学术投稿

运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

牛坚;李向农;韩泽广

关键词:人胰岛素样生长因子1类受体, 小干扰RNA, 肝细胞癌, 基因转染, 稳定表达
摘要:目的 运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株.方法 构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株.通过RR-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclin B1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线.结果 在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclin D1表达亦明显下降(P<0.05).结论 pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长.
中国普外基础与临床杂志相关文献
  • 急性动脉栓塞导致肌病肾病代谢综合征11例的治疗

    目的 总结急性动脉栓塞致肌病肾病代谢综合征(myonephropathic-metabolic syndrome,MNMS)的诊治经验.方法 回顾性分析2005年1月至2006年3月由急性动脉栓塞导致的11例MNMS的临床资料.结果 5例存活(保肢4例);2例死于高钾血症引起的心搏骤停,4例死于以急性肾功能衰竭为首发的多器官功能不全综合征.结论 急性动脉栓塞一旦确诊,尽早手术.MNMS是急性动脉栓塞的常见、严重并发症,急性动脉栓塞时尽快重建血流、骨筋膜室综合征尽早行筋膜室切开术及坏疽肢体尽早截肢是预防和治疗MNMS的关键.

    作者:万嘉;时德;罗开元;杨镛;杨国凯;何晓明 刊期: 2007年第06期

  • 结直肠肿瘤多学科协作诊治模式的数据库初期建设现状

    目的 分析结直肠肿瘤多学科协作诊治模式的数据库初期建设现状,探讨今后数据库建设的方向.方法 描述现有各分类数据库的建设情况,并简要统计和分析患者数据库的患者基本信息、患者住院期间基本信息、治疗基本信息和多学科协作信息.结果 各分类数据库的建设进度是不一致的.其中,患者数据库建设进度快,文献数据库和专业医师数据库也有一定的发展.结论 数据库时间跨度大以及数据采集花费大量时间是目前数据库建设进度较慢的主要原因.逐步完善数据库,及时更新并开展数据库临床相关的信息学研究是下一步工作的方向.

    作者:吕东昊;汪晓东;阳川华;曹霖;李立 刊期: 2007年第06期

  • 人肝及肾组织中β-葡萄糖醛酸酶mRNA的检测及意义

    目的 建立新的人肝脏及肾脏组织中β-葡萄糖醛酸酶(β-G)mRNA的检测方法,并进行不同组织间的比较.方法 收集10例正常肝脏、10例正常肾脏及8例肝癌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测β-G mRNA在各组织中的表达.结果 β-G mRNA的基因扩增产物在人肝脏及肾脏正常组织及肝癌组织中均可被检测,且产物大小一致,均为422 bp;β-G mRNA相对表达含量在正常肝脏组织(1.71±0.32)和正常肾脏组织(1.83±0.22)间比较,差异无统计学意义(P>0.05);而正常肝脏组织与肝癌组织(3.88±0.86)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过查找基因文库中的β-G基因序列并自行设计软件合成引物,检测肝脏及肾脏组织中β-G mRNA基因表达的方法是可行的,对进一步对不同组织中β-G mRNA变化的探讨以及分子机理研究可能有重要意义.

    作者:杨波;张弘;李为;周文平 刊期: 2007年第06期

  • 原发性腹膜后脂肪肉瘤23例报道

    目的 总结原发性腹膜后脂肪肉瘤(primary retroperitoneal liposarcoma,PRL)的临床病理特征、诊断及治疗方法.方法 回顾性分析经手术和活检证实的23例PRL患者的临床病理资料.结果 首发症状及体征表现为腹部肿块(91.3%,21/23),腹胀(56.5%,13/23)及腹痛(30.4%,7/23).B超及CT的定位诊断准确率分别为66.7%(12/18)和85.7%(12/14).首次手术肿瘤完整切除16例(69.6%),其中8例联合脏器切除;部分切除3例(13.0%);仅行活检4例(17.4%).PRL肿瘤完整切除术后复发率为75.0%(12/16),该12例中再次手术8例(66.7%)可完全切除肿瘤.结论 CT是诊断PRL的重要手段,优于B超;手术以完整切除肿瘤为主,对侵犯脏器者采用累及脏器一并切除;术后复发者可再次手术.

    作者:杜嘉林;吴泽宇;万进 刊期: 2007年第06期

  • 老年低位直肠癌经肛门局部切除加放化疗疗效观察

    目的 探讨老年低位直肠癌经肛门局部切除后加放、化疗的临床意义.方法 对18例年龄≥65岁,肿瘤距肛缘≤6 cm且经病理证实但拒绝Miles术的直肠癌患者行经肛门局部切除;于术后1个月给予放疗(总剂量50 Gy);化疗:亚叶酸钙200 mg、5-FU 400 mg/m2,第1次于术后第1~5 d,每3~4周重复1次,共3~6次.结果 全部病例无手术死亡,术后均有良好的肛门功能.16例获随访,随访5年,其中3例局部复发,拒绝再次手术,给予放、化疗.死亡12例,其中2例死于远处转移,10例死于其他因素.本组患者1年生存率为77.8%(14/18),5年生存率为38.9%(7/18).结论 对老年低位直肠癌拒绝Miles术的患者行经肛门局部切除加放、化疗,疗效确切,可提高患者生活质量,延长生存期.

    作者:孙利国;刘小敏;马真金 刊期: 2007年第06期

  • 血清CEA、CA242、CA19-9及其联检对大肠癌的诊断价值

    1资料和方法①研究对象:选取我院2004年4月至2005年4月收治的40例经临床及病理确诊的结直肠癌患者(大肠癌组),对照组为20例同期住院的良性消化道疾病患者.

    作者:胡毅;刘兵;杨旭 刊期: 2007年第06期

  • 核因子-κB与肝损伤

    目的 探讨核因子κB(NF-κB)在各种形式肝损伤发生、发展中的作用.方法 对近年来有关NF-κB结构、分子生物学特性和功能及其与肝损伤关系方面的文章进行综述.结果 NF-κB是一种重要的核转录因子,广泛存在于机体各种细胞中.在各种原因引起肝损伤时它可被诱导活化,活化的NF-κB可通过对细胞因子、黏附因子和活化因子转录活性的调节影响免疫反应、炎症反应及细胞凋亡,从而参与肝损伤.结论 NF-κB在肝损伤的发生、发展中起重要作用,将成为肝损伤治疗的新靶点.

    作者:林海;李泽信;刘江伟;张永久 刊期: 2007年第06期

  • 运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

    目的 运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株.方法 构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株.通过RR-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclin B1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线.结果 在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclin D1表达亦明显下降(P<0.05).结论 pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长.

    作者:牛坚;李向农;韩泽广 刊期: 2007年第06期

  • 肝癌的125I粒子植入治疗

    肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,根治性手术切除是治疗的好方法,但由于大多数肝癌患者就诊时已发展至巨大病灶、多发病灶或肝功能太差而失去了切除机会[1].

    作者:葛鹏磊;李宁 刊期: 2007年第06期

  • 联合检测粪便中多基因突变进行大肠癌二级筛查的研究

    目的 通过研究p53、K-ras及APC在大肠癌组织及粪便中的突变情况,探讨粪便多基因联合检测进行大肠癌二级筛查的可行性.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析及硝酸银染色法,检测40例大肠癌患者的肿瘤组织与粪便及40例正常人肠黏膜组织与粪便中p53、K-ras及APC 3种基因的突变情况,并比较多个基因联合检测与单基因检测基因突变率的灵敏性之间的差异.结果 ①40例大肠癌组织中p53、K-ras及APC基因突变率分别为57.50%、50.00%及60.00%,粪便中相应的基因突变率分别为42.86%、40.00%及51.43%,粪便基因突变与组织中相应基因突变的符合率分别为65.22%、70.00%及75.00%.40例正常肠黏膜组织及粪便中3种基因均未检出突变;②3种基因联合检测的突变率明显高于单基因检测(P<0.05);③粪便基因联合检测与粪便隐血试验比较,灵敏性之间差异无统计学意义,但前者的特异性明显高于后者(P<0.05).结论 粪便基因联合检测诊断大肠癌的灵敏性及特异性均较高,有望作为一种无创、特异、有效的筛查手段,与粪便隐血试验结合序贯进行大肠癌的筛查.

    作者:秦高平;王小强;闫立昆;宋勇 刊期: 2007年第06期

  • 人胰胆管合流异常胆汁对胆管细胞的影响及其机理探讨

    目的 研究胰胆管合流异常(APBDU)患者的胆汁对人胆管细胞生长的影响,探讨APBDU与胆管癌发生的关系.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测APBDU患者胆汁对胆管细胞增殖的影响,流式细胞仪测定其细胞周期分布及凋亡情况;Western blot法检测经APBDU胆汁处理的胆管细胞c-erbB-2蛋白表达水平的变化.结果 APBDU患者胆汁与正常对照胆汁比较,能明显促进胆管细胞的增殖(P<0.05),这种促增殖作用可被环氧化酶COX-2抑制剂celecoxib或一氧化氮合成酶抑制剂L-NAME抑制;流式细胞仪分析经APBDU胆汁处理的胆管细胞其处于S期的细胞明显增多(P<0.001);Western blot法检测经APBDU胆汁处理的胆管细胞其c-erbB-2表达增多.结论 APBDU患者的胆汁对正常胆管细胞增殖有促进作用,可能潜在致癌活性.

    作者:杨蕾;张斌;李长锋;李丹丹;孙立波;郑泽霖 刊期: 2007年第06期

  • 凋亡相关基因 bcl-2、bax、bad与乳腺癌

    目的 探讨乳腺癌发生、发展过程中bcl-2、bax及bad基因表达水平变化及与乳腺癌其他生物因素的相关性.方法 复习国内、外相关文献并进行综述.结果 在从正常乳腺组织到乳腺癌逐渐演化的过程中凋亡抑制基因bcl-2的表达水平变化尚有待进一步研究,而凋亡促进基因bax、bad的表达水平呈递减趋势.bcl-2基因表达水平与乳腺癌中一些公认的正性因子如雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)呈正相关,与其他一些负性因子如p53、表皮生长因子受体、c-erbB-2、腋窝淋巴结转移情况等呈负相关.bax基因的表达水平与乳腺癌ER、PR水平以及p53表达水平等无关.对于bad基因与乳腺癌其他生物因素的相关性尚未见报道.结论 乳腺癌中bcl-2基因表达水平的变化对乳腺癌预后以及治疗的作用尚存在争议,bad基因与乳腺癌预后的关系亦不清楚,而bax基因表达水平与乳腺癌的预后呈正相关.对于它们的研究将为我们评价乳腺癌的预后提供新的指标,为乳腺癌的治疗开辟新的思路.

    作者:于冰;孙治君 刊期: 2007年第06期

  • 结直肠癌外科应用技术的规范与创新(十二)

    6 盆底重建术6.1 盆底重建的必要性现代结直肠癌根治术,不仅强化了功能性根治术的程序细节,也强调对局部浸润型低分化癌的区域性立体性扩大切除,在此前提下,进一步拓展了盆口与肛端解剖的范围与深度,使那些较为晚期和极低位直肠肛管癌也得以接受安全的保肛术.

    作者:李立 刊期: 2007年第06期

  • 腹部手术切口脂肪液化的临床分析

    2000~2005年,我科行腹部手术后发生切口脂肪液化的患者35例,年龄35~79岁,平均57岁,其中男13例,女22例;肥胖体形27例,一般体形8例;26例使用电刀,9例未使用;Ⅱ、Ⅲ类切口27例,Ⅰ类切口8例;切口长度≥5 cm者29例,<5 cm者6例;手术时间≥2 h者24例,<2 h者11例;急诊手术23例,择期手术12例;有基础性疾病(包括糖尿病、慢性支气管炎、冠心病、支气管哮喘、高血压、低蛋白血症等)者16例,无基础性疾病者19例.

    作者:胡永岐 刊期: 2007年第06期

  • 经肝放置胆道支撑引流管在治疗Ⅱ、Ⅲ型Mirizzi综合征中的应用

    目的 探讨对Mirizzi综合征实施临床合理有效的手术方法.方法 自1990年1月至2003年12月期间,我院采用经肝放置胆道支撑引流管治疗Ⅱ、Ⅲ型Mirizzi综合征21例,胆道支撑引流管放置6个月以上,并行胆道造影检查.结果 所有患者恢复良好,胆道造影检查见胆道通畅后拔除支撑引流管,随访2~10年,无并发症发生.结论 经肝放置胆道支撑引流管治疗Ⅱ、Ⅲ型Mirizzi综合征,是保持胆道生理功能完整的有效方法.

    作者:杨利群;段兆奎;高原 刊期: 2007年第06期

  • 四肢动脉损伤诊治体会

    目的 探讨四肢动脉损伤的诊断和治疗方法.方法 回顾分析我院1996年1月至2006年7月共诊治的23例四肢动脉损伤患者的临床资料.分别采用直接动脉修补、动脉结扎、端端吻合、自体大隐静脉移植及人工血管吻合.术中取栓6例,合并静脉损伤修复8例.结果 截肢3例(13.0%).获得随访12例,随访时间3个月~5年,11例多普勒超声证实损伤血管血流通畅,下肢肌肉挛缩1例;下肢血供不足1例.结论 早期诊断是提高肢体存活率和避免假性动脉瘤发生的关键.手术方式的合理选择、Fogarty导管常规取栓和早期筋膜切开可提高治愈率.

    作者:倪良宏;郭劲松;唐军建;王长春 刊期: 2007年第06期

  • β-连环素基因在乳腺增生及癌组织中表达和突变的研究

    目的 检测β-连环素基因在乳腺增生及癌组织中的表达和突变情况,探讨其在乳腺癌发生中的作用.方法 应用免疫组织化学染色法和PCR-SSCP检测42例乳腺癌组织、15例乳腺单纯性增生组织及15例乳腺非典型增生组织中β-连环素基因的表达及突变情况.结果 乳腺单纯性增生组织中β-连环素表达正常,异常表达率为0.乳腺非典型增生组织和乳腺癌组织中β-连环素表达出现异质性,异常表达率分别为26.7%(4/15)和59.5%(25/42),明显高于单纯性增生组织(P<0.05),且前两者间差异亦有统计学意义(P<0.05).乳腺单纯性增生、非典型增生和癌组织中均末发现β-连环素基因外显子3的突变.结论 β-连环素异常表达在人乳腺癌发生过程中起到重要作用,但β-连环素基因突变并不是该蛋白异常表达的原因,需要进一步研究该蛋白异常表达的机理.

    作者:刘臻;崔东旭;刘宝林;马文锋;张强 刊期: 2007年第06期

  • 甲磺酸伊马替尼治疗胃肠道间质瘤对机体细胞免疫功能的影响

    目的 探讨甲磺酸伊马替尼治疗胃肠道间质瘤对患者细胞免疫功能的影响.方法 对病理诊断明确的16例行甲磺酸伊马替尼治疗的胃肠间质瘤患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞水平进行回顾性分析比较.结果 16例接受严格甲磺酸伊马替尼治疗的患者,其CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞水平在甲磺酸伊马替尼治疗前、后无明显变化(P>0.05).结论 采用甲磺酸伊马替尼在对胃肠间质瘤患者进行分子靶向治疗时,对患者的细胞免疫功能无明显影响.

    作者:李云峰;李文亮;伍治平;董建华 刊期: 2007年第06期

  • 急性胰腺炎大鼠内皮素-3基因表达的逆转录检测

    目的 研究内皮素-3(endothelin-3,ET-3)mRNA的表达水平与急性胰腺炎时胰腺炎症程度的关系.方法 将54只SD大鼠编号后随机分为4组,其中假手术组9只,胰腺炎组、动脉给药组和静脉给药组[多巴胺:5 μg/(kg穖in)]各15只,按Aho法用4.5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射制作急性胰腺炎模型,分别在1、6及24 h取胰腺组织,采用半定量逆转录聚合酶链式反应检测ET-3基因的转录水平,并观察各组胰腺组织病理变化,确定E-3 mRNA的表达水平与胰腺炎炎症程度的关系.结果 模型制作后1、6及24 h均可见到ET-3 mRNA表达,各组(除假手术组外)均以6 h时ET-3 mRNA表达强.除1 h外,动脉给药组ET-3 mRNA表达量明显低于静脉给药组及胰腺炎组(P<0.05,P<0.01);而假手术组在任何时相均明显低于另外3组(P<0.05,P<0.01).各组胰腺组织病理学评分按假手术组→动脉给药组→静脉给药组→胰腺炎组的顺序逐渐升高.结论 ET-3 mRNA的表达与胰腺炎炎症程度有一定关系,ET-3 mRNA表达量随胰腺炎严重程度的加重而增加;急性胰腺炎中,多巴胺动脉给药比静脉给药有效.

    作者:张勇;郭永章;李立;曹西南 刊期: 2007年第06期

  • 结肠慢传输性便秘外科治疗国内外进展

    结肠慢传输性便秘(colon slow transit constipation,CSTC)又被称为慢通过性便秘或结肠无力(colonic inertia),是指结肠传输功能障碍,肠内容物通过缓慢所引起的便秘.

    作者:刘宝华 刊期: 2007年第06期

中国普外基础与临床杂志

中国普外基础与临床杂志

主管:中华人民共和国教育部

主办:四川大学华西医院