学术投稿

诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

钱海燕;李庚山;徐红新;吕菁君;蒋雯;王晶

关键词:胚胎干细胞, 心肌细胞, 分化, 布法罗大鼠肝细胞, 成纤维细胞
摘要:目的:分别使用布法罗大鼠肝细胞(buffalo rats liver,BRL)条件培养基或鼠胚成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层体外培养,比较不同培养条件对胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)分化为心肌细胞的影响.方法:用BRL条件培养基或MEF饲养层抑制ESC分化并保持其增殖,以维甲酸(retinoic acid,RA)、二甲基亚砜(DMSO)、转化生长因子β1(TGF-β1)、激活素-A(activin-A)为分化诱导剂,组合成6种分化培养基,采用悬滴、悬浮、贴壁三步法诱导ESC分化为心肌细胞,比较各组分化比率.结果:BRL及MEF饲养层两种条件均能促进ESC增殖,6种分化条件均能使ESC分化为心肌细胞;其中以BRL条件培养基培养,TGF-β1(2ng·ml-1)、activin-A(20 ng·ml-1)及20%胎牛血清(fetus calf serium,FCS)组成的分化培养基可以使(92.8±2.2)%的ESC分化为心肌细胞,分化比率显著高于其它各组(P<0.01).结论:以BRL条件培养基培养,TGF-β1、activin-A细胞因子组合是一种理想的ESC体外分化体系.
武汉大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 适宜钙饮食对老年男性骨质疏松的影响

    目的:调查适宜钙饮食对老年男性骨质疏松的影响及与钙调节激素间的相关性.方法:测定95例适宜钙饮食的老年男性及25例青年男性的骨密度,检测钙调节相关激素.统计各组间相关性.结果:与青年对照组比较,正常钙饮食和充足阳光照射的老年男性随年龄增加出现骨质疏松和骨量减少,钙调节激素特点为老年人骨质疏松组与青年组比较:hCT、TE2、TTT、IGF-1均明显降低,而hPTH、25-OH-VD无差异.结论:老年人正常钙饮食可抑制hPTH升高,充足光照可避免25-OH-VD减低,但不可避免的发生hCT、IGF-1、TTT、TE2随年龄增加而降低.故老年男性骨质疏松发病可能与年龄增加相关激素的变化密切相关.

    作者:吴伏娜;米涌;钟紫茹 刊期: 2004年第04期

  • 万爽力对顿抑心肌能量代谢及功能的恢复作用

    目的:应用兔冠脉前降支结扎缺血再灌模型,观察万爽力对顿抑心肌能量代谢及功能的影响并分析其可能机制.方法:18只日本大耳白兔随机分为对照组、心肌顿抑组和万爽力组.结扎兔冠脉左前降支20 min,再灌360 min,观察血流动力学、抗氧化酶、脂质过氧化物、血清游离脂肪酸、乳酸以及心肌组织ATP含量和超微结构的变化.结果:①万爽力可缓解顿抑心肌收缩舒张功能明显降低;②万爽力可抑制顿抑组血清游离脂肪酸(FFA)、乳酸(LD)、丙二醛(MDA)水平明显升高,超氧化物歧化酶(SOD)活性明显下降;③顿抑组心肌组织ATP含量较对照组明显下降,万爽力可升高顿抑心肌组织ATP含量(P<0.01);④万爽力可减轻顿抑心肌损伤.结论:万爽力对顿抑心肌功能与能量代谢的恢复作用与其直接参与心肌细胞脂肪酸代谢有关.

    作者:姜黎;任江华;曹茂银 刊期: 2004年第04期

  • 蓝舌病毒HbC株靶向性杀死小鼠荷MA782肿瘤的研究

    目的:将蓝舌病毒湖北株(BTV-HbC)做为一种具有潜在性治疗效能的生物制剂来治疗MA782肿瘤.方法:首先用BTV-HbC病毒感染体外培养的MA782细胞.同时将MA782细胞接种于小鼠皮下,复制出了小鼠荷MA782肿瘤的动物模型,然后将BTV-HbC病毒直接进行瘤体注射.结果:小鼠荷MA782肿瘤的明显退缩,和体外处理的结果是一致的.结论:证实了BTV-HbC病毒是一种有效的治疗恶性肿瘤的新型生物制剂.

    作者:罗翔;董长垣;郭淑芳;邓靖;卢莉莉;黎莉 刊期: 2004年第04期

  • 新发现的伤寒杆菌ⅣB型菌毛致病性研究

    目的:研究伤寒杆菌菌株ⅣB型菌毛的致病特性.方法:本研究将表达ⅣB型菌毛的的伤寒杆菌J341及另一插有强启动子Tac并表达ⅣB型菌毛的重组伤寒杆菌菌株Typhi A21-6和不表达ⅣB型菌毛的伤寒杆菌菌株Typhi pilS::kmr分别攻击人的THP-1细胞和小鼠腹腔巨噬细胞(MФ),利用细胞毒检测试剂盒检测细胞受到伤寒杆菌攻击后,伤寒杆菌对细胞的毒性作用;同时进一步采用实时荧光定量PCR法检测伤寒杆菌毒力岛上的ⅣB菌毛对人单核细胞的侵袭作用,分析表达ⅣB菌毛的伤寒杆菌菌株J341及Typhi A21-6和不表达ⅣB型菌毛的伤寒杆菌菌株Typhi pilS::kmr分别对THP-1细胞的侵袭作用,通过对细胞内侵入的伤寒杆菌的ⅣB菌毛基因(pilS)和伤寒杆菌O抗原的聚合酶基因(rfc)DNA的含量的检测,来比较进入胞内细菌含量的差别.结果:比较发现J341及Typhi A21-6比TyphipilS::kmr对人的细胞有更强的毒性以及侵袭性,而对鼠的细胞毒性和侵袭性没有明显差异.结论:说明伤寒杆菌ⅣB型菌毛与细菌侵入人体细胞的毒性和侵袭性密切相关;并且伤寒杆菌ⅣB型菌毛的侵袭性和细胞毒性具有种属特异性,即对人的单核细胞等细胞有致病性,而对鼠的巨噬细胞无致病性.

    作者:何攀文;章晓联;汪付兵;潘勤;刘先洲 刊期: 2004年第04期

  • 珊瑚颗粒即刻植入种植体周骨缺损的实验研究

    目的:为比较珊瑚颗粒和羟基磷灰石(HA)颗粒在即刻种植愈合过程中的作用.方法:应用国产羟基磷灰石涂层种植体植入犬股骨中,在种植体周围骨缺损中分别植入HA和珊瑚颗粒,并设空白对照而成3组,进行比较观察,术后2,3,4个月处死动物,通过X线检查及扫描电镜观察标本.结果:植入植骨材料充填种植体周围骨空隙后,术后4个月,种植体和骨组织结合紧密,珊瑚颗粒几乎完全降解吸收,而HA颗粒基本无变化,未植入植骨材料的空白对照组,4个月时颈部尚有部分骨组织缺损.结论:即刻种植体周骨缺损大于1 mm以上应植入植骨材料.作为植骨材料,珊瑚颗粒较HA颗粒有更好的骨引导活性,能降解吸收为骨组织替代,而HAG不能吸收,影响骨改建.

    作者:丁俊清;吕晓春;程祥惠;杨碧玉;雷志敏;周海孝;李俊;段春枝;张远芳;王丽红 刊期: 2004年第04期

  • 生存素在子宫腺肌瘤中的表达及临床意义

    目的:探讨生存素(survivin,SVV)在子宫腺肌瘤在位内膜、异位内膜的表达,研究以SVV为核心的细胞凋亡、血管生成机制、患者孕产次与子宫腺肌瘤发病的相关性及其作用.方法:采用免疫组化法检测子宫腺肌瘤在位内膜、异位内膜及正常对照组内膜中SVV,endoglin蛋白表达,探讨其与研究对象孕产次间的关系.结果:子宫腺肌瘤异位内膜组SVV蛋白的表达和微血管密度显著高于在位内膜组和异位内膜组(P<0.01),SVV蛋白的表达和微血管密度均与流产次数呈正相关,且增殖期宫内膜、分泌期宫内膜SVV蛋白表达与endoglin蛋白表达呈显著相关性.结论:SVV的过度表达可能参与了子宫腺肌瘤的发病过程,以其为核心的细胞凋亡和血管生成机制与子宫腺肌瘤的发病关系密切.

    作者:刘萍;罗新;史玉霞;吴秀枝 刊期: 2004年第04期

  • 诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

    目的:分别使用布法罗大鼠肝细胞(buffalo rats liver,BRL)条件培养基或鼠胚成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层体外培养,比较不同培养条件对胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)分化为心肌细胞的影响.方法:用BRL条件培养基或MEF饲养层抑制ESC分化并保持其增殖,以维甲酸(retinoic acid,RA)、二甲基亚砜(DMSO)、转化生长因子β1(TGF-β1)、激活素-A(activin-A)为分化诱导剂,组合成6种分化培养基,采用悬滴、悬浮、贴壁三步法诱导ESC分化为心肌细胞,比较各组分化比率.结果:BRL及MEF饲养层两种条件均能促进ESC增殖,6种分化条件均能使ESC分化为心肌细胞;其中以BRL条件培养基培养,TGF-β1(2ng·ml-1)、activin-A(20 ng·ml-1)及20%胎牛血清(fetus calf serium,FCS)组成的分化培养基可以使(92.8±2.2)%的ESC分化为心肌细胞,分化比率显著高于其它各组(P<0.01).结论:以BRL条件培养基培养,TGF-β1、activin-A细胞因子组合是一种理想的ESC体外分化体系.

    作者:钱海燕;李庚山;徐红新;吕菁君;蒋雯;王晶 刊期: 2004年第04期

  • 阿片受体参与催产素对大鼠海马CA1神经元诱发放电的调制作用

    目的:探讨侧脑室注射催产素(oxytocin,OT)对大鼠左背侧海马CA1神经元诱发放电的影响以及OT与阿片受体之间可能的相互作用.方法:应用细胞外记录单位放电技术,通过电刺激坐骨神经诱导神经元诱发放电.结果:侧脑室分别注射1,10和100ng·(5μl)-1OT使海马CA1神经元诱发放电频率明显降低,剂量依赖关系明显,OT对CA1神经元诱发放电的抑制作用可被侧脑室预先注射催产素受体拮抗剂d(CH2)5-OVT 200ng·(2.5μl)-1所阻断;侧脑室注射纳洛酮1μg·(2.5 μ1)-1可明显减弱OT 10 ng·(5 μl)-1的作用.结论:OT通过激活OT受体可抑制海马CA1神经元对外周传入电信号的反应,中枢内阿片受体在其中也起着重要作用.

    作者:陈静芳;胡祁生;胡胜娣;邹祖玉;王海梅 刊期: 2004年第04期

  • 局部应用全反式视黄酸对兔角膜新生血管的影响

    目的:观察全反式视黄酸点眼对兔角膜新生血管的影响.方法:32只日本大白兔随机分成A、B、C、D 4组,每组8只兔(8只眼),制成角膜碱烧伤模型.治疗组(A、B、C组)伤后即分别滴用15,30及60 mg·L-1的全反式视黄酸滴眼,对照组(D组)滴赋形剂,裂隙灯观察角膜新生血管的生长情况并计算伤后第6,9,12,15,18,21,25,28 d的角膜新生血管面积.连续用药28 d后处死兔并取下角膜做组织病理学检查.结果:伤后B组和C组角膜新生血管开始出现的时间明显较A组和D组延长,且角膜新生血管生长面积均明显较A组和D组减少,组织病理学检查显示CNV面积与角膜后膜和炎性细胞数均有明显相关性.结论:局部应用全反式视黄酸对由碱烧伤引起的兔角膜新生血管的生长有明显的抑制作用.

    作者:姚骏;艾明;蔡明高;邢怡桥;郑红梅 刊期: 2004年第04期

  • 大面积脑梗塞的临床特点和处理方法

    目的:回顾39例大面积脑梗塞的临床特点和处理方法.方法:回顾性分析39例急性大面积脑梗塞的临床诊治过程.结果:39例存活25例,存活率64.1%,均遗留偏侧瘫痪,生活不能自理,其中5例呈植物生存状态;死亡14例.结论:早期诊断,及时选择适宜的治疗方案是对大面积脑梗塞患者抢救的关键.

    作者:袁波;童晓欣;张海鸥;邹文;吴军;张季声 刊期: 2004年第04期

  • 阿糖胞苷对子宫颈癌细胞的端粒酶活性的影响

    目的:探讨阿糖胞苷对体外培养的宫颈癌细胞(Hela细胞)端粒酶活性的影响.方法:采用PCR-ELISA法检测经阿糖胞苷处理前后的Hela细胞株端粒酶活性的改变.结果:经阿糖胞苷处理后,Hela细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低.结论:阿糖胞苷对Hela细胞具有生长抑制作用,其抗肿瘤作用的机理可能与抑制肿瘤细胞的端粒酶活性有关.

    作者:黄浩;方向明;胡继军 刊期: 2004年第04期

  • 鼠切牙牙胚发育晚期Shh及其受体的基因表达

    目的:观察信号分子Shh及其受体Ptc1、Ptc2在小鼠下颌切牙牙胚形态发育晚期的基因表达,以探讨Shh信号路径在细胞分化中的作用.方法:制备昆明小鼠下颌切牙形态发育晚期标本(E18.5~P 1.5),常规HE染色观察组织形态.以Shh、Ptc1、Ptc2 cDNA为模板体外转录合成地高辛标记的cRNA探针,原位杂交法分析Shh、Ptc1、Ptc2 mRNA在牙胚中的表达与分布.结果:Shh与Ptc2 mRNA表达方式相近,在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达.Ptc1 mRNA在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞、中间层细胞及成牙本质细胞均呈阳性表达.结论:在切牙牙胚形态发育晚期,Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径,参与了唇侧成釉细胞和成牙本质细胞分化.

    作者:张露;孙志军;王志峰;华方;张旗;陈智 刊期: 2004年第04期

  • 端粒酶抑制剂联合辐射对人胶质瘤细胞存活的影响

    目的:观察端粒酶抑制剂AZT联合60Coγ-射线对人脑胶质瘤细胞U251端粒酶活性及细胞存活的影响,探讨AZT的放射增敏作用.方法:实验分4组:A、空白对照组;B、放射组;C、加药组;D、加药放射组.用克隆形成分析法观察AZT对U251细胞放射敏感性的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERD0、SERDq、SERSF2.用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-PCR-ELISA方法检测端粒酶活性的动态变化.结果:照射前经0.8 mmol·L-1AZT处理24 h明显降低了2 Gy γ-射线照射后U251细胞的存活分数,SERD0、SERDq、SERSFM2分别为1.294,1.25和1.365;表明AZT具有放射增敏的作用(P<0.05).端粒酶活性分析显示A、B、C、D组细胞的端粒酶活性分别为1.563±0.022,1.923±0.188,1.057±0.126,1.209±0.153,各组之间差异均有显著性(P<0.05).结论:AZT能明显抑制2 Gy照射诱导的U251细胞端粒酶活性升高,并显著增加U251细胞的放射敏感性;AZT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关.

    作者:戴静;周福祥;肖创映;刘诗权;潘东风;骆志国;周云峰 刊期: 2004年第04期

  • 2型糖尿病患者PPARα基因多态性的研究

    目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因第5外显子L162V(CTT→GTT)多态性与2型糖尿病(T2DM)的关系.方法:采用多聚酶联反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法对湖北地区100例T2DM患者及80例正常对照者PPARα基因L162V多态性进行研究.结果:在T2DM患者和正常对照者中未发现PPARα基因L162V变异.结论:PPARα基因L162V多态性与湖北地区T2DM不相关.

    作者:张颖;雷红;邓幼平 刊期: 2004年第04期

  • 湖北省不同年龄组和用药时间结核分枝杆菌耐药性的研究

    目的:了解湖北省不同年龄组和用药时间结核分枝杆菌耐药情况,探讨其发展趋势.方法:根据年龄将1090例肺结核患者分为15~,25~,35~,45~,55~和≥65岁6组;采用比例法进行抗结核药物耐药性测定.结果:6组的初始和获得性耐药率分别为13.9%,16.4%,10.4%,13.4%,30.1%,35.7%和30.4%,45.8%,41.0%,55.6%,48.8%,36.8%.各年龄组初始和获得性耐药频度从高到低依次分别为S、H、R、E和H、R、S、E.其中初始耐多药高的组为≥65岁组(35.7%),获得性耐多药高的组为15~24岁组(30.4%).既往未用药者耐药率为16.7%,与用药不足1月和1~3月者耐药率无显著性差异(P>0.05),但与用药时间大于3月者均有显著性差异.此外,不规则用药时间越长,耐药发生率越高;在各年龄组中中青年病人(25~54岁)耐药发生率较高.结论:不同年龄组无论初始和获得性耐药率均有所不同,且耐药率随着用药史的延长而增高,建议应加强重视对中青年初始结核病人的治疗,避免该组病人高耐药率的产生.

    作者:李国明;周利平;刘勋;李爱国;李克国;袁方玉;杨占秋 刊期: 2004年第04期

  • 左旋-精氨酸对糖尿病肾病鼠的影响

    目的:了解左旋-精氨酸(L-arginine)对糖尿病(DM)鼠肾脏的影响并初步探讨其机制.方法:将实验大鼠分3组,正常对照组(A组)8只;DM组(B组)8只;DM 4周后+0.5%L-arginine组(C组)8只.观察8周.结果:第1周末开始,B、C组Ccr和UAE较A组明显升高,B、C组之间无显著差异;尿NO2-/NO3-第1,2周B、C较A组明显升高,B、C组之间无显著差异,第8周B、C组较A组降低,但C组较B组升高.第8周末肾脏病理变化为,B组肾小球系膜区增宽,肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚,系膜及基质PAS阳性物增多,但C组上述变化明显较B组轻.ABC染色Laminin阳性物可见B组肾小球系膜区弥漫性增宽,肾小管基底膜阳性物呈宽带状沉积,而C组肾小球系膜区稍宽,肾小管基底膜阳性物呈线状沉积,y2检验P<0.05.B、C组肾皮质NO2-/NO3-与PAS阳性物灰度值呈直线正相关.结论:糖尿病肾病进程中内源性NO表现为初期的升高到发展中的下降趋势.内源性NO生成增多是导致糖尿病肾病早期肾小球高灌注、高滤过的重要原因之一,在糖尿病肾病发展中补充小剂量L-arginine能减轻肾小球基底膜的增厚和基质的增生,延缓肾小球硬化,对肾脏起保护作用.

    作者:程晖;贾汝汉 刊期: 2004年第04期

  • 哮喘病人树突状细胞产生IL-12的变化及对Th1/Th2平衡的影响

    目的:探讨过敏性哮喘病人和正常人外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞(dendritic cell,DC)产生IL-12的差异,及其对TH1/Th2平衡的影响.方法:分别取缓解期哮喘患者(哮喘组)和正常人(对照组)外周血经Ficoll和不连续密度梯度离心法获取贴壁细胞,经GM-CSF和IL-4体外培养为不成熟DC(iDC),加入LPS刺激使其发育为成熟DC(mDC).另取脐血同上方法获得非贴壁细胞,分别加CD4单抗和CD45RA单抗及磁珠分离得到初始T淋巴细胞(Th0).两组mDC分别和Th0共培养,通过ELISA法检测mDC分泌的IL-12和T淋巴细胞(TC)分泌的IFN-γ和IL-4的含量.结果:①哮喘组PBMC来源DC产生IL-12 P70及其亚单位P40均较对照组显著减少(P均<0.01).②DC及其IL-12致Th0分化,哮喘组TC释放IL-4较对照组显著增多(P<0.01);相反,IFN-γ较对照组减少(P<0.05).③哮喘组和对照组IL-12 P70和IFN-γ之间均呈正相关关系(分别P<0.01,P<0.05);两组IL-12 P70和IL-4均呈负相关关系(P均<0.01).结论:由于哮喘病人DC功能缺陷,产生IL-12减少导致Th2优势分化,从而使Th1/Th2平衡向Th2倾斜,合成IL-4增多和IFN-γ减少,后者是哮喘发生的重要机制之一.

    作者:毛光宇;杨炯;胡克;陈宏斌;张莉 刊期: 2004年第04期

  • 补肾壮骨方对去卵巢骨质疏松大鼠IL-6骨表达的影响

    目的:观察补肾壮骨方对实验性骨质疏松大鼠骨密度(BMD)、白细胞介素6(IL-6)骨表达的影响,进一步探讨补肾壮骨方抗骨质疏松的作用机理.方法:使用补肾壮骨方对切除卵巢的雌性成年Wistar大鼠进行不同剂量的药物治疗,并与正常对照组、模型组和尼尔雌醇治疗组的大鼠进行了对比,采用免疫组化的方法,检测并比较各组骨组织IL-6骨表达.结果:补肾壮骨方各剂量组和尼尔雌醇组可使骨质疏松大鼠的股骨、腰椎和全身的骨密度明显增加,且骨组织中IL-6的阳性表达明显弱于模型组,有统计学意义(P<0.05).结论:补肾壮骨方抗骨质疏松的作用可能是通过减弱骨组织中的IL-6表达,增加骨密度来发挥作用的.

    作者:颜灿群;陈友香;夏振信 刊期: 2004年第04期

  • 带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损

    目的:回顾性研究了带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损的治疗效果.方法:应用腓肠肌皮瓣、肌瓣、比目鱼肌瓣、肌骨膜瓣、跗外侧血管蒂骰骨趾短伸肌复合瓣、胫前或胫后血管节段性骨膜支骨膜瓣转位修复小腿组织缺损37例.结果:组织瓣全部存活,骨愈合时间4~6个月,无炎症复发、窦道及溃疡.结论:带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损,疗程短、疗效好,手术简便易行,不仅可修复软组织缺损,而且同时一期修复骨缺损.

    作者:卢光辉;余国荣;许典雄;刘合振 刊期: 2004年第04期

  • 苦参碱诱导血管紧张素Ⅱ作用的心肌成纤维细胞凋亡

    目的:研究苦参碱(matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用的小鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响.方法:不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞,利用倒置显微镜、PI/Hoechst 33342双染结合荧光显微镜技术观察细胞形态;流式细胞术检测其凋亡率、细胞周期及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变;采用Western Blotting检测Caspase-3蛋白的表达.结果:不同浓度Mat处理Ang Ⅱ作用的小鼠心肌成纤维细胞24 h,可见到染色质浓缩、边集、碎裂;凋亡率随浓度的升高而升高;细胞周期分析显示G1升高,S期下降,G2/M期无明显变化;,Bcl-2的表达量减少;Bax的表达量增加且呈剂量效应;Western Blotting检测显示Caspase-3活化.结论:Mat诱导AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞凋亡且呈剂量效应,其机制可能与降低Bcl-2、升高Bax、增强Caspas-3活性有关.

    作者:周成慧;欧阳静萍;周艳芳;胡迎春;杨海鹭;徐怡 刊期: 2004年第04期

武汉大学学报(医学版)杂志

武汉大学学报(医学版)杂志

主管:中华人民共和国教育部

主办:武汉大学