PCR和Western blot法检测miR-451和Ywhaz的表达水平；将miR-451 mimics和NC mimics分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别与pmiR-Ywhaz-3'UTR共转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,检测各组细胞荧光素酶活性.结果 Ywhaz基因3'UTR区有11个碱基与miR-451种子序列匹配,其中7个碱基呈高度保守性；荧光素酶报告质粒经测序鉴定构建正确；miR-451在miR-451 mimics组呈高表达,在miR-451 inhibitor组表达降低；miR-451可抑制Ywhaz的蛋白表达；荧光素酶活性检测发现,miR-451可通过与Ywhaz3'UTR的结合,抑制Ywhaz的表达.结论 miR-451可直接靶向糖尿病相关基因Ywhaz,抑制其蛋白表达,为进一步研究miR-451调控早期糖尿病肾病发生发展的机制提供了依据.
作者：查何；彭惠民；马晶；周吉；王瑞敏；尹频；文利；张政 刊期： 2013年第08期
目的 构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签的环氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)基因shRNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响.方法 将前期构建的真核表达质粒pGenesil-1-COX-2-shRNA及阴性对照质粒pGenesil-1-HK的表达启动子U6及shRNA序列亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP,酶切及测序鉴定正确后,经Pme Ⅰ线性化,转化感受态AdEasier,构建重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP,经Pac Ⅰ线性化,转染AD293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP,经3轮扩增后,测定滴度.RT-PCR和Western blot法检测感染细胞中COX-2基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTS法观察重组腺病毒对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP及重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP经酶切和测序鉴定均构建正确,并成功转染AD293细胞,经包装和3轮扩增后,重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP的滴度分别为1.4×1012和2.0×1012pfu/ml.重组腺病毒感染的SMMC-7721细胞中COX-2基因mRNA、蛋白相对表达量及细胞增殖能力均明显低于空白对照组及阴性对照组(P均＜0.05).结论 成功构建了COX-2基因shRNA重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP,且可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,为进一步研究COX-2作为肝癌基因治疗靶点及机制奠定了基础.
作者：董晋豫；王秦；梁勤东；李武县；马婷婷；熊海玉；李紫微；涂植光 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性.方法 经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64 ～ 223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.应用ProBondTM Resin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与Al(OH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平.结果 两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确；表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合；纯化的两种重组蛋白纯度均在95％以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平.结论 成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础.
作者：魏晓曼；闻晓波；冉旭华；崔玉东 刊期： 2013年第08期
目的 原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella) VirB 12蛋白.方法 利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB 12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 重组表达质粒pETV12经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约22 000,纯化的重组蛋白纯度达94％,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛种布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB 12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础.
作者：唐峰；闫广谋；唐雨顺；刘永华；李冰 刊期： 2013年第08期
目的 在大肠埃希菌中高效表达重组犬干扰素α1(canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,并对其抗病毒活性进行初步研究.方法 根据大肠埃希菌密码子的偏嗜性,人工合成犬干扰素α1成熟蛋白编码基因,同时引入大肠埃希菌EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,将改造后合成的CaIFNα1核苷酸序列定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-CaIFNα1,并进行PCR及双酶切鉴定；将鉴定正确的重组表达质粒pET-CaIFNα1转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗VSV病毒活性.结果 重组表达质粒经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确；重组融合蛋白CaIFNα1相对分子质量约39 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的61.5％,可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗CaIFNα1多克隆抗体特异性识别,在MDCK细胞上呈现较高的抗病毒活性,为2.0× 106U/ml.结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在大肠埃希菌中实现了高效表达,表达产物具有较高的抗病毒活性.
作者：徐晓娟；王怡飞；王玉；米政实；黄永亮；郭霄峰 刊期： 2013年第08期
目的 分析狂犬病疫苗接种不良反应发生率及其影响因素.方法 收集2011年广西桂林市疾病预防控制中心接种门诊狂犬病疫苗接种记录和随访登记资料,采用描述性研究方法统计分析5剂免疫程序[分别于就诊时(0 d)、3、7、14、28 d,经上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]和2-1-1免疫程序[分别于就诊时(0 d)经左右上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,再于第7和21天各注射1剂疫苗,幼儿可经大腿前外侧区肌内注射]接种狂犬病疫苗的不良反应发生率,采用卡方检验和Logistic回归分析影响接种不良反应发生的因素.结果 接种狂犬病疫苗后不良反应发生率为2.10％(201/9 572),不良反应中以单纯发热(＞38℃)为主,占81.10％(163/201)；2-1-1免疫程序接种后不良反应发生率2.37％(128/5 398)明显高于5剂免疫程序[1.75％(73/4 174)](P＜0.05),5剂免疫程序接种后不良反应主要发生于前3针次,2-1-1免疫程序接种后不良反应均发生在第1针次；低年龄、受伤程度为Ⅱ级、被狗以外的动物致伤和按2-1-1免疫程序接种狂犬病疫苗后发生不良反应的风险高.结论 狂犬病疫苗接种后的不良反应较少且轻微.10岁以下儿童好采用5剂免疫程序,以减少接种不良反应的发生.
作者：黄少新；张振开；冯厚滨；潘海；任正洪 刊期： 2013年第08期
目的 采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异.方法 采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称“Roche试剂”)及国产(简称“国产试剂”)乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性.结果 两种试剂定性结果阳性符合率为60.6％(134/221),阴性符合率为100％(94/94),总符合率为72.4％,检测结果差异有统计学意义(P＜0.01)；无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均＜0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因；定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性.结论 不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高.
作者：吴星；周诚；黄维金；蓝海云；辜文洁；梁争论 刊期： 2013年第08期
目的 调查一起学校水痘暴发的流行因素,探讨水痘疫苗的保护效率.方法 采用1:1频数匹配病例对照研究方法,即以病例作为病例组,随机选择同班级、同性别,且无水痘患病史的相同数量未发病的健康学生作为对照组.使用自行设计的水痘危险因素调查表,对病例和对照进行问卷调查.结果 此次疫情共报告32例水痘病例,总罹患率为0.80％.波及深圳市龙岗区某学校4个班级,其中二年级23例,五年级9例,各班罹患率差异有统计学意义(P＜0.05)；接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间5d)比未接种过水痘疫苗的病程时间(中位时间10 d)短；经常与其他年级或班级学生玩耍感染水痘的危险性是未与其他年级或班级学生玩耍的10.71倍,接触班里水痘病例的危险性是未接触的41.89倍；水痘疫苗的保护效率为6.76％,95％CI:10.00％～83.51％.接种进口水痘疫苗的罹患率远低于接种国产疫苗的罹患率(P＜0.05).结论 这是一起发生在某小学的水痘暴发疫情,经常与其他班级或年级的学生玩耍以及水痘疫苗保护效率欠佳,是此次疫情暴发的危险因素.
作者：罗念慈；李刚；李苑 刊期： 2013年第08期
目的 在Vero细胞中表达牛干扰素γ基因,并对其抗病毒活性进行鉴定.方法 将牛干扰素γ全基因克隆至pcDNA3.1(+)载体,构建重组表达质粒,经PCR及双酶切鉴定,将鉴定正确的阳性质粒通过脂质体法转染Vero细胞,分别采用间接免疫荧光和Western blot法检测细胞转染效率和干扰素γ蛋白的表达,采用细胞病变抑制试验检测其抗病毒活性.结果 间接免疫荧光显示绿色荧光,表明牛干扰素γ蛋白在Vero细胞中得到表达,转染效率约为50％;Western blot检测可见相对分子质量约为22 000的目的条带,进一步验证了该蛋白的表达；细胞病变抑制试验显示细胞病变明显减少,表明表达的干扰素γ蛋白具有明显的抗病毒活性.结论 成功在Vero细胞中表达了牛干扰素γ蛋白,其具有明显的抗病毒作用.
作者：宋佰芬；冯振月；孙虎男；马金柱；曹宏伟；崔玉东 刊期： 2013年第08期
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
作者：熊冬梅；姚雪；李林；舒静；陈俊霞 刊期： 2013年第08期
目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1 (cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制.方法 采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平；免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用；ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平.结果 与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低；P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用.结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关.P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点.
作者：邓玮；易永芬；屈玉玲；闫田静；文雪 刊期： 2013年第08期
目的 制备产朊假丝酵母尿酸酶(uricase,URI)脂质纳米粒,并分析其药效学特性.方法 采用旋转蒸发法制备3批URI脂质纳米粒(lipid nanoparticles containing uricase from Candida utilis,LNURI),检测其包封率、URI活性、酶的适作用温度和适作用pH值.采用次黄嘌呤和氧嗪酸钾建立高尿酸大鼠模型,分别于建模后1h经尾静脉注射LNURI和游离URI,建模后3、5、7、8、12h,测定大鼠血清中尿酸水平.结果 制备的3批LNURI的平均包封率为(64.27±2.26)％;LNURI的适作用温度为40℃,适作用pH值为8.0,在同样的作用温度和pH值条件下,LNURI的活性明显高于游离URI; LNURI降低高尿酸模型大鼠血清中尿酸水平的效果较URI更显著.结论 成功制备了产朊假丝酵母尿酸酶脂质纳米粒,其可降低高尿酸模型大鼠血清中尿酸水平.
作者：王娜；赵春景；黄开顺；滕永真；张景勍 刊期： 2013年第08期
目的 探讨Aurora-A高表达对食管鳞癌血管生成及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)表达的影响.方法 将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的Aurora-A全长表达质粒pEGFP-C 1-Aurora-A转染至食管鳞癌细胞KYSE 150,经G418筛选获得Aurora-A高表达的细胞株(Aurora-A高表达组),同时设空质粒pEGFP-C1转染组(阴性对照组)和未转染组作为对照.Western blot检测各组细胞中Aurora-A蛋白的表达；采用小管形成及鸡胚尿囊膜试验检测Aurora-A高表达对肿瘤血管生成的影响；免疫组化法检测Aurora-A高表达对裸鼠移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD)的影响；Western blot检测Aurora-A高表达对KYSE150细胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2(Tyr1059)表达的影响.结果 Aurora-A高表达组中总Aurora-A蛋白的表达量约为阴性对照组和未转染组的2.5倍,提示Aurora-A高表达细胞系构建成功；Aurora-A高表达组生成的血管数量、MVD值和p-VEGFR-2的表达水平均显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 Aurora-A高表达可促进食管鳞癌中的血管生成,其机制可能与活化VEGFR-2有关.
作者：路娜；赵艳；王康；覃秀桃；王晓霞 刊期： 2013年第08期
目的 建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法.方法 将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态；MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响；对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性.结果 随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎；MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系；10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584 ～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58％ ～ 24.17％,批间变异系数15.08％ ～ 16.95％,总变异系数为15.81％,均符合细胞实验变异系数应小于30％的标准；PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109 ～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格.结论 建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究.
作者：石继春；朱洁；叶强 刊期： 2013年第08期
水痘是由水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)引起的儿童期常见急性呼吸道传染病.水痘为该病毒原发感染的表现,主要侵染儿童,以皮肤和黏膜上出现疱疹为特征,症状较轻,但传染性强[1].水痘减毒活疫苗是由VZV传代毒株制备而成,是预防VZV感染的有效手段[2].水痘疫苗的免疫持久性、普遍的耐受性和良好的安全性均已被广泛证实[3].在美国水痘疫苗接种实施后,水痘的发病率和死亡率有明显的降低[4-5].
作者：陈震；邱平；赵慧；王剑锋；袁力勇；方捍华；李长贵 刊期： 2013年第08期
目的 筛选与白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)具有较强结合能力的功能小肽,并检测其对气道上皮细胞HBE16分泌黏蛋白(mucin,MUC)5AC的影响.方法 以重组人IL-13为靶蛋白,采用固相包被法对噬菌体随机展示十二肽库进行亲和筛选,并进行测序；将获得的与IL-13具有高亲和力的小肽偶联到嗜孔蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体上,制备KLH偶联肽K1、K3、K4,通过夹心ELISA法检测3种偶联肽对IL-13的封闭作用；通过细胞试验检测3种偶联肽对HBE16细胞分泌MUC5AC的影响.结果 经6轮亲和富集筛选,获得了3个与IL-13具有较高亲和力的噬菌体克隆,插入的十二肽编号依次为P1、P3、P4;3种偶联肽K1、K3、K4对IL-13均具有明显的封闭作用；经K1+IL-13、K3+IL-13和K4+ IL-13处理的HBE16细胞中MUC5AC基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显低于IL-13对照组(P＜0.01).结论 经偶联肽封闭后,可减少IL-13刺激的气道上皮细胞HBE16中MUC5AC的分泌,为慢性气道炎症黏液高分泌的防治提供了新的思路和手段.
作者：温建立；李琪；周向东；尤列·皮尔曼；维克·多克罗索夫；刘胜华 刊期： 2013年第08期
目的 探讨蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制.方法 取BALB/c雌性小鼠,采用心脏灌注排血、胶原酶和胰蛋白酶原位消化法及组织块细胞迁出培养法,分离培养小鼠肺泡上皮细胞,经刮除法及差相消化贴壁法纯化小鼠肺泡上皮细胞,通过兔抗鼠角蛋白单克隆抗体细胞爬片组化染色法对细胞进行纯度鉴定；经不同终浓度的蓖麻毒素(0、0.000 1、0.001、0.01、0.1、1、10、100 μg/ml)处理细胞进行毒性分析；倒置显微镜下观察0.05 μg/ml蓖麻毒素对细胞的毒性作用.结果 获得的小鼠肺泡上皮细胞纯度达90％以上；随着蓖麻毒素浓度的增加,细胞活力降低,蓖麻毒素浓度与肺泡上皮细胞增殖抑制呈正相关；0.05 μg/ml的蓖麻毒素即可引起细胞皱缩、空泡化变性.结论 蓖麻毒素可引起原代培养肺泡上皮细胞变性损伤,损伤程度随蓖麻毒素浓度增高而加重,为蓖麻毒素气源性中毒中的肺损伤机制提供了理论依据,同时为进一步探讨蓖麻毒素的毒理作用提供了新的思路.
作者：王蒙；钱军；穆成龙；赵思言；郑关雨；付莹莹；孙玉成；万家余；刘文森 刊期： 2013年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
