王艳萍；赵先群；张向东；许威；向晓辉
目的：探讨趋化因子受体7（CCR7）及血管内皮生长因子C（VEGF－C）蛋白在乳腺癌组织中的表达水平，并分析二者与乳腺癌预后的关系。方法：采用免疫组织化学技术，联合检测CCR7和VEGF－C蛋白分别在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达差异情况，并分析二者与乳腺癌各相关临床病理特征之间的关系。采用Kap－lan－Meier法来评估CCR7及VEGF－C蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。结果： CCR7蛋白在乳腺癌组织（68％）中的阳性表达率高于正常乳腺组织（30％），差异有统计学显著性（P＜0．01）；而VEGF－C蛋白在乳腺癌组织（71％）中的阳性表达率也明显高于正常乳腺组织（24％），差异也有统计学显著性（P＜0．01）。且在乳腺癌组织中，CCR7与VEGF－C蛋白的表达呈正相关关系（r＝0．613，P＜0．01）。 CCR7和VEGF－C蛋白的高表达均与淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0．05），而与年龄、肿瘤大小、雌激素受体和孕激素受体均无关。 CCR7及VEGF－C蛋白阳性表达者的生存期低于阴性表达者，两组比较差异有统计学显著性（ P＜0．05）。结论： CCR7与VEGF－C的异常高表达可能与乳腺癌预后关系密切，二者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。
作者：刘清华；于国华；刘雨清 刊期： 2016年第08期
目的：房室传导阻滞是心脏电激动传导过程中，发生在心房和心室之间的电激动传导异常，可导致心律失常。前期，我们发现一个遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病家系，本次工作主要对其致病基因及机制进行研究。方法：采用候选基因测序的方法对已经确诊为房室传导阻滞的心脏病患者进行致病基因分析，对报道与心脏病相关的 TRP4、 SCN5A、 SCN1B、NKFX2．5、CLCA2和LMNA共6个基因测序并确定致病基因；构建致病基因的野生型和突变型质粒；克隆野生型和突变型，激光共聚焦显微镜检测野生和突变型蛋白在细胞定位，利用Western blot检测目的蛋白的表达情况对该突变功能进行分析。结果：遗传学分析显示在家系中患者LMNA基因第10号外显子缺失，并与疾病共分离。 Western blot结果显示突变型lamin蛋白表达水平正常，定位结果显示，野生型蛋白位于细胞核核膜，而突变型蛋白在核膜上和核内均有表达。 LMNA异常可引起房室结细胞死亡与纤维化，导致房室传导速率降低，并发生房室传导阻滞。自噬和凋亡是细胞死亡的重要形式，LC3－II是检测自噬的标志蛋白。应用Western blot检测LC3－II，结果显示LMNA突变不影响该蛋白表达。结论：本次研究中，我们发现了一个新的导致遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病的LMNA基因突变，该突变可使其编码的蛋白不能正确定位于细胞核膜，导致细胞核核纤层结构异常。核纤层在细胞分裂中呈现周期性的变化，因此核纤层的异常会对细胞正常周期产生重要影响从而导致细胞的异常死亡。这可能是导致该家族成员发生房室传导阻滞的原因。
作者：曹祝兵；李思思；臧小彪；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：Mip2是心肌缺血后适应的一个分子靶点，其表达能抑制氧化应激诱导的心肌细胞凋亡。基于MIP2为WD蛋白，本科室冯衍生博士利用大鼠心肌缺血再灌注动物模型，对MIP2可能的相互作用蛋白进行了筛选，质谱鉴定了若干个蛋白质，其中包括VDAC，但VDAC包括VDAC1、VDAC2和VDAC3，它们与MIP2的关系尚不清楚。本研究在此基础上进一步深入探讨MIP2的心肌细胞保护机制。方法：首先构建了MIP2和VDAC真核表达载体，利用了基因共转染探讨MIP2与VDAC可能的相互作用；然后采用不同的抗体免疫共沉淀加Western blot免疫印迹技术，主要探讨MIP2与VDAC1的相互作用；利用免疫荧光定位探讨MIP2与VDAC1在H9c2细胞内的分布；采用MIP2的结构突变，研究MIP2与VDAC1相互作用的结构域；后通过MIP2的全长与突变体探讨其对H9c2心肌细胞膜电位与细胞死亡率的影响，观察MIP2及其与蛋白相互作用对氧化应激损伤心肌细胞的保护作用。结果：MIP2与VDAC基因共转染后免疫共沉淀加Western blot 鉴定，结果显示MIP2与VDAC1和VDAC2有相互作用关系，与VDAC3无相互作用；GFP与VDAC1抗体免疫共沉淀进一步证明了这种相互作用；细胞免疫共定位显示，MIP2与VDAC1分布于细胞同一区域，支持其在细胞中存在相互作用；MIP2结构突变显示，位于其C端的WD40是与其它蛋白相互作用的结构域。心肌细胞转染基因后施以氧化应激处理，结果显示，虽然MIP2全长能抑制氧化应激诱导的H9 c2心肌细胞线粒体膜电位降低和细胞死亡，但其蛋白结合结构域不能有效抑制这种诱导性的膜电位降低与细胞死亡。结论：VDAC1是MIP2的一个作用靶点，MIP2 C端的WD40是其与VDAC1相互作用的一个结构域。 MIP2能抑制氧化应激诱导的心肌细胞线粒体膜电位降低与细胞死亡，其机制可能与调节VDAC1有关。
作者：蒋磊；陈广斌；王浩；刘可；张华莉；肖献忠 刊期： 2016年第08期
线粒体作为细胞能量代谢的重要场所，通过氧化磷酸化过程生成ATP为细胞供能。近年的研究表明，线粒体除具有能量生成功能之外，还参与母性遗传、多种生物大分子代谢以及细胞程序性死亡等病理过程。由此可见，线粒体的自身内源性平衡直接决定细胞的命运，线粒体的生成和自噬保持动态平衡。神经元主要以氧化磷酸化提供能量，维持神经元内各种生物学功能的完整，因此神经元内线粒体总体积分数约占细胞体积的30％。脑组织缺血再灌注将导致神经元线粒体结构破坏，线粒体DNA数量减少，生成能力降低，终引起线粒体氧化磷酸化功能下降，导致神经元能量匮乏而凋亡。
作者：王来；祝世功 刊期： 2016年第08期
目的：IL－37是白细胞介素－1家族成员，可调节血管生成，抑制肿瘤生长，对I／R损伤、炎症性肠道疾病和类风湿性关节炎等有保护作用。由于炎症反应能导致组织氧供应失衡，使局部组织细胞处在缺氧的微环境，因而，本实验主要针对IL－37是否在缺氧环境中发挥细胞保护作用进行研究。方法：分别给予1％和21％ O2培养上皮细胞。通过瞬时转染使细胞过表达IL－37，24 h后提取RNA和蛋白质。利用RT－PCR检测IL－37、TNF－α、IL－1、IL－6和CXCL2 mRNA的表达；利用Western blot 检测PARP的总蛋白和剪切蛋白的表达量。利用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：缺氧时，细胞凋亡增加1．63倍，内源性IL－37和促炎因子mRNA水平的表达均显著增加，PARP总蛋白表达增加2．1倍。 IL－37可显著抑制缺氧诱导的细胞凋亡，并显著降低IL－6和CXCL2的mRNA水平，但其对可以修复DNA的PARP总蛋白的表达在缺氧时无明显作用， caspase－3剪切的PARP也无显著差异。结论：在缺氧环境中，IL－37作为固有免疫调节因子，可以通过抑制细胞凋亡，炎性因子IL－6和CXCL2的表达抑制局部的过度炎症反应。但TNF－αmRNA的表达和caspase－3剪切底物PARP的剪切蛋白无显著变化，提示IL－37不是通过减少TNF－α的表达、进而减少FADD和caspase－8的募集、再减少活化caspase－3的途径抑制细胞凋亡的。其具体抑制凋亡的机制有待进一步研究。
作者：周梦晨；姜桂青；李倩倩；王孟茹；廖玉华；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：探究张应变条件下microRNA－33（miR－33）调控移植静脉内膜增生的机制，为缓解静脉移植内膜增生提供潜在治疗方法。方法：SD大鼠进行“套管法”自体静脉移植，Elastin－van Gesion染色观察内膜增生情况。使用FX4000细胞应力加载装置（ Flexcell International ）对静脉平滑肌细胞加载频率1．25 Hz、幅度10％的张应变以模拟静脉在动脉环境受到的张应变力学刺激。 qRT－PCR检测miR－33表达，Western blotting检测相关蛋白，BrdU增殖实验和CCK－8试剂盒检测细胞增殖。双萤光素酶报告基因验证miR－33与靶基因的作用关系。骨形态发生蛋白3（BMP3）特异性siRNA干扰片段、重组蛋白以及miR－33 in－hibitor和mimics用于研究细胞功能和相关信号通路。在体局部注射miR－33 agomir和antagomir来验证miR－33在静脉移植内膜增生中的作用。结果：移植静脉出现明显内膜增生，miR－33显著降低，而BMP3、p－Smad5和p－Smad2表达明显上升；牵拉条件下得到与移植静脉中相同的结果。双萤光素酶报告基因实验证明BMP3是miR－33的靶基因。 miR－33 mimics抑制BMP3及下游信号分子p－Smad2、p－Smad5表达和细胞增殖； miR－33 inhibitor 或者BMP3重组蛋白得到类似结果。在体注射miR－33 agomir降低BMP3及下游信号分子表达，亦可缓解静脉移植内膜增生。结论：miR－33－BMP3－Smad信号通路参与移植静脉平滑肌细胞增殖；miR－33可以缓解静脉移植内膜增生过程，具有潜在临床应用前景。
作者：黄凯；包晗；严志强；王璐；张萍；姚庆苹；施茜；陈小虎；王凯旋；沈宝荣；齐颖新；姜宗来 刊期： 2016年第08期
目的：心肌肥厚是心脏对于压力负荷或者容量负荷所产生的适应性反应。细胞色素P450表氧化酶2J2（CYP 2J2）及其代谢产物EETs可以发挥抵抗心肌肥厚的作用，而其中的机制仍有待进一步探索。方法和结果：在体内研究中，我们采用PPARα缺陷小鼠以及野生小鼠为研究对象，并采用血管紧张素II（ Ang II）诱导小鼠发生心肌肥厚。结果表明，Ang II可以明显诱导心肌肥厚，具体包括心脏肥大、心脏功能减低和心肌肥厚标志物表达增加。而在野生小鼠中，CYP 2J2过表达可以抑制Ang II所诱导的心肌肥厚，但是这一抑制作用在PPARα缺陷小鼠则没有体现。在离体研究中，我们以大鼠乳鼠心肌细胞作为研究对象并采用Ang II作为诱导因子。研究表明，外源性加入11，12－EET可明显抑制Ang II所诱导的心肌肥大，而PPARα特异性阻断剂GW6471可以阻断11，12－EET的作用，并且这一作用可能与Ras／MAPK以及NF－κB通路有关。另外，我们通过荧光报告基因系统以及染色质免疫沉淀实验证实， PPARα可以直接结合到caveolin－1的转录子区，并诱导caveolin－1的表达，而且采用siRNA介导caveolin－1的沉默，可以抑制11，12－EET抵抗Ang II的效应。结论：CYP 2J2及其代谢产物EETs可以通过PPARα缓解Ang II诱导的心肌肥厚，这一作用可能与其在转录水平上调caveolin－1的表达，并进一步抑制Ras／MAPK和NF－κB通路有关。
作者：赖金胜；陈琛；唐家荣；汪道文 刊期： 2016年第08期
目的：研究全反式维甲酸（ all－trans retinoic acid，ATRA）对胃癌细胞SGC－7901存活率与放射敏感性的影响，并讨论其可能的机制。方法：MTT法检测细胞存活率；平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞的放射敏感性和细胞周期；实时荧光定量PCR（ RT－qPCR）检测细胞中Bax、Bcl－2、survivin与NF－κB的mRNA表达。结果：ATRA可降低SGC－7901细胞存活率，当浓度到达8μmol／L时，抑制作用达到大；ATRA联合X射线处理后，与单纯放射处理相比，平均致死剂量（D0）和准阈剂量（Dq）显著变小（P＜0．05），且拟合的生存曲线明显下移；ATRA能显著降低放射诱导的细胞G2／M期阻滞，下调SGC－7901细胞Bcl－2与survivin的mRNA表达（ P＜0．05），上调Bax与NF－κB的mRNA表达（P＜0．05）。结论：ATRA能够增加胃癌细胞SGC－7901的凋亡及放射敏感性，可能与抑制细胞周期G2／M期的阻滞作用、下调Bcl－2与survivin mRNA表达和上调NF－κB与Bax mRNA表达有关。
作者：王艳萍；赵先群；张向东；许威；向晓辉 刊期： 2016年第08期
目的：淋巴细胞表达胱硫醚γ裂解酶（ cystathionine γ－lyase， CSE）／硫化氢（ hydrogen sulfide ， H2 S），但其是否参与高血压发病尚不清楚。本课题旨在探讨淋巴细胞CSE／H2 S拮抗高血压的免疫调节机制。方法：收取高血压患者及匹配的健康对照纳入研究。亚甲基蓝法检测外周淋巴细胞H2 S产率，Western blot 检测蛋白表达及磷酸化，RT－qPCR检测mRNA表达，biotin－switch法检测蛋白质硫氢化修饰。结果：高血压组外周血淋巴细胞CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平明显低于正常血压组，药物治疗血压恢复后CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平也恢复至正常水平。 SHR大鼠给予NaHS治疗4周后，动脉血压显著下调，同时Th17细胞亚群下调，而Treg亚群上调。分离小鼠脾脏CD4＋T细胞，siRNA下调CSE或PAG均可抑制Treg的分化，减少IL－10的分泌。反之CSE过表达或H2 S供体可促进Treg分化和IL－10分泌。提示CD4＋T细胞内源性CSE／H2 S可促进其向Treg亚群分化。 Treg细胞的分化受到能量代谢的调节。 CSE下调或PAG可抑制AMPK Thr172位点磷酸化，促进mTOR Ser2448位点磷酸化。反之CSE过表达或H2 S供体促进AMPK磷酸化，抑制mTOR磷酸化。 AMPK Thr172位点磷酸化受LKB1激酶调控，H2 S可促使LKB1 Cys430位点发生硫氢化修饰进而增加LKB1的磷酸化水平。结论：淋巴细胞内源性H2 S可使LKB1 Cys430位点硫氢化修饰并激活LKB1／AMPK通路，促使Treg细胞的分化，并使Treg募集到肾脏、血管周淋巴节，局部分泌IL－10增加，发挥其抗高血压作用。
作者：杜从阔；范静慧；徐文静；林宪娟；郑凤娇；耿彬 刊期： 2016年第08期
目的：Sirtuin 3（Sirt3）是线粒体中NAD＋依赖去乙酰化酶，通过赖氨酸乙酰化调节线粒体能量代谢。气体分子H2S具有抗氧化应激、蛋白质硫化和乙酰化等功能。本实验探讨外源性H2 S调控2型糖尿病心肌线粒体脂肪酸氧化及其关键酶的机制。方法及结果：采用db／db小鼠作为2型糖尿病动物模型，给予外源性H2 S作为治疗组（腹腔注射NaHS 30μg／kg 12周）。 Western blot及免疫荧光检测显示db／db小鼠心肌组织CSE的表达及H2 S含量均明显低于NaHS组。提取心肌组织线粒体，给予外源性H2 S组脂肪酸氧化水平、CPT及LCAD的活性及蛋白表达水平明显低于 db／db小鼠。 Co－IP及LC－MS／MS分析，结果显示在db／db小鼠中CPT及LCAD的乙酰化水平明显高于NaHS组，线粒体氧耗呼吸率及线粒体ATP含量明显低于NaHS组。 Western blot结果证实db／db小鼠心肌线粒体中Sirt3、Nampt的表达及NAD＋／NADH的比值明显低于给予外源性H2 S组。高糖高脂处理乳鼠心肌细胞，给予Nampt抑制剂FK866及NaHS，Sirt3的表达下降，但CPT及LCAD表达、活性及乙酰化水平明显增高。结论：本实验证实气体分子H2 S通过调控Nampt－Sirt3－CPT／LCAD乙酰化水平改善高糖高脂时心肌线粒体的脂肪酸氧化。
作者：孙宇；刘宁；郁向静；卢方浩；张林雪；张伟华 刊期： 2016年第08期
目的：很多长链非编码RNA（lncRNA）在心血管系统中具有重要作用，其中某些lncRNA参与血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖与迁移的调控。方法：通过分析多例高血压病人与健康人群血浆lncRNA表达谱，筛选出在高血压病人与正常人群中差异表达的lncRNA进行深入分析研究。结果：通过比较高血压病人与正常人群血浆中lncRNA表达的不同，发现一条新的ln－cRNA———LncVSM，其在高血压病人的 VSMCs 中高表达。用腺病毒诱导 LncVSM 过表达能够增加由血小板源生长因子（PDGF）刺激引起的人主动脉平滑肌细胞（ HASMCs）的增殖，敲低LncVSM能够引起相反的效应。体外趋化实验表明过表达LncVSM后，HASMCs的迁移能力增强，若敲低LncVSM，无论PDGF或者AngII刺激，HASMCs的迁移能力均减弱。同时，研究发现过表达LncVSM后，α－SMA表达减少，OPN和collagen I表达升高；敲低LncVSM出现相反变化。 LncVSM能够直接与MYH11和FN－1结合，过表达或敲低LncVSM，其表达水平出现不同的变化。构建过表达LncVSM的转基因大鼠，与野生型大鼠比较，转基因鼠在10周龄出现自发性高血压，并且蛋白表达水平变化与细胞实验一致。结论：LncVSM是新发现的一条能够调控VSMCs表型转换并且与高血压相关的lncRNA。
作者：耿彬；林宪娟；金翎；范晓芳；王文洁；李晶；刘晓艳；鲍明慧；王怡丹；崔晓；杨磊；崔庆华；蔡军 刊期： 2016年第08期
Exosomes secreted by mesenchymal stem cells have shown great therapeutic potential in regenerative medicine .In this study, we performed meta-analysis to assess the clinical effectiveness of using exosomes in ischemia /reperfusion injury based on the reports pub-lished between January 2000 and September 2015 and indexed in the PubMed and Web of Science databases .The effect of exosomes on heart function was evaluated according to the following parameters:the area at risk as a percentage of the left ventricle , infarct size as a percentage of the area at risk , infarct size as a percentage of the left ventricle , left ventricular ejection fraction , left ventricular frac-tion shortening , end-diastolic volume , and end-systolic volume .Our analysis indicated that the currently available evidence confirmed the therapeutic potential of mesenchymal stem cell-secreted exosomes in the improvement of heart function .However , further mechanis-tic studies, therapeutic safety and clinical trials are required for optimization and validation of this approach to cardiac regeneration after ischemia/reperfusion injury .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：观察短暂反复缺血预处理（IPC）对肾缺血再灌注损伤（RI／RI）的影响。方法：成年健康雄性SD大鼠，体重150～180 g，随机分为：假手术（sham）组；缺血再灌（I／R）组；缺血预处理1次＋缺血再灌（1＋I／R）组；缺血预处理2次＋缺血再灌（2＋I／R）组；缺血预处理3次＋缺血再灌（3＋I／R）组。各组动物经1％戊巴比妥钠腹腔麻醉，开腹，暴露双侧肾动静脉。假手术组只开腹不夹闭双侧肾动静脉；I／R组夹闭双侧肾动静脉45 min后松夹再灌；1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R各组则分别夹闭双侧肾动、静脉5 min后再灌5 min 1次、2次和3次后再行夹闭双侧肾动静脉45 min后松夹再灌；再灌后逐层缝合腹膜，腹壁肌肉和皮肤。24 h后取血及双侧肾脏测定血清肌酐（ SCr）、血尿素氮（ BUN）以及肾组织丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果：与I／R组相比，1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R组BUN和SCr均明显降低（P＜0．05），其中以3＋I／R组BUN和SCr降低程度为著；I／R组MDA含量较sham组显著升高；SOD活力则较sham组明显降低（P＜0．01）；与I／R组相比，1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R组SOD活力均明显增加，而MDA含量则明显降低（P＜0．05），其中以3＋I／R组MDA含量降低得为显著。结论：短暂反复IPC可改善RI／RI大鼠肾功能，减轻肾组织损伤。
作者：仝飞；牛丽静；王慧娟；苗智慧；夏晓红 刊期： 2016年第08期
目的：探讨梅花鹿二杠茸和三岔茸水提物对顺铂（ CDDP）所致小鼠肾损伤的影响。方法：采用灌胃给药方式，用顺铂（15 mg／kg）诱导小鼠肾损伤模型，测定小鼠肾脏指数（KI）、血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、肾脏组织中超氧化物歧化酶（ SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH－Px）活性及丙二醛（ MDA）含量，并对肾脏组织进行HE染色，观察肾脏病理学变化，研究梅花鹿二杠茸和三岔茸的水提物各剂量对小鼠肾损伤的影响。结果：与顺铂组相比，各剂量鹿茸水提物可显著降低CDDP诱导肾损伤小鼠SCr、BUN水平及肾脏MDA含量，提高SOD和GSH－Px的活性（ P＜0．05）；明显改善肾组织病理学形态，减轻CDDP对肾小管上皮细胞的损伤程度，且同等浓度下，与三岔茸相比，二杠茸水提物能更好地改善肾功能及减轻病理损伤。结论：鹿茸水提物减轻顺铂引起的小鼠肾损伤，其作用机制可能与鹿茸水提物增强小鼠肾脏组织的抗氧化能力有关。
作者：董思敏；王海璐；王全凯；张晶 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate regulatory roles of Apelin in adventitial remodeling and fibrosis in rats with transverse aortic constriction ( TAC) .METHODS:The male Sprague-Dawley rats with TAC were randomized to daily deliver either pyroglutamyl Apelin-13 ( 50μg/kg) or saline for 4 weeks.RESULTS:Histomorphometric analysis by HE and Masson Trichrome staining revealed increased medi -al and adventitial thicknesses , especially in the adventitia , in ascending aortas in rats with TAC when compared with the sham-operated rats.Downregulation of APJ receptor and elevations in phosphorylated mTOR and ERK 1/2 levels were observed in rats with TAC . There are marked increases in heart weight ( HW) , HW/body weight ratio , and aortic fibrosis in rats with TAC .The pressure over-load-mediated pathological adventitial remodeling was strikingly rescued by Apelin-13, associated with attenuation of aortic fibrosis and reduced mRNA expression of TGF-β1, fibronectin and collagen I .CONCLUSION:Our results demonstrate the importance of Apelin-13 in amelioration of aortic adventitial remodeling and fibrosis in rats with TAC via modulation of the mTOR /ERK signaling , thus indi-cating potential therapeutic strategies by enhancing Apelin /APJ action for preventing pressure overload-and fibrosis-associated cardio-vascular disorders .
作者： 刊期： 2016年第08期
AIM:We investigated how AT 1-R stimulated by mechanical stresses induces cardiac fibrosis .METHODS:We produced in vivo cardiac pressure overload model in angiotensinogen knockout ( ATG-/-) mice and in vitro mechanically-stretched cell model in cultured neonatal cardiac cells of ATG-/-mice both lack the participation of Ang II .RESULTS: Pressure overload for 4 weeks in ATG-/-mice induced myocardial hypertrophy accompanied by the significant interstitial fibrosis , however , the TGF-β, a key regulatory factor of fibrosis, was not significantly increased in these ATG-/-mice.Meanwhile, the inhibitor for AT1-R significantly inhibited mechani-cal stress-induced cardiac fibrosis in these ATG-/-models whereas inhibition of TGF-βdid not.CONCLUSION:The results showed that mechanical stress-induced fibrotic responses through AT 1-R required the phosphorylation of Smad 2 but not the involvement of TGF-β.
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：探究血小板源微体介导的miR－142－3p转移对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法：芯片预测血小板中高表达而内皮细胞中低表达的miRNA；thrombin刺激SD大鼠源血小板， CD62P标记流式细胞术检测释放微体的数量， qPCR检测miR－142－3p和阳性对照miRNA－223的表达水平；荧光共聚焦显微镜观察血小板源微体黏附过程；Western blotting 和双萤光素酶报告实验验证miR－142－3p与靶基因的作用关系；ELISA BrdU试剂盒检测细胞增殖；cleaved caspase－9 ELISA试剂盒和annexin V／PI双标流式细胞术检测细胞凋亡；miR－142－3p inhibitor和mimics用于研究细胞功能和相关信号通路。结果：根据芯片预测结果筛选miR－142－3p为血小板中高表达、内皮细胞低表达的miRNA。血小板源微体刺激内皮细胞，通过黏附后融合将miR－142－3p转移入内皮细胞进而调控靶基因。通过miRNA靶基因预测软件和IPA筛选，预测BCLAF1为miR－142－3p的靶基因并通过双萤光素酶报告实验予以证实。血小板源微体以及miR－142－3p mimics刺激内皮细胞，BCLAF1蛋白表达显著降低，内皮细胞增殖明显增加，凋亡明显降低。结论：血小板源miR－142－3p可通过微体进入内皮细胞，调控内皮细胞增殖和凋亡，具有潜在临床应用前景。
作者：包晗；陈小虎；黄凯；姚庆苹；韩悦；张萍；姜宗来；齐颖新 刊期： 2016年第08期
目的：观察中电导钙激活钾离子通道（intermediate－conductance Ca2＋－activated K ＋channel， KCa3．1）在软脂酸（palmitic acid， PA）诱导的单核细胞跨内皮迁移中的作用及其调控机制。方法：分离2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells ， PBMCs）并培养人单核细胞株（THP－1 cells），以PA刺激，通过Western blotting、RT－PCR、ELISA及细胞迁移实验观察PA对PBMCs及THP－1细胞跨内皮迁移的影响及其与KCa3．1的关系、KCa3．1与MCP－1之间的关系并探讨其信号转导通路。结果：100μmol／L PA上调体重指数（body mass index， BMI）位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs KCa3．1的表达并促进其跨内皮迁移，对BMI≥28 kg／m2的T2DM患者PBMCs无影响；KCa3．1特异性阻滞剂TRAM－34、NF－κB阻滞剂PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）抑制PA诱导的BMI位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs跨内皮迁移；TRAM－34和KCa3．1特异性siRNA显著减少PA（200μmol／L）诱导的THP－1细胞跨内皮迁移及THP－1细胞中MCP－1的分泌和表达，anti－TLR2／4（4 mg／L）、p38MAPK抑制剂SB203580（10μmol／L）及 SB202190（10μmol／L）、PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）显著减少PA诱导的THP－1细胞中KCa 3．1和MCP－1的表达。结论：PA通过TLR2／4－p38MAPK－NF－κB通路上调KCa3．1促进MCP－1的表达，进而诱导单核细胞的跨内皮迁移。
作者：马晓真；赵丽梅；庞正达；邓秀玲 刊期： 2016年第08期
目的：高张应变诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells， VSMCs）异常增殖在高血压血管重建发生发展中起重要作用。本研究探讨细胞核骨架（ nuclear envelope ，NE）在其中的作用及其机制。方法：应用腹主动脉缩窄构建高血压大鼠动物模型；应用FX4000张应变加载系统对体外培养大鼠胸主动脉VSMCs分别施加5％（正常生理状态）和15％（模拟高血压状态）幅度的周期性张应变；Western blot检测NE蛋白emerin和lamin A蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀、芯片（ CHIP－on－chip）结合MOTIF生物信息学分析检测与emerin和lamin A结合的DNA序列及其特性；protein／DNA array检测抑制emerin或lamin A表达后转录因子活性变化。结果：高血压大鼠颈总动脉emerin和lamin A表达水平明显降低，中膜VSMCs增殖明显增加；体外加载15％周期性张应变模拟高血压病理条件下VSMCs受到的张应变力学刺激，VSMCs的emerin和lamin A表达明显降低，细胞增殖明显增加，这一作用可被emerin或lamin A的高表达载体转染所部分逆转。 emerin和lamin A能够分别与包含多种转录因子启动子结合位点的DNA片段结合，进而调控多种与VSMCs增殖相关的转录因子活性。结论：NE蛋白emerin和lamin A能够响应力学刺激，并通过调控与特异性转录因子启动子区域的结合调控转录因子活性，参与VSMCs增殖功能调控和高血压血管重建。
作者：齐颖新；姚庆苹；韩悦；黄凯；姜宗来 刊期： 2016年第08期
目的：感染负荷被认为是动脉粥样硬化（ AS）新的独立危险因素。金黄色葡萄球菌（ S．aureus）是临床常见的致病菌之一。本课题组前期研究发现，金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白－5（SSL5）可以激活血小板。我们推测，SSL5可能通过激活血小板而诱发炎症反应，探讨其机制可以为阐明感染负荷在AS中的作用提供新的实验证据。方法：体外培养人外周血单核细胞及THP－1细胞，以SSL5激活血小板所产生的微粒（ SSL5－PMPs）作用于上述细胞。结果：SSL5－PMPs呈时间和剂量依赖性地促进单核细胞IL－1β、TNF－α、MCP－1和MMP－9的表达；并促进MCP－1诱导的单核细胞迁移；阻断CD40L与CD40的相互作用，可以部分抑制SSL5－PMPs诱导单核细胞产生炎症介质；以siRNA下调单核细胞CD40或TRAF6基因的表达，导致SSL5－PMPs诱导单核细胞炎症介质的产生减少，并抑制NF－κB p65亚单位的磷酸化及核转位；阻断TLR4信号通路对SSL5－PMPs诱导单核细胞释放炎症介质没有影响。结论：SSL5可以激活血小板并产生PMPs；SSL5－PMPs与单核细胞结合，且主要与外周血中的具有促炎作用的单核细胞结合，促进炎性细胞因子的释放，CD40－TRAF6－NF－κB信号通路主要参与了这一过程。本研究为阐明感染负荷的致动脉粥样硬化机制提供了依据。
作者：胡厚源；贝俊杰；肇炜博 刊期： 2016年第08期
中国病理生理杂志
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主办：中国病理生理学会
