党丽峰；杨洋；刘东雷；吴恺；温丰标；赵松
目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对雪旺细胞(SCs)增殖及c-fos、c-jun及细胞周期素(Cyclin)E表达的影响.方法 取3～5d鼠龄无特定病原体(SPF)级SD大鼠20只,雌雄不限,体质量25～ 30 g,取双侧坐骨神经体外培养SCs,经S-100免疫荧光标记鉴定.取处于对数生长期的第2代SCs,应用噻唑蓝(MTT)比色法及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法检测不同浓度CMCS对SCs增殖的影响.将SCs分为4组,加入CMCS调整终质量浓度为50 mg/L(B组)、100 mg/L(C组)、200 mg/L(D组),对照组(A组)加入等量磷酸盐缓冲液(PBS);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCs内c-fos、c-jun及Cyclin E基因的表达;Western blot法检测c-fos、c-jun及Cyclin E蛋白表达的改变.结果 S-100免疫荧光标记鉴定结果显示细胞阳性率达90％以上.MTT结果表明各组SCs吸光度(A)值分别为:对照组为0.141 3 ±0.005 2,10 mg/L CMCS处理组为0.152 5±0.006 1,50 mg/L CMCS处理组为0.1648±0.0072,100 mg/L CMCS处理组为0.1726±0.0062,200 mg/L CMCS处理组为0.193 8±0.008 1,500 mg/L CMCS处理组为0.1947 ±0.0062,随着CMCS浓度的升高而增加.BrdU染色结果表明CMCS在50 ～ 200 mg/L浓度范围内可以促进SCs内DNA合成,且随着CMCS浓度的增加而增加,200 mg/L CMCS作用明显,与对照组比较增加2～3倍.RT-PCR和Western blot检测均表明B、C、D组c-foc、c-jun及Cyclin E mRNA和蛋白表达均显著高于A组(P＜0.05);其中D组作用明显.结论 CMCS可以促进SCs增殖并促进增殖周期相关基因c-fos、c-jun及Cyclin E表达.
作者：陶海鹰；贺斌；卫爱林；刘世清 刊期： 2014年第05期
目的 观察大鼠在心肌梗死后凋亡基因程序性死亡5基因(PDCD5)表达的变化.方法 将雄性Wistar大鼠140只随机分为心肌梗死组(n=70)和对照组(n=70).心肌梗死组在经口气管插管术后开胸,结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死模型;对照组经口气管插管术后开胸,暴露前降支,缝线穿过前降支下方但不结.在心肌梗死后1、2、3、4、6、12和24 h时处死大鼠,每组10只.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠心脏非梗死区心肌中凋亡基因PDCD5 mRNA的表达.结果 心肌梗死后心肌梗死组非梗死区心肌中凋亡基因PDCD5 mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.05),分别为1h(1.23±0.17比0.17 ±0.08)、2h(1.76 ±0.27比0.16 ±0.07)、3h(1.84±0.35比0.12 ±0.09)、4 h(1.79±0.20比0.14±0.05)、6 h(1.35±0.18比0.11±0.07)、12 h(1.08 ±0.25比0.12±0.04)和24 h(1.13 ±0.16比0.08±0.02);心肌梗死组非梗死区心肌中凋亡基因PDCD5 mRNA的表达2h高于1 h(P＜0.05),2、3、4h无明显变化(P＞0.05),6h低于4h(P＜0.05),12 h低于6 h(P＜0.05),但与24 h比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组没有上述变化规律,组内各时间点分组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠心肌梗死后非梗死区心肌凋亡基因PDCD5 mRNA的表达逐渐升高,在第2～4h达到高峰,然后逐渐下降,于心肌硬死后12h后趋于平稳.
作者：孙利强；李晶；法宪恩 刊期： 2014年第05期
目的 探讨姜黄素(Cur)脂质体载药体系对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制.方法 通过薄膜分散-超声法制备Cur脂质体;采用噻唑蓝(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;采用荧光显微镜和高效液相色谱法(HPLC)考察PC-3细胞对Cur与Cur脂质体的摄取;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA与蛋白水平的变化.结果 (1) Cur脂质体与游离Cur比较,对PC-3细胞的抑制率更高(P＜0.05),使细胞形态变圆,并且具有浓度和时间依赖性,浓度为60 μmol/L和100 μmol/L的Cur和Cur脂质体组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).空白脂质体对PC-3细胞增殖无影响.(2)Cur脂质体可以促进PC-3细胞的药物摄取,并且细胞内的荧光强度持续时间长于游离Cur,具有一定的缓释作用;(3)Cur脂质体以浓度依赖性方式降低了PC-3细胞中MMP-2 mRNA的表达和MMP-2蛋白的含量,游离Cur组20、60和100 μmol/L组MMP-2蛋白表达率分别降低了15.30％、35.63％和44.80％,Cur脂质体组相应浓度组分别降低了19.40％、45.40％和55.10％.Cur脂质体抑制作用高于游离Cur对照组(P＜0.05).结论 Cur脂质体增加了前列腺癌PC-3细胞对含药脂质体的细胞摄取,进而增强了胞内药物的细胞毒性,并且通过下调MMP-2而抑制PC-3细胞的转移能力,该制剂具有一定的长效靶向作用,可以更好地发挥抗前列腺癌作用.
作者：田雨冬；关延彬；张玉琼；贾永艳 刊期： 2014年第05期
目的 建立人乳房脂肪来源干细胞(hbASCs)分离、培养的方法,并研究其形态特点、生物学特性及表面相关标志.方法 取乳房缩小术中切除乳腺组织内脂肪,采用Ⅰ型胶原酶消化贴壁法分离原代脂肪来源干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态特点、生物学特性,透射电子显微镜观察细胞超微结构,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法绘制细胞生长曲线,以免疫荧光法和流式细胞仪对其表面标志物进行鉴定,并向成脂、成骨定向诱导.结果 原代hbASCs呈长梭形贴壁生长,呈漩涡样,经传代后形态均一.经冻存复苏后存活率达85.7％,仍可维持较好的细胞活性、生长和增殖能力.可阳性表达间充质干细胞生长特性相对特异性标志物CD44、CD105,经油红O和茜素红染色鉴定证实体外可成脂、成骨定向分化.结论 可从人乳腺脂肪组织中成功分离获取脂肪组织来源干细胞,为组织工程化乳房提供了取材方便、不增加供区的种子细胞来源.
作者：杨杰；郭能强；熊凌云；孙家明 刊期： 2014年第05期
目的 观察RNA结合蛋白38(RNPC1)基因过表达对人乳腺癌细胞BT474的生物学特性的影响.方法 细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组,采用慢病毒转染法,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验观察其对BT474细胞生物学特性的影响.结果 CCK-8实验显示,空白对照组、阴性对照组和实验组6d时吸光度(A)值分别为0.7147 ±0.0189、0.770 8±0.016 0、0.5568 ±0.043 6(P ＜0.05).克隆形成实验显示,14 d时细胞克隆形成数分别为(113.300 ±3.528)、(118.700 ±2.404)、(47.330±2.906)个(P＜0.01).Transwell小室实验显示,实验组细胞24h迁移、侵袭实验中滤过膜细胞数分别为(61.670 ±4.842)、(14.670±1.856)个,均比空白对照组和阴性对照组降低(P＜0.01).Western blot法显示,过表达RNPC1a下调基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白表达(P＜0.01).结论 RNPC1a基因可以抑制BT474细胞的生物学特性.RNPC1a与MMP-2的相互作用关系在乳腺癌的侵袭和转移中起调节作用.
作者：薛金秋；梁秀清；成琳；石靓；王莹；丁强 刊期： 2014年第05期
目的 观察右美托眯定对乳腺癌根治术患者围术期外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法 40例择期全麻下行乳腺癌根治术的患者随机分为右美托咪定组(D组)和对照组(C组).D组于麻醉诱导前在15 min内静脉泵人0.5μg/kg右美托咪定,麻醉诱导插管后,持续静脉输注右美托咪定0.4 μg/(kg·h).C组用等容量的生理盐水代替右美托咪定,其余麻醉药物均同D组.使用流式细胞术检测麻醉诱导前(T0)、术毕6h(T1)、术后1 d(T2)、术后2 d(T3)和术后3 d(T4)外周血T淋巴细胞亚群中簇分化抗原(CD)3+T、CD4+T、CD8+T、CD4 +/CD8+、辅助性T细胞(Th)1、Th2、Th1/Th2、Th17、调节性T细胞(Treg)水平.结果 两组在T0的T淋巴细胞亚群水平差异无统计学意义(P＞0.05).在C组中,T2时CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、Th1、Th1/Th2分别为(55.9±4.6)％、(40.7±2.6)％、1,7±0.4、(23.1±3.9)％、11.2±3.7,T3时CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、Th1和Th 1/Th2分别为(54.8±8.4)％、(40.8±2.2)％、1.7±0.2、(23.6±3.3)％和11.2±3.5,与T0比较均显著降低,Treg在T2和T3时显著升高(P＜0.05).D组各时间点无明显变化.与C组同一时间点比较,D组T2和T3时CD4+、CD4+/CD8+、Th1和Th1/Th2显著升高,Treg显著降低(P＜0.05).结论 乳腺癌癌根治术患者在术后存在短暂的细胞免疫抑制状态,全麻期间持续静脉输注右美托咪定可有效抑制乳腺癌根治术患者围术期的应激反应,减轻术后细胞免疫功能的抑制.
作者：傅钢兰；王萌；徐晓莹；郭明炎；刘玲；纪风涛；曹铭辉 刊期： 2014年第05期
目的 观察微小RNA(miR)-155在乳腺癌中的表达及对乳腺癌HBL-100细胞株迁移能力的影响.方法 通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测60例正常乳腺组织及60例乳腺癌组织中miR-155的表达水平,分析其与临床病理特征的关系.同时在乳腺癌HBL-100细胞株中分别转染miR-155-mimics及抑制物,采用Transwell小室实验检测细胞的迁移能力.结果 miR-155在乳腺癌中的表达明显高于正常乳腺组织(P＜0.01),其表达与淋巴结转移及TNM分期明显相关(P＜0.05).Transwell实验检测结果表明miR-155过表达后,细胞的迁移数为(46.3±4.6)个,明显高于对照组[(31.6±2.2)个,P＜0.05];而miR-155表达下调后,细胞的迁移数明显减少,为(20.0±1.9)个(P＜0.05).结论 miR-155表达与乳腺癌的形成密切相关,并影响细胞的迁移能力.
作者：户庄；马明德；周振宇；常亮 刊期： 2014年第05期
目的 观察他莫昔芬(TAM)联合MCF-7细胞株上清对MDB-DA231细胞株存活率的影响.方法 细胞计数试剂盒(CCK-8)检测TAM对MCF-7和MDA-MB-231杀伤能力的差异;CCK-8及流式细胞仪(FCM)检测MCF-7细胞株上清对MDB-DA231细胞株存活率的影响以及MCF-7细胞株上清联合TAM对MDB-DA231细胞株存活率的影响.结果 在15 μmol/L TAM培养条件下,MCF-7细胞存活率低于MDA-MB-231细胞存活率[(3.03±0.32)％比(45.06±14.29)％],差异有统计学意义(P＜0.05);在MCF-7细胞上清培养条件下,MDA-MB-231细胞存活率低于培养基对照组[(83.79±2.58)％比(99.99±1.07)％)],差异有统计学意义(P＜0.05);在MCF-7细胞株上清联合TAM培养条件下,MDA-MB-231细胞存活率低于培养基对照组[(1.61±0.15)％比(99.99±1.07)％],差异有统计学意义(P＜0.05).在15 μmol/L TAM培养条件下,MDA-MB-231被抑制在G0～ G1期[(59.14±0.39)％比(50.28±0.0.52)％],差异有统计学意义(P＜0.05);在MCF-7细胞上清培养条件下,MDA-MB-231细胞周期无明显变化(P＞0.05);在MCF-7细胞株上清联合TAM培养条件下,MDA-MB-231被抑制在G0～ G1期[(60.79±0.67)％比(59.14±0.39)％],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MCF-7细胞上清能够增强TAM对MDA-MB-231细胞株的杀伤能力.
作者：王龙强；郭雅文；赵向旺；刘泽明；黄韬 刊期： 2014年第05期
目的 观察腺病毒介导的白细胞介素-10(IL-10)基因(Ad-IL-10)转染肝星状细胞(HSC)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的细胞凋亡及信号转导和转录活化因子-1(STAT-1)表达的影响.方法 以293细胞包装构建重组腺病毒载体系统Ad5-hIL10-IRES-增强型绿色荧光蛋白(EGFP).将体外培养的人HSC分为5组:空白对照组、空载组、TNF-α(10 μg/L)组、空载组+TNF-α(10 μg/L)组、Ad-IL-10+ TNF-α(10 μg/L)组.流式细胞仪检测HSC细胞的凋亡比例;Western blot检测HSC细胞STAT-1及其磷酸化蛋白水平.结果 成功构建Ad5-hIL-10-IRES-EGFP;流式细胞仪检测显示TNF-α诱导使HSC凋亡率显著增加,Ad-IL-10干预可使HSC凋亡率下降(P＜0.05);其凋亡率分别为:空白组0.010±0.001,TNF-α组0.230±0.090,空载组0.210±0.080,IL-10组0.070±0.030.Westernblot检测显示,TNF-α诱导后STAT-1磷酸化蛋白水平显著增加,而Ad-IL-10干预可使两者水平下降(P＜0.01);各组STAT-P/STAT-1吸光度值分别为:空白组0.028±0.006,空载组0.025±0.007,TNF-α组0.261±0.085,空载对照组0.254±0.065,IL-10组0.029±0.009.结论 IL-10能抑制TNF-α诱导HSC细胞发生凋亡,其信号途径与STAT-1有关.
作者：张莉娟；黄月红；陈治新；陈运新；郑伟达；王小众 刊期： 2014年第05期
目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3-β(LC3-Ⅱ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测48例肝细胞癌组织及正常肝组织中mTOR、LC3-Ⅱ的表达,并分析其在癌组织中表达的相关性及与临床病理因素的关系.结果 mTOR在HCC中的表达阳性率(54.17％)明显高于正常肝组织(20.00％,P＜0.05),且与分化程度、包膜侵犯明显相关(P ＜0.05);LC3-Ⅱ在HCC中的表达阳性率(47.92％)明显低于正常肝组织(83.33％,P＜0.05),且与TNM分期、分化程度相关(P＜0.05);mTOR与LC3-Ⅱ在HCC中的表达呈负相关(r =0.35,P＜O.05).结论 肝细胞癌中的自噬活性或自噬潜能降低,可能参与肝癌的发生、发展.联合检测自噬相关mTOR、LC3-Ⅱ可明显提高肝细胞癌的诊断敏感性.
作者：宋孟锜；薛寅凯；孙运秀；窦东伟；程平；陈立波 刊期： 2014年第05期
目的 探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测66例乳腺癌患者手术切除的癌组织和相应癌旁组织中Cdc42和MMP-9的表达水平.结果 Cdc42在乳腺癌组织中表达率为80.30％,在癌旁组织中表达率为25.76％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),Cdc42表达水平与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);MMP-9在乳腺癌组织中表达率为72.73％,在癌旁组织中表达率为12.12％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),MMP-9表达水平与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05).结论 Cdc42及MMP-9过表达在乳腺癌的发生发展及浸润转移中具有一定作用.
作者：宋琦；詹颖瑛；王武玲；钱江虹 刊期： 2014年第05期
目的 探讨氯胺酮麻醉对7d龄SD大鼠成年后情绪的影响及其机制.方法 选取7d龄(P7)SD大鼠40只,随机分为两组:分别腹腔注射生理盐水0.25 ml(NS组)和氯胺酮组50 mg/kg(K组),每隔30 min重复1次,共4次.6h后各组随机取5只幼鼠前额皮质,行Western blot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平;余饲养至30 d行行为学测试:糖水偏好实验(SPT)及旷场实验(0FT);随后取脑行尼氏染色检测前额皮质神经元密度.结果 麻醉后6h,K组幼鼠前额皮质Caspase-3的表达显著升高,差异有统计学意义(n=5,P＜0.05);30 d时,K组大鼠前额皮质第Ⅲ层神经元密度明显低于NS组[NS组:(1 367±79)/mm2,K组:(1 105±73)/mm2,n=6,P ＜0.05];30d时,和NS组比较,K组SD大鼠中心区探索时间显著减少[NS组:(25.9±2.2)s,K组:(16.5±2.0)s,n=15,P＜0.01];且糖水饮用率显著降低[NS组:(77.0±2.5)％,K组:(60.0±4.3)％,n=15,P＜0.01].结论 SD大鼠幼年期氯胺酮麻醉后可致成年抑郁和焦虑样情绪障碍,可能和前额皮质区凋亡相关蛋白表达增加及神经元密度下降有关.
作者：魏伟；黄海城；林跃华；李传翔 刊期： 2014年第05期
人促肾上腺皮质激素(ACTH)受体(ACTHR,又称MC2R)主要分布于肾上腺皮质束状带和球状带,参与调节醛固酮和皮质醇激素分泌.本研究旨在检测醛固酮瘤、皮质醇瘤及无功能腺瘤中ACTHR的表达,探讨其在肾上腺肿瘤成瘤机制中的作用.一、材料与方法1.一般资料:研究所取肾上腺肿瘤标本来自我科手术切除病例,其中醛固酮瘤10例,皮质醇瘤12例,无功能腺瘤6例,平均年龄(48±7)岁;各肿瘤类型经术前生化检验、肾上腺激素全套及术后病理诊断结果所确诊.正常肾上腺标本来源于肾上腺无受累的肾癌或肾盂癌根治术,共9例,平均年龄(47±10)岁.
作者：胡东亮；王行环；丁协刚；曹锐；倪栋 刊期： 2014年第05期
目的 观察二氧化铈(CeO2)纳米颗粒预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关基因B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达的影响.方法 将40只健康SD雄性大鼠随机分为5组,即假手术组(Sham,n=8)、心肌缺血再灌注损伤模型组(L/R,n=8)、I/R+CeO2不同纳米粒径组(1～10、10～25、50 nm,n=24).建立在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理学改变;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定凋亡相关基因bcl-2、bax、Caspase-3 mRNA表达水平.结果 与Sham组比较,I/R组和I/R+CeO2不同纳米粒径组均出现明确的心肌缺血和心肌梗死区域;I/R+ CeO2(10～25 nm)组心肌细胞损伤程度轻,细胞凋亡率显著低于I/R组(P＜0.01);I/R+ CeO2不同纳米粒径组心肌细胞中bcl-2 mRNA表达水平较I/R组显著升高(P＜0.01),bax和Caspase-3 mRNA表达水平较I/R组明显降低(P＜0.01).结论 CeO2纳米颗粒能够一定程度抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡作用,其中10 ～25 nm CeO2纳米颗粒对心肌组织的保护作用显著.抗凋亡机制可能与其上调抗凋亡基因bcl-2和下调促凋亡基因bax、Caspase-3的表达有关.
作者：朱方涛；法宪恩；吕瑞涛；黄真锋；余海彬；高勇；赵建明 刊期： 2014年第05期
目的 应用小鼠肝星状细胞(HSC)与小鼠成体肝脏干细胞(AHPC)体外间接共培养模型,观察HSC旁分泌途径对AHPC增殖及代谢功能的影响.方法 分别建立HSC及AHPC细胞分离及培养模型.进一步选择Transwell 6孔板,建立小鼠HSC与AHPC间接共培养模型.在共培养24 h和96 h后,计算AHPC克隆数及克隆形成率;共培养14 d后,行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)增殖实验,计算AHPC细胞克隆内BrdU阳性的细胞数,评估细胞增殖能力.同时,收集细胞上清液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞代谢产物以评估细胞的代谢能力.通过以上方法比较HSC组和空白对照组中AHPC在克隆形成率、细胞增殖及代谢功能上的差异.结果 HSC组AHPC的克隆形成率为(26.88±3.31)％,对照组为(20.11±2.34)％(P＜0.05).BrdU增殖实验提示,对照组内BrdU/白蛋白双阳性细胞为(69.50±18.81)/高倍视野,较HSC组增多61.29％ (P＜0.01).代谢功能方面,HSC组AHPC细胞上清液中白蛋白(Albumin)和尿素(Urea)的浓度分别为(14.17 ±3.14) mg/(L·d)和(34.83 ±11.41) mg/(L·d),比对照组分别提高72.17％和66.89％(P＜0.05).结论 一定数量的HSC在体外培养时能提高AHPC克隆形成率,促进细胞增殖分裂,细胞代谢功能亦相应增强.
作者：常文举；宋陆军；徐兴远；王洪山；高晓东；牛伟新；秦新裕 刊期： 2014年第05期
目的 检测半乳糖凝集素l(Galectin-1)在胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织的表达,探讨其与胃癌发生、发展、侵袭转移及预后的关系.方法 (1)用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组织化学法检测124例临床组织标本(包括正常胃组织124例,癌旁组织124例,胃癌组织124例)中的Galectin-1蛋白的表达.(2)用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及Western blot分析Galectin-1在124对胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中的表达.(3)用采用Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,Log-rank法分析患者生存情况.结果 胃癌组织中Galectin-1的表达水平(特别是低分化胃癌组织中Galectin-1的表达)显著高于癌旁组织及正常胃组织(P＜0.01).Galectin-1阳性的患者术后生存时间普遍低于Galectin-1阴性的患者.Galectin-1阳性的胃癌患者术后复发率及转移率明显高于Galectin-1阴性的患者.结论 Galectin-1在胃癌的侵袭转移过程中起着重要的作用,与胃癌淋巴结转移及患者术后预后密切相关.
作者：李萍；汤东；李清国；王道荣 刊期： 2014年第05期
脐带中富含的间充质干细胞具有多向分化潜能[1].本研究旨在比较不同分离方法对脐带间充质干细胞(UCMSC)形态学影响,探讨其向成骨、成脂及肝样细胞分化的能力.一、材料与方法1.UCMSC分离培养:脐带取自健康足月剖宫产新生儿,经浙江大学医学院附属邵逸夫医院伦理委员会批准.分别参照既往研究中植块法、参照文献[2]中胶原酶消化法进行分离培养.2.UCMSC免疫表型检测:收集P4、P8代UCMSC,分别加入CD13、CD31、CD34、CD45、CD105、CD106、CD166、人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ单抗及同型对照10μl,流式细胞仪检测.
作者：汤佳城；蔡秀军；梁霄；王一帆；刘敬华；刘小龙 刊期： 2014年第05期
目的 构建CD133慢病毒表达载体,建立稳定过表达CD133的人胃腺癌SGC7901细胞株.方法 聚合酶链反应法扩增CD133基因全长序列,将序列插入pGMLV-PB1-1载体,构建pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体,随后转入293T细胞中对慢病毒进行包装,用获得的慢病毒毒液感染人胃腺癌细胞株SGC7901.建立稳定过表达CD133的SGC7901细胞株.荧光显微镜下观察pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体的转染效果,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测了SGC7901、pGMLV-PB1-1-SGC7901和pGMLV-PB1-1-CD133-SGC79013种细胞中CD133 mRNA及蛋白的表达水平.结果 经限制性内切酶鉴定及测序分析,我们成功构建了pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体质粒.Western blot结果显示,pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体质粒成功转染293T工具细胞,pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体有较好的过表达效果.pGMLV-PB1-1-SGC7901和pGMLV-PB1-1-CD133-SGC7901细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光,并且转染效率高.RT-PCR和Western blot检测显示,与对照组比较,转染pGMLV-PB1-1-CD133慢病毒表达载体组的细胞,CD133的表达在mRNA和蛋白两个水平均显著提高(1.160 ±0.051、0.835±0,077),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建CD133慢病毒表达载体和SGC7901-CD133细胞株.
作者：朱优龙；姜波健；王守练；吴巨钢；俞继卫 刊期： 2014年第05期
目的 肝脏非实质细胞主要包括肝星状细胞、肝窦内皮细胞和巨噬细胞,上述3种细胞在肝硬化、肝癌等疾病的发生和进展中起重要作用;本研究旨在建立上述3种肝非实质细胞的分离方法,培养并鉴定其纯度.方法 采用体外酶灌注消化肝脏,将肝脏组织剪碎并进一步消化成单细胞悬液,密度梯度离心技术结合贴壁培养分离法分离肝脏非实质细胞,以锥虫蓝染色检测分离所得细胞的存活率,采用自发荧光、细胞形态观察、免疫荧光以鉴定所获得细胞.结果 从大鼠肝脏分离出的3种非实质细胞纯度较高,大于90％;其中肝星状细胞、肝窦内皮细胞存活率在85％以上,可传代培养7 ～10代.结论 本研究采用体外酶灌注消化法结合密度梯度离心技术,从大鼠肝脏成功分离肝星状细胞、肝窦内皮细胞和肝巨噬细胞,该方法相对简单、易操作.
作者：王志明；董银英；周乐源；贾庆安；刘彬彬；叶胜龙 刊期： 2014年第05期
目的 探讨POK红系髓性致癌因子(Pokemon)和锌指转录因子Snail在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法 采用免疫组织化学法检测70例乳腺癌患者手术切除的癌组织和相应癌旁组织中Pokemon和Snail的表达水平.结果 Pokemon在乳腺癌组织中表达率为72.86％,在癌旁组织中表达率为37.14％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),Pokemon表达水平与乳腺癌淋巴结转移明显相关(P＜ 0.05);Snail在乳腺癌组织中表达率为81.43％,在癌旁组织中表达率为27.14％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),Snail表达水平与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 检测Pokemon及Snail的表达与乳腺癌患者的临床病理特征及预后有关.
作者：张利新；吕小平；周咏梅；黄金峰 刊期： 2014年第05期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
