戎浩；王燕凌；苗智慧；王惠娟；夏晓红
目的：探讨葛根素（puerarin， Pue）在心肌细胞氧化应激损伤中的保护作用。方法：利用H2O2处理心肌H9c2细胞，建立氧化应激损伤模型。采用激光扫描共聚焦显微镜成像法测定线粒体膜电位。用MTT法观察Pue对细胞增殖的影响。利用Western blotting法检测Pue对GSK－3β和Akt活性的影响。结果：Pue明显减轻H2 O2诱发的心肌细胞线粒体损伤，但是PI3K抑制剂渥曼青霉素对此作用没有影响；Pue能够增加GSK－3β（ Ser9）蛋白的表达，而对Akt （ Ser473）蛋白表达没有明显影响。结论：Pue通过使GSK－3β失活，抑制mPTP的开放，从而减轻氧化应激诱发的心肌细胞损伤，而PI3K／Akt信号转导通路并未参与此过程。
作者：徐菁蔓 刊期： 2015年第10期
目的：观察AS－1是否可通过调控肝组织慢性炎症和IR改善NASH，并阐明其调控机制。方法：在体实验，db／db小鼠MCD饮食4周复制NASH模型；体外实验，给予枯否细胞FFA与LPS共刺激，原代肝细胞IL－1β刺激。结果：与MCS对照饮食组相比，AS－1可明显降低MCD饮食组小鼠血浆中ALT水平，减少肝组织炎症细胞的浸润，抑制IRS1的丝氨酸磷酸化以及糖异生基因的mRNA水平增加。 AS－1可降低NADPH氧化酶mRNA水平和MDA含量。体外细胞实验发现，AS－1不仅可抑制FFA与LPS共刺激诱导枯否细胞pro－caspase－1裂解、caspase－1酶活化及IL－1β分泌。而且能够改善IL－1β诱导的肝细胞IR，抑制IL－1R与MyD88的结合及ERK／JNK／p38的磷酸化。结论：AS－1能够通过抑制肝组织炎症和改善IR，从而对NASH肝脏发挥保护作用，其机制与AS－1抑制IL－1R对MyD88的招募并影响MAPKs信号通路的激活，调控NADPH 氧化酶，抑制NALP3炎性小体活化以及IL－1β的分泌和功能的发挥有关。
作者：王晓露；高云；李建涛；宋娟；阙琳俐；李跃华 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：研究lipocalin家族成员NGAL对慢性髓系白血病细胞伊马替尼（ imatinib）耐药性的影响及其机制。方法：构建针对NGAL的慢病毒干扰载体，建立稳定干扰NGAL的细胞系。 MTT法检测细胞活力。 Hoechst 33258染色和流式细胞术检测ima－tinib诱导的细胞凋亡。结果：NGAL的干扰载体成功降低了白血病K562／G01细胞系中NGAL的表达。 Hoechst 33258染色和流式细胞术结果表明NGAL沉默可以增强imatinib对K562／G01细胞的杀伤作用。沉默NGAL可以降低NHE1的表达，进而抑制AKT的磷酸化。结论：shRNA干扰NGAL表达可以增加K562／G01对imatinib的敏感性，其机制包括抑制NHE1的表达进而调控PI3 K信号通路。
作者：李元叶；张海瑞；王齐；许华；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：探讨miR－130a在血管紧张素II（ angiotensin II， Ang II）诱导心脏间质纤维化中的作用及分子机制。方法：埋植Ang II微渗泵制备小鼠心室重塑模型，超声心动检测小鼠心功能；培养乳鼠心脏成纤维细胞，real－time PCR和Western blot检测分子的基因及蛋白表达。结果：在埋植Ang II微渗泵的小鼠心肌组织以及Ang II刺激的心脏成纤维细胞，miR－130a表达上调。LNA－anti－miR－130a显著抑制Ang II引起的心肌组织中miR－130a表达增加，改善心脏间质纤维化及舒缩功能障碍。转染miR－130a mimic可进一步促进Ang II引起的纤维化相关分子的表达增加以及肌成纤维细胞转化，miR－130a inhibitor则可抑制Ang II的上述作用。过表达PPAR－γ可抑制Ang II以及Ang II和miR－130a mimic联合应用引起的纤维化相关分子的表达。结论：miR－130a通过调控PPAR－γ的表达参与Ang II的促纤维化效应。
作者：李丽；张城林；吴立玲 刊期： 2015年第10期
血红素加氧酶1（HO－1）是否对糖尿病病变血管具有保护作用及其相关机制尚不明确。我们推测胆红素介导HO－1对糖尿病病变血管的保护作用。对糖尿病小鼠进行腹腔注射血精素（ HO－1诱导剂），分离主动脉检测血管功能、进行分子生物学研究，测定内皮细胞NO生成。血精素增强糖尿病小鼠主动脉内皮依赖性舒张，增加Akt和eNOS的磷酸化水平，这些作用能被HO－1抑制剂SnMP或HO－1敲低病毒所抑制。血精素治疗增加糖尿病小鼠血浆中胆红素含量，并且胆红素也能够改善糖尿病小鼠主动脉的内皮依赖性舒张，此作用亦可被Akt抑制剂阻断。胆绿素还原酶（胆红素生成的关键酶）沉默可抑制血精素的血管保护作用，胆红素的慢性治疗改善糖尿病小鼠主动脉内皮依赖性舒张。血精素和胆红素能改善高糖诱导内皮细胞Akt和eNOS磷酸化水平降低和NO生成减少。胆绿素还原酶沉默病毒能够阻断血精素的作用。此外，胆红素改善糖尿病病人肾动脉内皮依赖性舒张。 HO－1保护血管的作用由胆红素介导；胆红素通过增强Akt和eNOS 磷酸化，从而增加内皮细胞NO的产生，进而改善血管的舒张功能。胆红素有可能成为治疗糖尿病血管病变的新靶点。
作者：黄聿；刘建 刊期： 2015年第10期
目的：观察PCSK9在oxLDL诱导PC12凋亡中的作用及机制。方法：用oxLDL单独处理或PCSK9 siRNA转染后处理PC12细胞，Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡，RT－PCR、Western blot分别检测PCSK9、BACE1、caspase－3、caspase－9、Bcl－2和Bax的表达，ELISA检测培养液中Aβ40和Aβ42含量。结果：75 mg／L oxLDL可诱导PC12凋亡，增加PCSK9 mRNA和蛋白表达，降低BACE1 mRNA和蛋白表达量及Aβ40、Aβ42含量。 PCSK9 siRNA抑制oxLDL诱导的PC12凋亡，降低caspase－3、caspase－9和Bax表达，增加BACE1、Bcl－2表达和Aβ40、Aβ42含量。结论：PCSK9在oxLDL诱导神经细胞凋亡中起双向调节作用。
作者：吴琪；彭娟；任重；赵雪珊；何妮娅；高亚；唐志晗；姜志胜；刘录山 刊期： 2015年第10期
目的：探讨沉默CIAPIN1基因对慢性粒细胞白血病K562细胞向粒系分化的影响。方法：针对CIAPIN1基因构建短shRNA真核表达载体并转染细胞。瑞氏染色观察细胞形态学变化；电镜观测细胞超微结构的改变；real－time PCR方法检测粒系分化标志基因mRNA水平的改变；Western blotting检测ERK1／2、JNK、p38 MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果：CIAPIN1基因沉默后，K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞，表面分化抗原CD11b、NCF1、ORM1、C／EBPα和HIF1α的mRNA表达水平升高，ERK1／2磷酸化水平升高。结论：抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞分化，ERK1／2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。
作者：王齐；王建；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：观察紫杉醇化疗时为缓解过敏反应而常规联用的组胺H1受体拮抗剂是否影响其疗效。方法：构建荷人卵巢癌裸鼠模型，随机分为对照、单用紫杉醇、单用异丙嗪、异丙嗪＋紫杉醇4组，6．5 mg／kg异丙嗪或生理盐水腹腔注射给药0．5 h后，再予腹腔注射10 mg／kg紫杉醇或生理盐水（每3 d 1次，共4次），测量肿瘤体积和瘤重。免疫组化检测肿瘤血管标志物CD31的表达；MTT法检测卵巢癌细胞株SKOV3和CAOV3的增殖情况；Annexin V／PI流式分析细胞的凋亡情况；荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果：上述4组瘤体体积增加量和瘤重分别为461．52 mm3（0．451 g）、314．66 mm3（0．320 g）、571．81 mm3（0．503 g）和462．47 mm3（0．454 g）。单用异丙嗪组瘤体CD31的表达量高，异丙嗪＋紫杉醇联用组者亦明显多于单用紫杉醇组。异丙嗪对卵巢癌细胞的增殖、VEGF的表达和紫杉醇诱导的凋亡没有影响。结论：卵巢癌化疗时使用H1受体拮抗剂异丙嗪会降低化疗药的效果，机制可能与异丙嗪促进肿瘤血管生成有关。
作者：李于鑫；杜安通；范梦迪；朱晓彤；陈玉霞 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：观察氢饱和盐水对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）分泌促炎细胞因子的影响。方法：应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化SD大鼠PIMs，在用常规RPMI－1640培养基或含氢RPMI－1640培养基的情况下，用LPS（1 mg／L）刺激细胞一定时间，ELISA法检测细胞培养上清中TNF－α和IL－1β的含量，用RT－PCR技术分析细胞中TNF－α和IL－1βmRNA的表达。结果：各细胞因子的浓度随着LPS刺激时间的延长而升高，培养上清中TNF－α和IL－1β的浓度分别于LPS刺激后3和6 h达到高峰；选取各细胞因子表达高峰的时点观察含氢培养基对其表达的影响，发现含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1β。 LPS刺激PIMs后，TNF－α和IL－1βmRNA的表达也增高，分别于LPS刺激后2和3 h达到高峰，含氢培养基对TNF－α和IL－1βmRNA的表达也具有负向调节作用。结论：在体外培养的大鼠PIMs，含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1βmRNA表达及其蛋白合成释放。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：探讨肠系膜动脉内皮细胞上（ MAECs）是否天然共定位TRPP2／TRPV4通道复合体，且该复合体在盐敏感高血压发展过程中的作用。方法：利用免疫沉淀技术证实MAECs形成天然TRPP2／TRPV4复合体；将盐敏感（ SS）和盐抵抗（ SR）大鼠分别喂养正常盐和高盐饲料，3周后检测血压和血浆醛固酮水平；利用血管开放式膜片钳，观察高盐饮食是否影响MAECs上TRPP2／TRPV4活性；利用分子生物学和膜片钳体外观察高盐和醛固酮对该复合体的影响。结果：TRPP2／TRPV4在MAECs上天然定位，并介导内皮细胞NO产生；在SS鼠中，高盐导致该通道活性和表达降低；体外实验证明高盐和醛固酮均抑制TR－PP2／TRPV4活性。结论：在盐敏感高血压发展过程中，MAECs上TRPP2／TRPV4通道活性和表达下降，其机制可能是由高盐和醛固酮协同介导。
作者：唐亮亮 刊期： 2015年第10期
目的：探讨激活毒蕈碱乙酰胆碱受体（ mAChR ）能否经调控紧密连接而促进下颌下腺的分泌。方法：跨上皮细胞电阻（ TER）和旁细胞通透性实验评价紧密连接的功能；Western blot和免疫荧光检测紧密连接的表达和分布；转染claudin－4 shRNA或cDNA观察claudin－4对紧密连接功能的影响。免疫共沉淀检测相关信号通路。结果：mAChR激动剂卡巴胆碱可降低下颌下腺细胞TER值，并增加旁细胞途径通透性。卡巴胆碱可下调claudin－4的表达和分布，但不影响其它紧密连接分子。敲低claudin－4可使卡巴胆碱降低TER值的作用消失；而在过表达claudin－4细胞中，卡巴胆碱仍能降低TER值和claudin－4表达。卡巴胆碱可经细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）促进claudin－4丝氨酸磷酸化。磷酸化的claudin－4可与β－arrestin2结合，招募clathrin引起claudin－4发生内化，并进一步在胞浆中被泛素化降解。结论：激活mAChR通过ERK1／2／β－arrestin2／clathrin／泛素化途径下调claudin－4的表达，进而增加旁细胞途径的通透性。
作者：丛馨；张艳；吴立玲；俞光岩 刊期： 2015年第10期
目的：明确运动训练能否抑制β－肾上腺素受体激动剂异丙基肾上腺素（ isoprenaline，ISO）诱导的小鼠心脏炎症反应。方法：将成年C57雄性小鼠分为10组（n＝6），分别为安静对照组、安静给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组、跑步训练对照组、跑步训练给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组。 ISO组均为给予ISO 5 mg／kg皮下注射，跑步训练组为应用小鼠跑步机训练6周，速度12 cm／s，时程90 min，每周运动5天。应用超声心动图、心重胫骨长度比、HE染色、天狼星红染色、免疫组织化学染色、ELISA和Western blot等方法，观察心脏中炎症因子表达水平及炎症反应的变化情况。结果：（1）小鼠呼吸代谢系统测得跑步状态下75％大氧耗量对应速度为12 cm／s，ISO对小鼠氧耗量没有影响。（2）跑步训练给ISO 1 h组及24 h组与安静给ISO 1 h组及24 h组相比，IL－18和IL－6蛋白含量均显著降低（ P＜0．05）；跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比IL－18和IL－16蛋白水平均明显降低的同时，IL－1β蛋白水平亦明显降低（ P＜0．01）；跑步训练给ISO 7 d组与安静给ISO 7 d组相比， IL－18、IL－1β和IL－6蛋白水平均明显降低，而且TNF－α也明显降低（P＜0．05）。（3）在给予ISO 24 h后，跑步训练组与安静组相比心脏TGF－β1蛋白水平即明显降低（ P＜0．01）；跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比，心脏切片免疫组化Mac－3染色显示巨噬细胞浸润面积明显减少（P＜0．01），同时心脏TGF－β1蛋白水平明显降低（P＜0．05）。（4）跑步训练给ISO 7 d组和安静给ISO 7 d组相比心脏纤维化面积明显减少（P＜0．05），心脏组织中羟脯氨酸含量明显降低（P＜0．01），I型胶原产生明显减少（P＜0．05）。结论：运动训练能够抑制ISO诱导的小鼠心脏炎症反应。
作者：安祥博；宋峣；张幼怡 刊期： 2015年第10期
急性缺氧引起大鼠饮水量显著减少，其机制不清楚。穹窿下器（ SFO）是与饮水行为有关的脑室周器官，其神经元表达的TRPVs是一种阳离子通道，在调节水电解质平衡中起重要作用。为探索SFO区TRPVs在急性缺氧大鼠饮水减少中的作用及机制，我们通过第三脑室注射TRPV1和TRPV4的抑制剂，观察大鼠在模拟海拔6000 m高原缺氧6 h和24 h的饮水量；用原代培养SFO区神经元，构建TRPV4过表达的HEK293细胞，观察缺氧及TRPV4激动剂对细胞内钙离子浓度的影响。研究发现，急性缺氧24 h大鼠饮水量从正常的14 mL降至7 mL，但血钠离子、pH及颅脑温度无明显变化；TRPV4抑制剂，而不是TR－PV1抑制剂，能够部分恢复大鼠缺氧时的饮水量，TRPV4抑制剂还能降低SFO区缺氧诱导的TRPV4蛋白表达；缺氧或TRPV4激动剂均能增加原代培养的SFO区神经元和转染TRPV4的HEK293细胞内钙离子浓度，而缺氧诱导的钙离子增加能被TR－PV4抑制剂所抑制。这些结果表明，缺氧可直接激活SFO区神经元TRPV4，升高胞内钙离子，从而介导大鼠饮水量的减少。
作者：杨帆；汪冬；黄庆愿 刊期： 2015年第10期
目的：创伤后应激障碍（ PTSD）是心血管疾病的独立危险因素，但PTSD导致心肌损伤的分子机制尚不明确。方法：48只SD大鼠随机分为control组（n＝18）和PTSD组（n＝30），采用单一延长刺激法复制PTSD大鼠模型，通过旷场实验检测行为学改变，TUNEL法检测心肌细胞凋亡率，应用透射电镜观察心肌细胞超微结构，Western blotting方法分析心肌ERS分子的表达及活化。结果：造模后第14天，与control组大鼠比较，PTSD大鼠在旷场中直立次数及穿行格数均显著减少（ P＜0．01）；通过TUNEL染色及透射电镜观察发现PTSD大鼠心肌细胞出现典型凋亡特征；PTSD大鼠心肌组织中Bcl－2／Bax显著下降（ P＜0．01），葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及钙网蛋白（CRT）表达上调，CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达上调、caspase 12剪切活化增加以及蛋白激酶样内质网激酶（ PERK）磷酸化增加（ P＜0．05）。结论：心肌细胞ERS相关凋亡的PERK／CHOP和caspase 12途径可能介导PTSD大鼠心肌损伤。
作者：刘蜜；徐菲菲；陶天琪；宋丹丹；李冬；李玉珍；郭渝成；刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：研究O6－甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（ MGMT）在N－甲基亚硝基脲（ MNU）诱导的人胃正常黏膜上皮细胞GES－1恶性转化中的表达变化，明确其转录激活的分子机制。方法：建立MNU诱导的GES－1细胞恶性转化模型，动态分析MGMT的表达、启动子转录激活、DNA甲基化、组蛋白修饰变化及其表达改变在GES－1细胞恶性转化中的作用。结果：MNU暴露持续激活MGMT的表达。 MGMT高表达细胞的增殖和克隆形成能力显著下降。甲基化特异性PCR显示MGMT基因甲基化水平下降，亚硫酸氢盐基因组测序证实其启动子区呈显著低甲基化。免疫共沉淀分析发现DNA甲基化转移酶（ DNMT1）与MGMT基因的结合减少，组蛋白特异性修饰H3K9met3和H3K4met2均参与调控其表达。结论：MGMT的表达上调抑制化学致癌剂MNU诱导的细胞恶性转化，MGMT的持续激活依赖于其启动子区DNA的低甲基化。
作者：陈月霞；齐宏妍 刊期： 2015年第10期
目的：观察endostatin对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法：Endostatin转染RAW264．7细胞和小鼠骨髓巨噬细胞（ BM－DMs）；RT－PCR、ELISA、HE染色和MTT检测其对RAW264．7细胞的影响；流式细胞术、ELISA、real－time PCR、Western blot和萤光素酶报告基因检测巨噬细胞极化标记物和NF－κB转录活性。结果：表达质粒能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达en－dostatin；HE染色和MTT发现endostatin使RAW264．7细胞的形态发生变化并抑制其增殖；流式细胞术、ELISA和real－time PCR发现，endostatin能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达NOS2、IL－6和IL－12p40（M1型巨噬细胞标志物），同时使CD206、IL－10和Arg－1（M2型巨噬细胞标志物）表达下降或不变；萤光素酶报告基因发现endostatin使NF－κB的转录活性增加；Western blot发现p－IκBα、p－p65和p－Stat1表达增加，而p－Stat3表达下降。结论：Endostatin可能通过调节NF－κB通路使小鼠巨噬细胞向M1型发生极化。
作者：郭花；刘莲勤；张平；顾俊莲；王玥；刘亚男；李扬 刊期： 2015年第10期
目的：尿素通道蛋白B（ urea transporter B， UT－B）是介导尿素快速跨膜转运的膜蛋白，UT－B基因敲除后可导致老龄小鼠发生心肌肥大，本研究拟探讨UT－B基因敲除后对小鼠线粒体功能的影响。方法：应用试剂盒检测线粒体呼吸链复合体的活性， PCR检测mtDNA 基因D－loop区域多态性／突变情况，流式细胞术检测线粒体膜电位和ROS水平。结果：与野生型小鼠相比， UT－B基因敲除小鼠线粒体复合体I和IV活性明显下降，通过复合体Ⅴ产生的ATP量明显降低；线粒体mtDNA发生多处突变，线粒体损伤标志线粒体DNA／核DNA的比率显著下降。 UT－B基因敲除小鼠线粒体膜电位水平较野生型小鼠明显下降，而心肌ROS水平增加约31．42％。结论：UT－B基因敲除后可导致小鼠线粒体功能障碍，这可能是其老龄后发生心肌肥大的机制之一。
作者：杜艳伟；付双；刘莲勤；杨方圆；赵雪俭；杨宝学；张灵；孟艳 刊期： 2015年第10期
目的：探究急性粒细胞白血病（AML）患者的间充质干细胞（MSC）病理生理变化和钠氢交换蛋白（NHE1）的影响及机制。方法：检测AML来源MSC中NHE1的表达量；检测在有无NHE1抑制剂情况下AML来源MSC的成脂成骨分化能力，MTT检测体外增殖能力，流式细胞术检测细胞周期，Transwell检测其迁移能力；Western blot检测NHE1、JAK、AKT等相关蛋白的表达。结果：AML患者MSC的增殖、迁移及成骨能力减弱， NHE1表达量增高，抑制NHE1活性后可以不同程度地恢复这些能力；MSC细胞S期明显延长，G2期明显缩短；p－AKT和p－JAK表达量均降低。结论：AML来源MSC存在异常， NHE1、JAK和AKT不同程度参与AML患者MSC生物学异常。
作者：许华；陈龙；李元叶；王齐；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
