蔡世忠；刘俊；周玥；刘典锋；杨斌；姜蓉；王亚平
目的 建立新型重组人促红细胞生成素(Novel recombinant human erythropoietin,HuEPO)抗体中和活性的检测方法,并应用于毒理研究中样品的分析.方法 通过考察新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞增殖的促进作用及抗新型rHuEPO抗体(兔抗阳性血清)对该细胞增殖的抑制作用,建立抗新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并应用于毒理实验中对相关抗体血清中和活性的检测.结果 新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞的增殖具有促进作用,在0.125～128 ng/ml浓度范围内作用显著；抗新型rHuEPO抗体在10-1～10-4范围内对人UT7/EPO细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制曲线呈中和抗体性质.毒理实验中,抗新型rHuEPO抗体(SD大鼠血清)显著抑制人UT7/EPO细胞的增殖,且具有特异性；抗新型rHuEPO抗体(Beagle犬血清)对人UT7/EPO细胞的增殖无影响.结论 成功建立了一种新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并成功应用于毒理实验样品分析,为新型rHuEPO在长期毒性实验中的免疫原性评价提供了一种有效的检测手段.
作者：侯绪凤；靳征；姜非 刊期： 2012年第10期
目的 研究人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factor,haFGF)和穿膜肽(Transcriptional activator protein,TAT)融合蛋白TAT-haFGF14-154在小鼠体内的急性毒性反应和免疫原性,初步评价其安全性.方法 取昆明小鼠,单次经尾静脉注射10 mg/kg TAT-haFGF14-154,观察并记录14d内小鼠的一般行为、中毒死亡情况和体重变化,各组织脏器中毒情况,HE染色观察各组小鼠大脑组织病理学变化.将900μg/kgTAT-haFGF14-154分别经静脉和鼻腔免疫昆明小鼠,每隔2d给药1次,分别于给药后的第1、2、3、4周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价；分别将高(300 μg/kg)、中(100 μg/kg)、低(35μg/kg)剂量的TAT-haFGF14-154经鼻腔免疫快速老化小鼠(SAM P8),每隔2d给药1次,30 d后处死小鼠,经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价.结果 在整个急性毒性试验过程中,小鼠无一例死亡,体重变化正常,大脑未见明显病理学改变；TAT-haFGF14-154对小鼠的大耐受剂量大于10mg/kg;昆明小鼠经鼻腔给予TAT-haFGF14-154后,第3周产生抗体,而静脉给药后第2周即有抗体产生；抗体产生的强度呈剂量依赖性.结论 TAT-haFGF14-154属于弱毒性药物,但具有免疫原性,静脉给药的免疫原性强于鼻腔给药.
作者：杨鹏辉；张齐好；许华；黄亚东；陈红霞；郑青 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平.结果 人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少；可见数量不等,程度不同的凋亡细胞；G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P＜0.05)；细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P＜0.01).β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡.
作者：刘艺；李静；刘晓岩；姜蓉；王建伟；魏强；赵亮；陈地龙 刊期： 2012年第10期
目的 构建携带FLAG-3NLS-FRB*融合基因的嵌合腺病毒,并检测其在AD-293细胞中的表达.方法 将FLAG标记的3段核定位信号(FLAG-3NLS)与突变修饰的雷帕霉素靶FRB结构域(FRB*)基因通过重叠PCR技术拼接成FLAG-3NLS-FRB*,定向克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,测序鉴定后,与腺病毒骨架质粒pAd5F35在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,感染AD-293细胞进行包装、扩增.采用基因转移单位(Gene transfer unit,GTU)法测定病毒滴度；RT-PCR及Western blot检测FLAG-3NLS-FRB*在AD-293细胞中的转录及表达.结果 腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FLAG-3NLS-FRB*经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确；FLAG-3NLS-FRB*正确克隆至腺病毒骨架质粒中；在AD-293细胞中包装、扩增获得了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,病毒滴度为2.0×1013 GTU/ml；嵌合腺病毒感染AD-293细胞后36 h,在细胞中可检测到FLAG-3NLS-FRB*基因的转录和蛋白的表达.结论 成功构建了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,并在AD-293细胞中成功表达了FLAG-3NLS-FRB*融合蛋白.
作者：高淼；黄峥兰；李千音；钟梁；冯文莉 刊期： 2012年第10期
目的 建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,并进行初步应用.方法 将金黄色葡萄球菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法,通过L9(34)正交设计试验优化方法的反应条件；对建立的方法进行灵敏度和特异性验证；应用建立的方法检测200份食品样品,并与国家标准检测方法进行比较.结果 所建立的检测方法的佳反应条件为:多克隆抗体工作浓度为1∶100,生物素标记的二抗工作浓度为1∶1 000,链霉亲和素-藻红蛋白的工作浓度为2μg/ml,生物素标记的二抗与SA-PE的反应时间为40 min；建立的方法检测金黄色葡萄球菌的灵敏度可达103 CFU/ml,检测其他常见食源性致病菌无交叉反应；建立的方法与国家标准方法检测200份食品样品的结果基本相符.结论 已建立了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,能够应用于实际样品的检测.
作者：王亚丽；蔡阳；刘韬；宋战昀；王宁；王振国 刊期： 2012年第10期
目的 克隆狂犬病病毒(Rabies virus,RV)4aG株G蛋白基因,并与其他疫苗毒株G蛋白基因序列进行比较,为我国狂犬病疫苗的研制提供理论依据.方法 从RV 4aG株中扩增G蛋白基因,并进行序列测定,利用生物信息学软件绘制系统进化树,预测G蛋白功能位点、二级结构和B细胞抗原表位,并与其他疫苗毒株进行比较.结果 克隆的4aG株G蛋白基因序列与GenBank中登录的序列一致.进化树分析显示,4aG株与CVS株的进化关系较远；4aG、4aGV18、CVS、PV及RC-HL毒株跨膜区域在第460 ～ 479氨基酸之间,其他毒株在459 ～ 478氨基酸之间；PV株有5个糖基化位点,RV-97株有3个糖基化位点,其他毒株均有4个糖基化位点；G蛋白抗原表位位于氨基酸100 ～ 300及480 ～ 520之间；不同毒株G蛋白抗原位点区域有所不同,与CVS株比较,PV株抗原表位与其为接近,4aG、4aGV18、CTN-1-31及Flury-HEP株与其抗原表位较为接近.结论 4aG株G蛋白功能位点和抗原表位与CVS株相差较大,但其在Vero细胞上传代稳定,可用于制备Vero细胞纯化疫苗.
作者：李建强；孙燕；孙振鹏；范秀娟；陈军；李薇 刊期： 2012年第10期
目的 采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量.方法 利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验；分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测；验证Al(OH)3佐剂吸附抗原的完全性；将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性；对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证.结果 鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性；用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry 法检测结果的误差均在±20％以内；4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明Al(OH)3佐剂吸附抗原完全；4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定；3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加.结论 已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测.
作者：常娅莉；吴智远；魏东；韩少波；胡丽娜；焦磊；卜培英；王国治；王秉翔 刊期： 2012年第10期
目的 探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用.方法 将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸培养.采用RT-PCR法检测LO2细胞中人FⅧ基因mRNA的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(FⅧ:C),Western blot检测24、48 h时相点LO2细胞中人FⅧ蛋白的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察L-精氨酸作用48 h后LO2细胞中人FⅧ的表达.结果 加入L-精氨酸培养36、48、60 h后,LO2细胞中有人FⅧ基因mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧ基因mRNA的转录；各时相点两组细胞培养上清液中人FⅧ:C的水平差异均无统计学意义(P＞0.05)；Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48 h后LO2细胞中出现人FⅧ的表达,而对照组细胞中均无人FⅧ的表达.结论 L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源FⅧ的表达.
作者：朱重阳；李鑫；温泉；张军 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16 Rb信号通路的相关性.方法 以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80 μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期；以佳浓度Rg1干预K562细胞佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力；衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率；透射电镜观察细胞的超微结构；Southern blot检测细胞的端粒长度；Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达.结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h；经20μmol/LRg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P＜0.05),集落形成能力明显减弱(P＜0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P＜0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P＜0.05),P16和RB蛋白表达上调(P＜0.05).结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关.
作者：蔡世忠；刘俊；周玥；刘典锋；杨斌；姜蓉；王亚平 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.
作者：韩佳汕；郭德军；徐云明；厉保秋；柳增善；郑国君 刊期： 2012年第10期
目的 原代培养人乳腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF),并检测其生物学特性.方法 采用胶原酶消化培养法对26份乳腺癌患者标本进行原代细胞分离培养,倒置显微镜下观察人乳腺癌CAF的形态学特性,免疫荧光染色法鉴定所分离培养的人乳腺癌CAF纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)和成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activated protein,FAP)的表达,并通过MTT法和细胞计数法绘制细胞生长曲线.结果 胶原酶消化法的适酶浓度为0.12％,适消化时间为10h.原代培养23份成功,3份失败.培养成功的细胞贴壁生长,形态完整,生长状态良好,背景清晰,有明显的对数生长期,并可传代培养.培养的细胞FN和FAP表达阳性,表明原代培养的CAF为乳腺癌CAF.结论 胶原酶消化培养法适合人乳腺癌CAF的原代培养,通过该方法可建立理想的人乳腺癌CAF体外实验模型.
作者：彭琼乐；孙艳；赵浏阳；王黎阳；柳满然；彭惠民 刊期： 2012年第10期
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 优化毕赤酵母工程菌GS115/xynlIA产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响；并分析重组木聚糖酶的酶学性质.结果 影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值＞诱导时间＞诱导温度＞甲醇添加量,重组酵母产酶佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5％,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35IU/ml;酶的适反应温度为50℃,适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH4.5～7.5的范围内较稳定.结论 优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据.
作者：史红玲；汪俊卿；邬敏辰；高树娟 刊期： 2012年第10期
近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病.肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因.为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类EV71疫苗的研发,其中以灭活疫苗的进展快,目前国内3家EV71全病毒灭活疫苗即将进入Ⅲ期临床试验阶段.本文就全病毒灭活疫苗的研发进展及质量控制和评价要点作一综述.
作者：姚昕；毛群颖 刊期： 2012年第10期
目的 构建Wistar大鼠热休克蛋白(Heat shock protein 70,HSP70)基因重组腺病毒质粒,并制备重组腺病毒.方法 利用RT-PCR技术从Wistar大鼠脾脏组织中扩增HSP70基因序列,并克隆至pMD18-T载体中,测序鉴定后,将克隆的HSP70基因编码阅读框亚克隆至穿梭载体pShuttle-CMV中,并利用Ⅰ-Ceu Ⅰ与Ⅰ-Sce Ⅰ将重组穿梭质粒上的HSP70基因的表达框切下,连接到携带腺病毒骨架载体pAdxsi上.重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,转染至293(R)细胞进行病毒的包装,获得重组腺病毒pAd-CMV-HSP70,收集病毒上清,感染BRL细胞,Western blot检测BRL细胞中HSP70的表达.病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,检测重组腺病毒纯度、颗粒滴度及感染性滴度.结果 克隆质粒、穿梭质粒经PCR及酶切鉴定,均可见2 269 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank登录的序列一致；XhoⅠ酶切结果显示,HSP70基因已正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒感染BRL细胞后,细胞中HSP70的表达量显著升高(P＜0.01)；重组腺病毒纯化后纯度为1.29,颗粒滴度为5.31×1012 VP/ml,感染性滴度达1×1011pfu/ml.结论 已成功构建Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒质粒,并制备出高滴度的重组腺病毒颗粒,为进一步研究HSP70的生物学活性及作用机制奠定了基础.
作者：郭景茹；臧琳；郭爽；王建发；计红；李士泽；薛琳琳；杨焕民 刊期： 2012年第10期
目的 了解黑龙江省流行性腮腺炎(简称流腮)的发病水平,并分析其流行病学特征,为制定流腮防治策略、加速控制流腮流行提供科学依据.方法 对黑龙江省2004～2011年中国疾病预防控制信息系统报告资料进行流行病学特征分析.结果 2004～2011年黑龙江省共报告流腮病例39 236例,年平均发病率为16.10/10万；全年均有发病,但存在两个发病高峰期,分别为4～7月和11月～次年1月,12月和6月是发病多的月份；13个地市均有流腮病例发生；该省流腮病例主要集中在20岁以下人群,2岁以下儿童发病较少,5～9岁组发病多,且主要集中在中小学生和托幼儿童.结论 进一步了解了黑龙江省流行性腮腺炎的流行特征,并提出了加强流行性腮腺炎疫情的防控措施.
作者：叶昕；杜瑞林；孙兆丹；宋婧；黄鹤；高士锐；马玉杰；闫滨 刊期： 2012年第10期
目的 建立重组人干扰素β1a(Recomhimant human interferon beta1a,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法.方法 将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNβ1a生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线.对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较.结果 优化后的MTS/PMS法的佳反应条件为:细胞浓度1×105个/ml,细胞病变时间24～36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40 min；A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R2)均达0.99以上.不同检测板、相同加样位置的变异系数在6％～20％之间；相同检测板、不同加样位置的变异系数在13％～17％之间；检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86％～ 121％之间.该法检测rhIFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R2值高,且比结晶紫染色法更稳定.结论 已建立了rhIFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhIFNβ1a的生物学活性.
作者：张慧娟；王军；慕彩梅；王妍 刊期： 2012年第10期
目的 构建转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响.方法 设计并合成2对靶向TGF-β1基因的RNA干扰序列和1对阴性对照序列,并构建重组表达质粒pshRNA-TGF-β1a、pshRNA-TGF-β1b和pshRNA-TGF-β1c(阴性对照),以脂质体介导转染SW480细胞,荧光显微镜观察转染情况；RT-PCR和Western blot检测转染细胞中TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；Transwell侵袭试验检测沉默TGF-β1基因表达对细胞侵袭能力的影响.结果 TGF-β1基因shRNA重组表达质粒经酶切鉴定和测序分析证明构建正确.与空白对照组相比,3种质粒转染的细胞均有较强的荧光表达；pshRNA-TGF-β1a和pshRNA-TGF-β1b组细胞TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；SW480细胞的侵袭能力也明显降低(P＜0.05).结论 成功构建了TGF-β1基因shRNA重组表达质粒,其能有效抑制结肠癌细胞SW480中TGF-β1基因的表达,并可显著降低细胞的侵袭能力,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路.
作者：于宏；姜政；仲琳；王丕龙 刊期： 2012年第10期
目的 原核表达并纯化鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP3蛋白.方法 将GPV VP3基因重组表达质粒pGEX-6P-VP3转化入大肠杆菌BL21 (DE3)plysS内,IPTG诱导表达；用Sepharose 4B(Prepacked Glutathion)亲合层析柱纯化可溶性和不溶性包涵体蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot及Dot-ELISA鉴定.结果 表达的GST/VP3融合蛋白相对分子质量为85 000,主要以不溶性包涵体形式存在；纯化的可溶性蛋白和包涵体蛋白含量分别为2.20和3.30 mg/ml;纯化的GST/VP3融合蛋白能被鹅抗GPV多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了GPV VP3蛋白,为进一步研究其功能和免疫学特性及研制基因工程亚单位疫苗和新型抗原制剂奠定了基础.
作者：布日额；吴金花；马波；王君伟 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
