冯小龙；王秀莲；王群；刘蓉
高原肺水肿（ HAPE）和低氧性肺动脉高压（ HPH）是严重威胁高原人群健康的急、慢性高原病。有关其发病机制至今尚不十分清楚。我们研究发现，不同时间（2～28 d）模拟高原低氧均可诱导小鼠肺组织中ICAM－1、E－selectin等细胞黏附分子（CAMs）表达增加，炎症细胞浸润增多，炎症介质Annexin A1、TNF－α、MCP1、IL－6等表达上调。细胞实验也发现低氧（1％ O2）可直接上调内皮细胞中CAMs的转录和表达，并增强炎症细胞与内皮细胞的黏附。进一步研究发现，巨核细胞白血病因子1（ MKL1）可协同染色质重构蛋白Brg1／Brm及H3K4甲基转移酶复合物COMPASS介导血管内皮细胞中CAMs的转录活化，从而调节CAMs的表达，影响小鼠肺组织中炎症细胞的聚集及肺血管炎症反应。上述结果说明低氧可直接诱导内皮细胞中CAMs基因的转录激活，增强血管内皮细胞和循环炎症细胞的相互作用，在肺血管周围形成促炎微环境，增加炎症因子的表达，进一步介导或促进肺血管收缩乃至肺血管结构改建，这可能是HAPE和HPH形成重要的共通的炎症机制。
作者：高钰琪；高文祥；袁志兵；陈德伟；陈建；徐刚；张钢；生宝亮；刘福玉 刊期： 2015年第10期
目的：观察AS－1是否可通过调控肝组织慢性炎症和IR改善NASH，并阐明其调控机制。方法：在体实验，db／db小鼠MCD饮食4周复制NASH模型；体外实验，给予枯否细胞FFA与LPS共刺激，原代肝细胞IL－1β刺激。结果：与MCS对照饮食组相比，AS－1可明显降低MCD饮食组小鼠血浆中ALT水平，减少肝组织炎症细胞的浸润，抑制IRS1的丝氨酸磷酸化以及糖异生基因的mRNA水平增加。 AS－1可降低NADPH氧化酶mRNA水平和MDA含量。体外细胞实验发现，AS－1不仅可抑制FFA与LPS共刺激诱导枯否细胞pro－caspase－1裂解、caspase－1酶活化及IL－1β分泌。而且能够改善IL－1β诱导的肝细胞IR，抑制IL－1R与MyD88的结合及ERK／JNK／p38的磷酸化。结论：AS－1能够通过抑制肝组织炎症和改善IR，从而对NASH肝脏发挥保护作用，其机制与AS－1抑制IL－1R对MyD88的招募并影响MAPKs信号通路的激活，调控NADPH 氧化酶，抑制NALP3炎性小体活化以及IL－1β的分泌和功能的发挥有关。
作者：王晓露；高云；李建涛；宋娟；阙琳俐；李跃华 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：观察褪黑素（ MT）对肾缺血再灌注损伤（ RIRI）大鼠脑组织的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组（ sham）、缺血再灌注组（ I／R）和MT组。 I／R和MT组均夹闭肾动、静脉45 min后去夹再灌。 MT组于夹闭前和再灌后30 min腹腔给予MT 10 mg／kg。再灌后24 h取腹主动脉血，测定血清肌酐（SCr）和尿素氮（BUN），取血后速断头取脑，测定脑组织MDA含量和SOD活性，留取相同部位脑组织测定神经细胞凋亡率以及Bcl－2和Bax的表达。结果：I／R组SCr、BUN、脑组织MDA含量均明显增加，SOD活性则明显降低；与I／R组相比，MT组SCr、BUN、脑组织MDA含量均明显降低，而SOD活性明显增加。 I／R组神经细胞凋亡率明显高于sham组，MT组的细胞凋亡率则明显低于I／R组。 I／R组Bcl－2表达较少而Bax蛋白表达增多，与I／R组相比MT组Bax蛋白表达减少，而Bcl－2蛋白表达增加。结论：MT对RIRI大鼠脑组织有一定的保护作用，其作用机制可能与抗自由基损伤、下调促凋亡蛋白Bax表达、减轻神经细胞凋亡有关。
作者：戎浩；王燕凌；苗智慧；王惠娟；夏晓红 刊期： 2015年第10期
目的：探讨TRB3在晚期糖基化终末产物（ AGEs）诱导β细胞凋亡中的作用及其与GSK－3β通路相关的分子机制。方法：首先检测糖尿病大鼠模型发病不同阶段体内AGEs水平、胰岛β细胞TRB3表达情况与β细胞凋亡的关系。细胞水平上，检测AGEs处理后大鼠胰岛β细胞系INS－1细胞TRB3表达水平与细胞凋亡的关系以及沉默或过表达TRB3对AGEs诱导INS－1细胞凋亡的影响，体内和体外的凋亡检测均采用TUNEL染色法。通过分子机制研究探讨AGEs以及TRB3对GSK－3β通路的影响。结果：随着AGEs水平的增加糖尿病大鼠胰岛β细胞TRB3表达水平增高，体外应用AGEs刺激INS－1细胞其TRB3表达水平也相应增高，而干扰或过表达TRB3后可以减弱或增强AGEs诱导的INS－1细胞凋亡。 AGEs诱导TRB3表达的同时GSK－3β活化并加重了INS－1细胞的凋亡，而抑制GSK－3β通路后明显减弱这种效应并保护AGEs导致的凋亡β细胞。结论：TRB3通过激活GSK－3β通路参与AGEs诱导的β细胞凋亡。
作者：王猛；方妮；张文健；许世清；王在；刘虹麟；房青；彭亮；娄晋宁 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：研究褪黑素（melatonin，MT）对Toll样受体9（TLR9）配体CpG诱导巨噬细胞产生促炎症因子的影响及其机制。方法：先采用不同浓度MT处理小鼠腹腔巨噬细胞或小鼠巨噬细胞系Raw264．7，然后采用CpG刺激细胞；通过定量PCR检测MT受体MT1和MT2表达，通过ELISA和定量PCR检测细胞因子表达，通过Western blot检测信号转导蛋白的活化。结果：MT可上调巨噬细胞MT1和MT2的表达，MT可呈剂量依赖性抑制CpG刺激的巨噬细胞TNF－α、IL－6和IL－12的蛋白质和mR－NA的表达，采用MT1／2受体抑制剂Luzindole研究发现MT的抑制作用不依赖于MT1／2受体，检测信号转导蛋白发现MT可显著抑制CpG刺激的巨噬细胞ERK和AKT磷酸化，提示MT通过下调巨噬细胞ERK和AKT活化从而抑制CpG诱导的促炎症因子的分泌。结论：MT能抑制TLR9触发的巨噬细胞促炎症因子的分泌，其机制主要通过下调ERK和AKT活化，本研究进一步阐明MT调控固有免疫反应的作用与机制。
作者：王国权；刘凯；王寿棋；许熊飞 刊期： 2015年第10期
目的：研究腺苷A2A和A2B受体是否参与NECA的抗心肌缺血再灌注损伤作用及其相关机制。方法：利用H9c2心肌细胞建立模拟缺血／再灌注损伤模型，给予非选择性腺苷受体激动剂5’－N－乙基酰胺基腺苷及选择性腺苷A2A、A2B受体拮抗剂，采用CCK－8法测定细胞活性，JC－1染色检测细胞线粒体膜电位（ΔΨm ），Amplex Red过氧化氢／过氧化物酶试剂盒测定细胞内H2O2水平，活性氧试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）水平，MitoSox Red超氧化物指示剂检测线粒体内活性氧水平。结果：5’－N－乙基酰胺基腺苷明显改善缺血／再灌注损伤引起的细胞活性和线粒体膜电位的降低，显著抑制缺血／再灌注损伤导致的细胞和线粒体内活性氧含量的升高，腺苷A2A及A2B受体拮抗剂均可阻断5’－N－乙基酰胺基腺苷的上述作用。结论：5’－N－乙基酰胺基腺苷可减轻H9c2心肌细胞的缺血／再灌注损伤，腺苷A2A和A2B受体共同参与5’－N－乙基酰胺基腺苷的心肌保护作用，其机制可能与调节线粒体通透性转换孔（ mPTP）的开放及线粒体活性氧的产生有关。
作者：赵萌 刊期： 2015年第10期
目的：为了解外周血肿瘤标志物检测结果与胃癌患者长期生存的关系。方法：对获得随访的78例胃癌患者复习临床病理资料，用SPSS 12．0统计软件进行Kaplan－Meier （ K－M）法和log－rank检验的单因素分析及Cox回归多因素分析。结果：K－M法分析CEA＜5μg／L与≥5μg／L比较胃癌长期生存有显著差异（ P＜0．05）。临床I－II期与III－IV期比较胃癌长期生存有显著差异（P＜0．01）。胃癌无脉管瘤栓与有瘤栓比较长期生存有显著差异（P＜0．01）。肿瘤所占分区（A胃窦，M胃体，C贲门）：占一个区、占2个区和占3个区比较胃癌长期生存有显著差异（ P＜0．01）。 Cox分析表明CEA正常（ P＜0．01）、临床I～II期（P＜0．01）、肿瘤占1个分区（P＜0．05）和无脉管瘤栓（P＜0．01）是胃癌患者长期生存的独立预后因素。结论：胃癌患者CEA正常、I～II期、无瘤栓和肿瘤占1个分区是长期生存的独立预后因素。
作者：许沈华；凌雨田；朱赤红；刘翔；凌志强 刊期： 2015年第10期
目的：探讨游离脂肪酸（ free fatty acid， FFA）激活上皮细胞钠通道（ epithelial sodium channel， ENaC）的分子机制，以及H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的作用和机制。方法：应用肾皮质集合管上皮细胞，采用膜片钳技术研究H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的保护作用和分子机制；应用激光共聚焦显微镜技术观察FFA能否调节细胞内钙水平和细胞内ROS水平。结果：FFA通过胰岛素受体磷酸化、NADPH、PI3K和IP3受体介导的钙释放调节ENaC活性；H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC的异常激活。结论：FFA通过诱导胰岛素受体磷酸化，引起细胞内钙释放，进而激活NADPH升高细胞内活性氧水平，引起ENaC异常激活。气体信号分子H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC异常激活。
作者：王秋石；张志仁 刊期： 2015年第10期
目的：探讨适应病理生理学大班教学的“案例式教学（CBL）”方法的改革及应用效果探索。方法：（1）使用标准化处理的临床病例，提前一星期将包括了“显性问题”和“隐形问题”的病例给到学生小组；（2）学生针对病例展开课下资料查找、讨论及PPT制作；（3）汇报小组课上自主病例讲解；（4）教师评价、学生自我评价、学生互评；（5）问卷调查。结果：（1）学生对此教学法接受度96．1％，满意度90．3％，参与度85．8％；（2）学生认为该方法提高学习兴趣91．5％、提高学习效率88．3％、提高临床思维92．3％、提高知识理解能力96．2％、提高知识运用能力91．6％；（3）集中问题：诊断知识理解不够、基础教师对临床知识指导不够。结论：基于大班教学的“案例式教学”在“以学生为中心，提高自学能力”的理念下，针对现行大班病理生理学教学现状，可以提高学生学习兴趣、学习效率、临床思维能力，提高知识的理解和运用能力。
作者：石磊；刘巍；徐芳；李钰伶 刊期： 2015年第10期
心脏干细胞移植在心肌梗死治疗中具有广泛应用，外泌体（ exosome）被认为是细胞旁分泌的重要介质。本研究拟建立心脏固有干细胞（ CPCs）的成熟分离方法，并初步探索CPCs分泌的exosome在体外保护氧化应激状态下心肌细胞的凋亡。原代分离培养鉴定Sca－1＋CPCs，离心加试剂盒分离出CPCs分泌的exosome，并进行表型鉴定和粒径分析；将心肌细胞分成对照组与CPC－exo预处理组，用H2 O2处理心肌细胞诱导其凋亡，Western blot （ WB）检测cleaved caspase－3蛋白水平。结果显示：磁珠分选出的细胞用免疫荧光检测发现Sca－1呈现阳性表达，流式细胞术提示分选前和分选后Sca－1阳性细胞的比例差异具有统计学意义（n＝3， P＜0．01）；CPCs来源的exosome， WB结果提示其CD63表达阳性；体外凋亡保护的WB结果显示，加了CPC－exo的细胞凋亡状态明显改善，且相关蛋白表达显著降低（ P＜0．05）。因此，心脏干细胞可以分泌出携带有重要信息物质的exosome，能在体外保护心肌细胞，避免其发生凋亡，为临床心梗等疾病提供全新的治疗策略。
作者：肖静；潘宇；李晓红；吴岳恒；姜霖；杨翔宇；余细勇 刊期： 2015年第10期
目的：从p62影响RIP1泛素化，参与NF－κB信号途径活化的角度，探讨人卵巢癌细胞耐药机制。方法：顺铂作用SKOV3及SKOV3／DDP细胞。利用MTT法检测存活率；Western blot法检测RIP1、p62、p－IκBα、IκBα、核蛋白p50、p65；免疫荧光法观察p65入核情况；免疫共沉淀法检测RIP1泛素化，siRNA方法抑制p62蛋白。结果：在SKOV3／DDP细胞中p62和RIP1高表达，顺铂作用下，p62蛋白表达降低，RIP1蛋白变化不明显，p50、p65和p－IκBα／IκBα增加， p65蛋白核内表达增加；SKOV3／DDP细胞RIP1的K63泛素化程度高，K48泛素化程度降低。抑制p62蛋白，RIP1的K63泛素化降低，K48泛素化增加，NF－κB活化程度和细胞存活率降低。结论：SKOV3／DDP细胞中RIP1的泛素化形式可能是NF－κB信号通路活性变化的原因之一。p62可能通过影响RIP1的泛素化形式，参与活化NF－κB信号通路，促进人卵巢癌细胞顺铂耐药的形成。
作者：张钰；苏静；孙连坤 刊期： 2015年第10期
目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）对NLRP3炎症小体的激活及其在动脉粥样硬化（AS）中的作用。方法：（1）Hcy处理人巨噬细胞，检测NLRP3炎症小体表达及培养上清IL－1β浓度；通过 NLRP3 siRNA 干扰，观察 Hcy 的作用是否被阻断。（2） apoE－／－雄性小鼠，随机分为对照组（CT）、高脂组（HF）、高脂高蛋氨酸组（HFHM）、高脂高蛋氨酸＋control siRNA组和高脂高蛋氨酸＋NLRP3 siRNA组。检测AS面积、NLRP3炎症小体表达以及血脂、Hcy和炎症因子水平。结果：Hcy可激活巨噬细胞NLRP3炎症小体并促进IL－1β分泌，NLRP3 siRNA干扰能阻断Hcy的作用。动物实验结果显示高脂可诱导AS形成；HFHM组AS面积进一步增加，AS斑块处NLRP3炎症小体各成分表达增强，血浆Hcy和IL－1β水平较HF组显著增高；NLRP3 siRNA 干扰能阻断HFHM的作用。结论：Hcy能通过激活NLRP3炎症小体促进AS的发生发展。
作者：谭红梅 刊期： 2015年第10期
目的：探究银杏叶提取物EGb761对人结肠癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养12株人结肠癌细胞，给予不同浓度EGb761（0～600 mg／L）作用24 h，采用MTT、集落生成实验以及流式细胞术检测给药处理后结肠癌细胞的增殖和凋亡情况。通过Western blot技术检测RIP－1分子表达水平和凋亡标志物PARP的表达水平变化。利用ELISA技术检测NF－κB信号通路的活性。结果：EGb761在较低浓度（400 mg／L）可以抑制结肠癌细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。随着药物浓度的增加，EGb761诱导结直肠癌细胞凋亡率也随之增加。 EGb761作用于结肠癌细胞后可导致凋亡相关蛋白RIP－1的降解。同时 EGb761通过抑制 I－κB 磷酸化而抑制 NF－κB 信号通路促细胞增殖的作用。结论：银杏叶提取物（ EGb761）能广泛抑制人结肠癌细胞的增殖，并诱导人结肠癌细胞发生凋亡，研究结果提示凋亡发生的机制与细胞内RIP－1的降解以及NF－κB信号通路的活性降低有关。
作者：杜吉佩；承尧；姬光瑜；郑焱江；廖诗平；张霁；王玉芳 刊期： 2015年第10期
目的：探讨分析下调Mcl－1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法：分别用不同毒力的结核杆菌菌悬液感染BALB／c小鼠，再以筛选并构建好的Mcl－1－shRNA作用于感染的小鼠模型，同时设立相应对照组，于作用后1、3、5和7 d提取小鼠腹腔巨噬细胞，应用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞中Mcl－1 mRNA和蛋白的表达，应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡水平。结果：小鼠被不同毒力结核杆菌感染后其腹腔巨噬细胞中Mcl－1 mRNA和蛋白的表达水平均有不同程度的升高，其中以感染了新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv升高为明显（P＜0．05）；应用RNA干扰技术沉默Mcl－1基因后，Mcl－1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组（ P＜0．05）；流式细胞分析显示，下调Mcl－1基因的表达，可诱导小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡。结论：siRNA介导的RNAi技术可有效抑制Mcl－1在感染了不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞中的表达，并能上调巨噬细胞的凋亡水平。
作者：王飞雨；王新敏；王婵；王小芳；张宇晴；吴江东；吴芳；张万江；章乐 刊期： 2015年第10期
目的：从代谢调节角度探讨高原环境对人体血浆代谢的影响及可能机制。方法：分别采集60名健康成年男性在平原和进入高原（海拔5300 m）第4天的血浆样本，高效液相色谱－质谱联用和气相色谱－质谱联用结合多变量统计分析筛选进入高原前后的差异代谢物，Metabo Analyst 3．0数据库进行代谢通路富集分析，ELISA测定代谢通路中关键调节酶。结果：进入高原后受试者血浆中50个代谢物、8条代谢通路和5种关键酶发生了显著的变化。8条代谢通路涉及炎症反应相关代谢、能量代谢、胆酸代谢和血红素代谢。 ELISA结果显示调节以上代谢通路的5种关键酶进入高原后发生显著变化。结论：人类习服高原早期血浆中代谢物组、相关代谢通路和关键调节酶发生了重要变化，研究结果对寻找促进高原习服措施具有重要意义，通过阻断或修饰相关代谢通路将有望减轻急性高原反应症状、促进高原习服。
作者：廖文婷；刘宝；陈建；崔建华；高伊星；刘福玉；徐刚；孙滨达；张二龙；袁志兵；张钢；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：探索大麻素受体激动剂HU210在改善溃疡性结肠炎中作用及可能机制。方法：选用TLR4基因敲除型（ TLR4－／－）和野生型小鼠（WT），采用4％葡聚糖酸钠（dextran sulfate sodium salt，DSS）诱导溃疡性结肠炎。检测指标包括AP／PAS和HE染色观察组织结构病理变化并评分，细菌培养检测肠道黏膜菌群数量，流式细胞术检测肠道Peyer’ s结中T细胞亚群比例， ELISA和MPO检测全身和局部炎症，免疫组化检测p38和p－p38在肠道的表达情况等。结果：HU210治疗后，TLR4－／－小鼠和WT小鼠结肠炎病理评分和肠道黏膜菌落数量减少（P＜0．05），杯状细胞数量增多（P＜0．05），血浆中的内毒素（LPS）和IL－17水平降低（P＜0．05），MPO水平降低（P＜0．05）。 WT小鼠的CD4＋／CD8＋比值降低，而TLR4－／－比值升高。 p38和p－p38主要在WT小鼠的结肠表达。结论：HU210一定程度上能够改善结肠炎，其机制主要通过调节肠道菌群与肠道免疫平衡，抑制p38 MAPK信号转导通路从而减轻肠道的炎症损伤。
作者：林思思；沈利；张瑞琴；张一真；杨莉芝；李敏；徐晓娟；李琨；李永渝 刊期： 2015年第10期
目的：胶质纤维酸性蛋白（ GFAP）是一种1型糖尿病治疗热点靶位自抗原。但是，GFAP自抗体与1型糖尿病表型之间的关联仍然不清楚。经过对GFAP自抗体效能评估，我们筛选出了适当的GFAP抗原序列并设计新型多肽疫苗对于1型糖尿病预防和治疗。结果：我们发现在1型糖尿病模型（ NOD）小鼠，GFAP自抗体与空腹C多肽分泌呈负相关趋势。17周龄的NOD小鼠中阳性GFAP自抗体能呈周龄依赖性预测30周龄NOD小鼠糖尿病的发病。另外，通过自抗体结合实验，我们从4种候选多肽中筛选出C4多肽有效结合糖尿病小鼠的GFAP抗原。每只50μg的多肽量注射NOD小鼠，成功抑制了血糖的升高和增加了空腹C多肽分泌。在胰脏病理学分析中，GFAP疫苗有效抑制了T 细胞对胰岛的侵入。为了清楚GFAP疫苗的机制，我们检测了T细胞活性和分化，通过IgG子类别检测和ELISpot方法，我们发现原始T细胞从毒性Th1细胞向体液反应Th2细胞方向分化。结论：GFAP是一种有效的1型糖尿病预测靶位点蛋白，为今后1型糖尿病的免疫治疗提供新方案。
作者：庞正达；Hironori NAKAGAMI；Hiroshi KORIYAMA；Masayoshi HIGUCHI；Ryuichi MORISHITA 刊期： 2015年第10期
目的：探讨银杏叶提取物Egb 761对大鼠心梗后心肌纤维化的作用和可能机制。方法：结扎冠脉左前降支复制大鼠心梗后心肌纤维化模型，Masson染色观察心肌纤维化病理改变。免疫组化法检测心肌α－平滑肌肌动蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal－regulated kinase 1／2，ERK1／2）蛋白的表达。结果：假手术组心肌纤维排列规则，界限清楚；模型组梗死心肌为大量结构紊乱的纤维组织替代，纤维化明显；Egb 761组心肌纤维化减轻。α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2蛋白在假手术组有微弱表达；在模型组表达明显增加，而Egb 761可抑制上述表达的增加。结论：银杏叶提取物可改善大鼠心梗后心肌纤维化，其机制可能与调节α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2的表达有关。
作者：李淑琴；武宇洲；朱嘉宝；邢茹 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
