学术投稿

PCR法检测龈下菌斑中致病菌群分布的实验研究

傅尧;符义富;游丽萍;曾以周;周炳荣;杨卫东

关键词:16 SrRNA序列, 牙周致病菌, 厌氧菌, 洁悠神长效抗菌材料
摘要:目的 建立牙周致病菌的16S rRNA序列分析方法,讨论洁悠神长效抗菌材料对牙周病患者龈下菌斑的作用及牙周致病菌的分布.方法 对376位牙周病患者(成年组306例、儿童组70例) 在洁悠神长效抗菌材料用药前、后龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线嗜血杆菌(Aa)、福赛斯坦纳菌(Tf)、具核梭杆菌(Fn)、中间普氏菌(Pi)5种牙周炎相关致病菌分别进行培养法和16S rRNA序列分析技术检测.结果 PCR法和培养法的检出率分别为Pg(40.96%,17.82%),Tf(88.56%,27.66%),Fn(81.91%,23.67%),Pi(57.98%,19.15%),Aa(19.15%,9.31%),除Aa(P>0.05)差异无统计学意义外,后者检出率明显低于前者(P<0.01),儿童组的检出率明显低于成人组(P<0.05);用药后的PCR法和培养法检出率都明显低于用药前(P<0.05),差异有统计学意义.结论 通过16S rRNA序列分析技术对牙周病患者致病菌的分析,可以对目前技术上能培养以及无法培养的牙周菌进行分类,对防治牙周感染具有一定的指导作用.
现代检验医学杂志相关文献
  • 差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究

    目的 改进磁分离酶联免疫法(MEIA).方法 采取预加微量标本、将磁铁置于微孔侧壁和扣除上清液A值法,改进MEIA建立了差异磁分离酶联免疫法(DMEIA).求DMEIA回归方程、线性范围、变异系数(CV),比较DMEIA和全自动电化学发光法(ECLIA)配对检测100份血清AFP结果差异.结果 DMEIA检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5~500 ng/ml,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA和ECLIA测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P>0.05);检测原倍高浓度AFP时(21 460~501 690 ng/ml)两法均未出现hook效应.结论 DMEIA可基本克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤,检测AFP结果接近ECLIA,但线性范围小于ECLIA.

    作者:徐兵;陈纯美;徐如梅;张建钫;伍严安 刊期: 2009年第03期

  • Backman Coulter Ac.T Diff2血细胞分析仪常见旗标及处理

    Ac.T Diff2 是美国Backman Coulter公司生产的三分群血细胞分析仪,它能快速准确地测出WBC,RBC,HB,PLT等18项参数,其结果稳定,重复性好,故障率低.

    作者:赵亚娟;屈跃军;何理;付亚玲 刊期: 2009年第03期

  • FibroTest在肝纤维化疾病诊断中的应用

    目的 探讨FibroTest(FT)在肝纤维化疾病诊断中的实际应用价值.方法 留取2008年1月~5月上海长征医院27例慢性肝炎患者、27例肝炎肝硬化患者、26例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者和16例健康查体者血清,检测α2-巨球蛋白(α2M)、结合珠蛋白(HAP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(BIL)和载脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)五个指标,按公式FT=4.467×log α2M -1.357×log HAP+1.017×log GGT+0.0281×Age+1.737×log BIL-1.184×ApoA1+0.301×SeX(female=0,male=1) -5.540,计算FT数值.结果 慢性肝炎组和肝硬化组FT比较差异有统计学显著性意义(P=0.014),慢性肝炎组与PBC组差异有统计学意义(P=0.033),肝炎肝硬化组与PBC组差异无统计学意义(P=0.092),但两组间GGT差异有统计学极显著性意义(P=0.003).结论 FT可以反映肝纤维化发展的程度,在鉴别诊断肝病、判断肝病患者的病程发展中有重要意义.

    作者:陈晔;耿红莲;仲人前 刊期: 2009年第03期

  • 抗线粒体抗体及相关检测在诊断原发性胆汁性肝硬化中的应用研究

    目的 分析抗线粒体抗体(anti-mitochondrial antibody,AMA)及其亚型和抗核抗体(anti-nuclear anti-body,ANA)等在诊断原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)等疾病中的应用.方法 55例AMA及其亚型阳性的患者,采用间接免疫荧光法(IFA)、免疫印迹法检测了AMA,AMA M2亚型,ANA等自身抗体,并对其它生化和免疫学指标进行了检测.结果 40例PBC患者AMA均为阳性,72.5%的患者AMA的滴度≥1∶320;AMA亚型M2,M4和M9的检出率分别为100%,7.5%和2.5%.PBC组的患者丙氨酸氨基转移酶(ALT) 、天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 、γ谷氨酰转肽酶(GGT) 、碱性磷酸酶(ALP) 、总胆红素(TBil)明显高于非PBC组患者.87.5%的患者检出ANA,ANA的主要荧光模式为核膜型、颗粒型.结论 PBC患者一般均有高水平的AMA和AMA M2亚型,且滴度和病情相关,M4,M9在PBC有一定的检出率.多数PBC患者还伴有高滴度的ANA并有主要的荧光模式,但AMA也可伴发或单独见于其它的多种自身免疫性疾病,如舍格伦综合征(SS)、系统性红斑狼疮(SLE)等,应引起注意.

    作者:陈飞龙;房国祥 刊期: 2009年第03期

  • 多重RT-PCR技术检测儿童呼吸道标本中的常见病毒

    目的 建立多重RT-PCR技术检测儿科呼吸道标本中常见病毒的方法.方法 参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索NCBI数据库初步验证其特异性,以实验室阳性株验证引物特异性,优化多重RT-PCR反应条件.并对2008年61份儿童呼吸道标本进行检测,阳性片段测序验证扩增片段特异性.结果 采用多重RT-PCR引物对流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、副流感病毒1型(PIV1)、副流感病毒3型(PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)和鼻病毒(RHV)等6种病毒进行扩增,均无非特异性扩增条带,分别获得171,489,307,585,155,501 bp片段,与设计相符;对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果,61份儿童呼吸道标本多重RT-PCR扩增,阳性率为50.82%(31/61),核酸序列与经NCBI数据库Blast比对同源性高.结论 实验证明,所建立的多重RT-PCR技术检测儿童呼吸道标本中常见病毒的方法,敏感度、特异度和可重复性均较好,为常见呼吸道病毒检测提供了一种方便易行的方法.

    作者:曾凡胜;陆学东;王琼;罗小芳;黄烈;吴润香 刊期: 2009年第03期

  • SELDI-TOF-MS二维内标法的建立和应用

    目的 探索表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)二维内标校准方法,解决SELDI-TOF-MS的准确度和重复性较差的技术瓶颈.方法 采用人工合成纯化的多肽分子促肾上腺皮质激素(ACTH,MW:2 465.75Da)作为内标物质,加入待测样品中进行SELDI-TOF-MS检测,通过内标物质在质谱图中横坐标(质荷比)和纵坐标(丰度)响应值校准,消除因操作条件的波动对分析结果产生的影响,以提高结果的准确度和重复性.结果 加入终浓度为4.055 μmol/L的ACTH对血清蛋白质谱图无明显影响;加入内标物浓度和其质谱峰丰度呈直线关系(R=0.976 3); 分子量检测变异系数平均降低5.36倍(P<0.001);质谱峰丰度检测平均变异系数降低5.19倍(P<0.001).结论 二维内标法显著提高了SELDI-TOF-MS测定蛋白分子量和丰度的准确度和重复性,是该技术进行质量控制和标准化的有效措施.

    作者:丁银环;胡琼英;姜伟;郭建红;周明术;梁双花;严莉;王开正 刊期: 2009年第03期

  • 雅培AXSYM免疫分析仪校标常见问题及解决方法

    美国雅培AXSYM化学发光仪是目前应用较为广泛的免疫分析仪之一,性能稳定可靠.其标准曲线校标方式分为Master Cal(主校标或称两点校标)和Standard Cal(标准校标或称六点校标)方式,较标比较容易通过.

    作者:黄忠团;杨琦;曹春晓;尹红 刊期: 2009年第03期

  • 超敏C反应蛋白定标方式对检验结果影响的比较研究

    目的 探讨超敏C反应蛋白(hsCRP)在日立7170A生化分析仪和贝克曼DXC800生化分析仪上的定标方式与检验结果的关系,以实现两台仪器检验报告的一致性.方法 在日立7170A生化分析仪上分别采用Spline和Exponential的定标方式定标,在贝克曼DXC800生化分析仪上采用Math Model 1和Math Model 3的定标方式定标,分别测定各浓度水平的hsCRP标准品3次和50份血清标本.结果 测定hsCRP标准品时,除零点以外,Math Model 1定标方式的测定值与标准品浓度之间的差异有统计学意义(P<0.05),而其他三种定标方式的测定值与标准品浓度之间的差异无统计学意义(P>0.05).测定hsCRP血清标本时,采用Math Model 3定标方式与Exponential定标方式的测定结果之间的差异有统计学意义(t=2.731,P<0.01),与Spline定标方式的测定结果之间的差异无统计学意义(t=0.946,P=0.349).结论 测定hsCRP时日立7170A采用Spline定标方式与贝克曼DXC800采用Math Model 3定标方式时的结果具有可比性,且能够满足临床诊断的需要.

    作者:杨丽媛;顾晓琼;万根平 刊期: 2009年第03期

  • POCT质量管理和信息管理的探讨

    P0CT是目前检验医学中具有革命性的新领域,它的发展和应用越来越受到检验医学界的重视.P0CT的出现和应用为医院的快速检验带来了很多方便之处,满足了医生和患者在时间上的需求.但作为新事物,P0CT在质量管理和信息管理等方面仍存在一些不足之处.该文章重点介绍和分析了P0CT的质量管理和信息管理,供检验同行参考.

    作者:柯培锋;王淑媛;欧财文;徐建华;黄宪章;庄俊华;李强;王美兰 刊期: 2009年第03期

  • 血清肿瘤标志物CYFRA21-1,CEA,SCC,NSE,CA72-4对肺癌诊断价值的评价

    目的 探讨血清肿瘤标志物细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原72-4(CA72-4)对肺癌的诊断价值.方法 应用化学发光及电化学发光技术测定经病理确诊的肺癌患者(145例)、肺良性疾病患者(43例)及健康对照者(45例)血清CYFRA21-1,CEA,SCC,NSE,CA72-4水平,并计算阳性率、敏感度、特异度及准确度,采用方差分析及χ2检验的方法进行统计学分析.结果 肺癌组血清五种肿瘤标志物水平显著高于肺良性疾病对照组及健康对照组(P<0.01).CYFRA21-1在肺鳞癌、CEA在肺腺癌、 NSE在小细胞肺癌、SCC在肺鳞癌中水平高,与其它组相比具有统计学意义(P<0.01);CA72-4在肺鳞癌、肺腺癌的水平显著高于小细胞肺癌(P<0.05).五项指标联合检测后灵敏度、准确度均显著提高(P<0.01).结论 五种肿瘤标志物对于肺癌的辅助诊断均具有实用价值,且联合检测有助于肺癌的早期诊断和治疗.

    作者:黄震英;张淑琴 刊期: 2009年第03期

  • 老年人多发性骨髓瘤41例实验室特点分析

    目的 系统观察老年人多发性骨髓瘤(MM)实验室指标特点,为老年人MM的诊断和治疗提供依据.方法 分析41例老年人MM患者多项实验检查结果,包括血液和骨髓形态学等.结果 骨髓瘤细胞在骨髓中占的比值与其对骨髓的损伤程度成正比.36例(87.8%)蛋白电泳呈现M蛋白,32例(78.0%)血清球蛋白增高;血沉异常36例(87.8%),血红蛋白降低31例(75.6%),尿本周氏蛋白阳性20例(48.8%);IgG型25例,IgA型14例.结论 血液和骨髓形态学检查的综合分析,有助于老年MM患者的早期快速诊断、分型及鉴别诊断.

    作者:蔡力力;丁志平;余晓红 刊期: 2009年第03期

  • 中国健康人群与精神分裂症患者CYP2C9遗传多态性的相关研究

    目的 探讨中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C9(CYP2C9)遗传多态性的相关性.方法 应用PCR与DNA测序相结合的方法对91例精神分裂症患者(男52例,女39例,平均年龄50.87±9.38岁)与164例健康志愿者(男88例,女76例,平均年龄47.37±14.82岁)进行了CYP2C9的基因多态性分析,根据CYP2C9将精神分裂症患者和健康志愿者基因型分组.结果 在对CYP2C9的检测中,没有发现CYP2C9*2基因型个体,正常对照组CYP2C9*3(A1075C)的等位基因频率为4%,精神分裂症患者组CYP2C9*3(A1075C)等位基因频率为5.5%,精神分裂症患者和健康志愿者组间的基因型和等位基因频率差异无统计学意义(χ2=0.669,P>0.05;χ2=0.637,P>0.05).结论 CYP2C9 *3(A1075C)可能不是中国精神分裂症患者的一个易感因素.

    作者:周健;姚尚武;康熙雄 刊期: 2009年第03期

  • 缺血修饰清蛋白在急性冠状动脉综合征早期诊断中的临床意义

    目的 探讨缺血修饰清蛋白(ischemia modified albumin,IMA)检测在急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)早期诊断中的应用价值.方法 57例确诊ACS患者在发病后的入院即刻,2,4,6,12h采集静脉血分别检测血清中IMA、肌红蛋白(MYO)、肌酸激酶同工酶MB质量(CK-MB mass) 、肌钙蛋白I(cTnI)的浓度,另选35例健康体检者做正常对照组,将测得的结果进行比较,以评价IMA对ACS诊断的临床价值.结果 ACS患者中IMA水平于胸痛发作后入院即刻略有升高,但与对照组比较差异无统计学显著性意义(P>0.1),2 h已经明显升高,4 h仍持续增高,且均明显高于正常对照组(P<0.05) ,6 h开始下降并逐渐回到基线水平,而MYO在发病后2 h开始升高,CK-MB mass,cTnI水平则在胸痛发作4~6 h开始升高.结论 IMA对ACS的早期诊断具有较高的敏感度,是一种较理想的ACS早期诊断指标.

    作者:肖路延;王萌;唐志毅;郭健 刊期: 2009年第03期

  • 不同制备方法对新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ活性含量的影响

    目的 探讨一次成浆与二次成浆法对制备出来的血浆中凝血因子Ⅷ活性含量的影响.方法 对新鲜采集的全血离心分离血浆并在8 h内冻结成块,然后在37℃水浴中复溶后测定两种方法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量.结果 一次成浆法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量为0.70±0.16 IU/ml,二次成浆法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量为0.84±0.16 IU/ml.结论 两种方法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量差异有统计学意义(P<0.05),二次成浆法比一次成浆法制备出来的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的活性含量要高,值得推广使用.

    作者:叶柱江;刘赴平 刊期: 2009年第03期

  • 化学发光法检测血清CK18水平在胃癌诊断中的应用

    目的 寻找新型血清CK18的检测方法,并作为一种胃癌肿瘤标志物与CA72-4指标进行比较.方法 分别以CK-3A9和CK-2A6作为固相抗体和标记抗体,制备化学发光试剂盒(CK18-3A9)对正常人及胃癌患者血清CK18进行检测;通过ROC曲线比较CK18-3A9与CA72-4在胃癌诊断中的意义.结果 CK18-3A9化学发光测定试剂盒诊断胃癌灵敏度为44.00%,特异度为98.50%;诊断胃腺癌灵敏度为42.65%,特异度为98.50%;诊断正常人血清假阳性率为0%;诊断炎症血清假阳性率为6.00%.结论 在该研究考察的范围内,与CA72-4相比,CK18-3A9在诊断胃癌时有更好的灵敏度和特异度.

    作者:贾志凌;张宏艳;刘畅;于忠和 刊期: 2009年第03期

  • 血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、肌酐及改良MDRD方程在糖尿病肾功能损害中诊断价值的研究

    目的 比较血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)、肌酐(Scr)和改良后的肾病预后膳食改良试验(modifica tion of diet in drsease,MDRD)方程估算肾小球滤过率(eGFR)对糖尿病肾功能损害的诊断价值.方法 Cystatin C采用颗粒增强免疫透射比浊法,Scr采用碱性苦味酸动力学法.结果 247例糖尿病患者,各期Cystatin C,Scr随eGFR的下降逐渐升高,各期水平差异显著.Cystatin C,Scr与eGFR的相关系数分别为-0.8539,-0.7409,二者间差异有统计学显著性意义(P<0.01).ROC曲线下面积(AUC)分别为0.962,0.987,差异无统计学意义(P=0.10),Cystatin C佳诊断点为1.39 mg/L.结论 Cystatin C是反映糖尿病肾病肾功能损害的良好指标,敏感度高于Scr,如与eGFR结合,可作为早期诊断的依据.MDRD方程适用于Scr正常及增高患者eGFR的估算.

    作者:赵金玲;周宏博;刘立峰;郑慧丽 刊期: 2009年第03期

  • i2000SR全自动免疫分析仪的维护及故障处理

    化学发光免疫分析是以化学发光物质为示踪物,具有灵敏度高、速度快等特点.主要试剂包括氧化剂、发光剂和催化剂等,测试中不使用有害的试剂,因此成为非放射性免疫分析法中有前途的方法之一.i2000SR具备实现完全自动化和不污染环境等优点,特别是能在较短的时间内得到实验结果,而对该仪器的维护、保养及故障排除尤为重要.

    作者:刘检;邓海峰;陆明洋;李敏;徐斌;郑晓;蒋敬庭 刊期: 2009年第03期

  • 异型输血危险性的实验模拟评估

    目的 实验评估异型输血产生的危害,为异型输血提供实验依据.方法 建立模拟供者受者血液,受者进行ABH分泌型和非分泌型分类,混合后检测红细胞发生凝集的强度,测定血清中K+含量和血红蛋白含量以评价溶血程度.结果 非分泌型受者红细胞凝集强度强于分泌型受者,K+浓度和血红蛋白含量随着输入的异型血液越多发生溶血的程度越高.结论 异型输血后会发生红细胞凝集溶血现象,ABH非分泌型受者红细胞凝集强度强于分泌型受者,激活补体发生溶血的程度无明显差异,分泌型受者血清中的血型物质不能减轻异型输血发生的溶血,输入的异型血液越多,溶血越严重,不主张临床异型输血.

    作者:何子毅;邹文涛;刘景春;唐斯 刊期: 2009年第03期

  • 用血细胞分析仪稀释液配制ABO反定型试剂红细胞

    目的 研制用于常规ABO血型反定型的简便试剂红细胞.方法 利用Coulter STKS,CD1700和Bayer2120三种血细胞分析仪的稀释液制备5 ml/dl的试剂红细胞,4±2℃冰箱保存,每三天对红细胞的抗原、红细胞数量和质量、上清液游离血红蛋白以及细菌生长情况等进行观察,观察用三种稀释液制备5 ml/dl的试剂红细胞的有效期限.结果 用coulter STKS稀释液配制的试剂红细胞有效期可达20 d,用CD1700稀释液配制的试剂红细胞有效期可达18 d,用Bayer2120稀释液配制的试剂红细胞有效期可达15 d.在<2 w有效期内,试剂红细胞在ABO反定型试验中敏感度高、抗原特异度强,细菌污染程度低,可保证常规ABO血型反定型的准确度.结论 用血细胞分析仪稀释液可制备简便的ABO反定型试剂红细胞,有效期可达2 w.

    作者:周华友;陈少彬;于艳涛;杨贺才;王美兰;陈林 刊期: 2009年第03期

  • PCR法检测龈下菌斑中致病菌群分布的实验研究

    目的 建立牙周致病菌的16S rRNA序列分析方法,讨论洁悠神长效抗菌材料对牙周病患者龈下菌斑的作用及牙周致病菌的分布.方法 对376位牙周病患者(成年组306例、儿童组70例) 在洁悠神长效抗菌材料用药前、后龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线嗜血杆菌(Aa)、福赛斯坦纳菌(Tf)、具核梭杆菌(Fn)、中间普氏菌(Pi)5种牙周炎相关致病菌分别进行培养法和16S rRNA序列分析技术检测.结果 PCR法和培养法的检出率分别为Pg(40.96%,17.82%),Tf(88.56%,27.66%),Fn(81.91%,23.67%),Pi(57.98%,19.15%),Aa(19.15%,9.31%),除Aa(P>0.05)差异无统计学意义外,后者检出率明显低于前者(P<0.01),儿童组的检出率明显低于成人组(P<0.05);用药后的PCR法和培养法检出率都明显低于用药前(P<0.05),差异有统计学意义.结论 通过16S rRNA序列分析技术对牙周病患者致病菌的分析,可以对目前技术上能培养以及无法培养的牙周菌进行分类,对防治牙周感染具有一定的指导作用.

    作者:傅尧;符义富;游丽萍;曾以周;周炳荣;杨卫东 刊期: 2009年第03期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院