刘利梅；刘建；黄聿
目的：我们的前期研究发现，敲除FKBP12．6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12．6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法：手术摘除FKBP12．6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响；放射性免疫检测法（RIA）和ELISA法检测FKBP12．6敲除小鼠17β－estradiol （E2）、testosterone （T）、LHβ和FSHβ分泌变化情况；建立垂体神经元LβT2 FKBP12．6shRNA载体稳定干扰细胞系，采用Fluo3－AM荧光探针检测［ Ca2＋］ i；real－time PCR检测LHβ、FSHβ、calci－neurin（CaN）等mRNA表达变化；分离胞浆胞核蛋白，Western blot法检测CaN、MCIP1．4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果：摘除雄性FKBP12．6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生；FKBP12．6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化；血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调，表明敲除小鼠性腺轴调控增强；LβT2 FKBP12．6干扰后［ Ca2＋］ i 显著上升；性腺轴相关基因LHβ、SF－1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1．4、SERCA2的mRNA表达显著上调；胞浆中CaN和MCIP1．4蛋白水平上调；NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论：FKBP12．6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调，激活CaN／NFAT3通路，进而促进LHβ和FSHβ转录，导致下丘脑－垂体－性腺轴激活，从而诱发性别差异性心肌肥大。
作者：肖云飞；邓柯玉；王婵娟；曾智雄；管小卉；汪玲芳；姬广聚；寿伟年；辛洪波 刊期： 2015年第10期
目的：研究lipocalin家族成员NGAL对慢性髓系白血病细胞伊马替尼（ imatinib）耐药性的影响及其机制。方法：构建针对NGAL的慢病毒干扰载体，建立稳定干扰NGAL的细胞系。 MTT法检测细胞活力。 Hoechst 33258染色和流式细胞术检测ima－tinib诱导的细胞凋亡。结果：NGAL的干扰载体成功降低了白血病K562／G01细胞系中NGAL的表达。 Hoechst 33258染色和流式细胞术结果表明NGAL沉默可以增强imatinib对K562／G01细胞的杀伤作用。沉默NGAL可以降低NHE1的表达，进而抑制AKT的磷酸化。结论：shRNA干扰NGAL表达可以增加K562／G01对imatinib的敏感性，其机制包括抑制NHE1的表达进而调控PI3 K信号通路。
作者：李元叶；张海瑞；王齐；许华；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：观察姜黄素对gp120 V3环所致大鼠海马神经元突触可塑性损伤的作用及机制。方法：制备离体大鼠海马脑片，1 mol／L姜黄素或10 mol／L尼莫地平单独或分别与1 nmol／L gp120 V3环共同作用于大鼠海马脑片1h后，采用细胞外微电极记录技术，分别记录Schaffer侧支－CA1区神经元的输入／输出曲线（input－output curve，I／O curve）、场兴奋性突触后电位（field－ex－citatory postsynaptic potential，fEPSP）、长时程增强（ long－term potentiation，LTP）和双脉冲易化（ paired－pulse facilitation，PPF）。结果：各组药物对大鼠海马CA1区神经元突触的基本传递、突触前膜效应未产生明显影响（ P＞0．05），但gp120 V3环可显著抑制LTP的诱发，抑制神经元突触可塑性（ P＜0．05）；尼莫地平与姜黄素可拮抗gp120 V3环对海马脑片LTP的抑制作用，改善神经元突触可塑性（ P＜0．05）。结论：姜黄素可能是通过减少Ca2＋内流拮抗gp120 V3环对大鼠海马脑片CA1区神经元LTP的抑制作用，维持LTP稳定，改善突触可塑性。
作者：陈桂玲；刘思思；江明亮；行妍妍；林丽清；董军 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：明确二甲双胍是否通过腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK）依赖的方式抑制单侧输尿管梗阻（ UUO）诱导的肾间质纤维化。方法：采用WT及AMPKα2－／－小鼠， UUO手术制备肾间质纤维化模型。手术组术前3 d及术后7 d皮下注射二甲双胍0．2 g? kg－1? d－1。利用组化染色、肾功能检测、Western blot、ELISA等方法评价模型。结果：（1）WT小鼠，二甲双胍能够抑制UUO诱导的肾间质纤维化（P＜0．01），其机制是通过抑制TGF－β1－Smad3信号通路。（2）AMPKα2－／－小鼠，二甲双胍仍有部分抑制UUO诱导的肾间质纤维化的作用，但差异不显著。（3）二甲双胍不能抑制AMPKα2－／－小鼠肾脏组织中TGF－β1的产生。（4）二甲双胍有抑制UUO诱导的TGF－β1下游Smad3磷酸化的趋势。结论：二甲双胍通过AMPK依赖及非依赖的途径抑制UUO诱导的肾脏纤维化。
作者：冯晔囡；张幼怡；肖晗 刊期： 2015年第10期
病理学是基础医学和临床医学的桥梁，对学生医学知识的增加具有重要的作用。教师以课本为中心的传统讲授法，学生被动机械的记忆学习模式，使得病理学的教学效率较低。本文在程序教学法理论的指导下，进行病理学的教学尝试，探究《病理学》教学中程序教学法应用的有效策略。
作者：唐彩云 刊期： 2015年第10期
KCNE2是电压依赖性离子通道的辅助β亚基，在维持心电稳定性中起着十分重要的作用。有研究发现，KCNE2基因敲除小鼠发生心肌肥大、纤维化和收缩力减弱。我们以往的研究发现，KCNE2具有双向调节ICa，L的作用，通过RNAi降低心肌细胞KCNE2表达时，ICa，L明显增大。而我们近研究发现，在主动脉缩窄技术引起的心肌肥大小鼠模型和PE 诱导的乳鼠心肌细胞肥大模型中，KCNE2表达下调。通过RNAi降低培养乳鼠心肌细胞KCNE2表达，我们发现心肌肥大标志物心钠素（ ANP）的水平显著增加。应用激光共聚焦显微技术，我们发现降低培养乳鼠心肌细胞KCNE2表达，静息期细胞内钙浓度和收缩期钙瞬变显著增大， calcineurin活性增高， NFAT活化并入核增多。给予calcineurin抑制剂FK506，可显著抑制KCNE2低表达引起的calcineurin－NFAT信号通路激活。用重组腺病毒载体使KCNE2在培养的乳鼠心肌细胞过表达，可以逆转PE诱导的心肌细胞肥大。这一发现揭示了心肌肥大发生的新机制，为临床治疗提供新的靶标。
作者：刘文娟 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探究ghrelin在脑缺血再灌注损伤后神经修复过程中对神经元、星形胶质细胞及其功能网络联系的作用及机制。方法：培养离体脑片；采用氧糖剥夺／复氧复糖（ OGD／R）模型模拟脑缺血再灌注损伤；OGD／R损伤后给予ghrelin，连续观察7 d其对神经修复过程的作用；免疫组化染色观察细胞数量、形态及生长状态变化；Western blot检测蛋白表达；PCR检测mRNA表达。结果：OGD／R损伤及正常条件下ghrelin均加快轴突修复。损伤后第1天， ghrelin促进星形胶质细胞活化，标志分子GFAP及nestin表达增加，第7天则减少星形胶质细胞活化，神经调节蛋白1（neuregulin－1）及脑源性神经营养因子（BDNF）的表达增加。结论：Ghrelin能够促进脑缺血再灌注损伤后神经修复，并影响星形胶质细胞活化及神经生长因子表达；ghrelin促进神经修复的机制可能与综合调控星形胶质细胞活化和neuregulin－1及BDNF表达相关。
作者：刘晶；陈曼；董瑞瑞；王璇；祝世功 刊期： 2015年第10期
G蛋白偶联受体（ GPCR）与心血管疾病病、肿瘤、免疫和感染性疾病等重要疾病的发生、发展密切相关。同时，约50％药物都是以受体为靶点。但目前对受体精密调控机制尚不清楚。利用蛋白质组学、活细胞单分子荧光成像等方法，我们研究发现多种G蛋白偶联受体新调控机制。发现了肾上腺素受体新的调控子HIP－55（ hematopoietic progenitor kinase 1［ HPK1］－in－teracting protein of 55 kD）。 HIP－55通过蛋白质相互作用调控肾上腺素诱导转位激活、双相激活等受体激活方式。 HIP－55通过cAMP非依赖途径调控肾上腺素受体介导的p38、ERK1／2等重要信号通路。 HIP－55通过调控受体Clathrin内吞途径介导受体内吞、减敏及下游信号。此外，我们还发现另外一个生长分化因子15（growth differentiation factor－15，GDF－15）。 GDF－15通过抑制MMP途径，负调控肾上腺素诱导EGFR转位激活信号通路。基于G蛋白偶联受体信号调控机制的研究，我们也探索新的受体功能选择性药物研究开发，获得了一些候选化合物。
作者：李子健 刊期： 2015年第10期
目的：研究内毒素血症“瘀滞络脉”急性肺损伤大鼠的Rho／ROCK机制及川芎嗪的保护作用。方法：以内毒素“二次打击”建立大鼠内毒素血症“瘀滞络脉”急性肺损伤模型，分别设正常对照组、模型组、川芎嗪低剂量组、高剂量组，测定呼吸频率、肺泡灌洗液中性粒细胞（ PMN）百分率、肺湿／干重比、肺组织髓过氧化物酶（ myeloperoxidase，MPO）活性、ROCK mRNA表达量，并观察、评估肺组织损伤严重程度。结果：与模型组相比，川芎嗪显著降低呼吸频率、PMN百分率、肺湿／干重比、MPO活性、ROCK mRNA表达量，减轻大鼠急性肺损伤病理改变。结论：川芎嗪可能通过抑制Rho／ROCK通路对内毒素血症“瘀滞络脉”大鼠急性肺损伤有较好的保护作用。
作者：李言 刊期： 2015年第10期
目的：探究银杏叶提取物EGb761对人结肠癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养12株人结肠癌细胞，给予不同浓度EGb761（0～600 mg／L）作用24 h，采用MTT、集落生成实验以及流式细胞术检测给药处理后结肠癌细胞的增殖和凋亡情况。通过Western blot技术检测RIP－1分子表达水平和凋亡标志物PARP的表达水平变化。利用ELISA技术检测NF－κB信号通路的活性。结果：EGb761在较低浓度（400 mg／L）可以抑制结肠癌细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。随着药物浓度的增加，EGb761诱导结直肠癌细胞凋亡率也随之增加。 EGb761作用于结肠癌细胞后可导致凋亡相关蛋白RIP－1的降解。同时 EGb761通过抑制 I－κB 磷酸化而抑制 NF－κB 信号通路促细胞增殖的作用。结论：银杏叶提取物（ EGb761）能广泛抑制人结肠癌细胞的增殖，并诱导人结肠癌细胞发生凋亡，研究结果提示凋亡发生的机制与细胞内RIP－1的降解以及NF－κB信号通路的活性降低有关。
作者：杜吉佩；承尧；姬光瑜；郑焱江；廖诗平；张霁；王玉芳 刊期： 2015年第10期
目的：探讨tau蛋白对蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）的调节作用以及对细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）的影响。方法：用Western blotting分别检测野生型和tau基因敲除型小鼠海马组织ERK1／2的蛋白表达及磷酸化水平；用纯化的磷酸化ERK分别与野生型和tau基因敲除型小鼠海马组织匀浆液共孵育，通过免疫共沉淀实验以及丝／苏氨酸磷酸酯酶活性实验检测与ERK结合的PP2A活性。结果：与野生型小鼠相比，tau基因敲除型小鼠海马组织内ERK1／2磷酸化水平明显增高。体外实验显示：纯化的磷酸化ERK与tau基因敲除型小鼠海马组织匀浆液共孵育后，其去磷酸化过程受到明显抑制，这一过程在加入重组的tau蛋白后得到逆转。免疫共沉淀实验以及丝／苏氨酸磷酸酯酶活性实验显示：与野生型小鼠相比，tau基因敲除型小鼠海马组织内与ERK结合的PP2A明显减少，活性显著下降。结论：Tau蛋白通过募集PP2A加速ERK1／2的去磷酸化。
作者：庹清章；孙旭莹；刘杨震宇；王建枝；刘蓉 刊期： 2015年第10期
目的：研究铁超载对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响以初步证实铁超载对肝纤维化的促进作用。方法：大鼠肝星状细胞HSC－T6给予硫酸亚铁2μmol／L负载24 h，正常对照组给予DMSO 2μmol／L。免疫荧光染色法观察铁在HSC－T6中的分布面积，流式细胞术检测HSC－T6增殖， TUNEL法检测HSC－T6凋亡，Western blot检测HSC－T6基质金属蛋白酶1（MMP－1）和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1）蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比，铁超载组HSC－T6内铁染色阳性的平均面积为39．02％±2．03％，平均增殖率为61．02％±2．21％，平均凋亡率为13．01％±0．95％，MMP－1和TIMP－1的蛋白平均表达水平分别增加了38．82％±7．62％和179．88％±17．52％。结论：铁超载导致肝星状细胞的增殖率大于其凋亡率，并且肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂的表达水平高于其基质金属蛋白酶的水平，因此推断铁超载促进了肝星状细胞的活性，从而促进了肝纤维化的进程。
作者：张颖 刊期： 2015年第10期
目的：探讨外源性多胺恢复老龄心肌对缺血预适应刺激敏感性的能力及机制。方法：取3与18月龄大鼠复制离体心脏缺血再灌注（ IR）与缺血预适应（ IPC）模型，共为6组：青年、老年IR（ YIR、OIR）与IPC （ YIPC、OIPC）组、多胺组（ Pas－OIPC）及多胺合成抑制剂组（ DFMO－Pas－OIPC）。检测心肌多胺、多胺合成与分解限速酶、心肌抗氧化能力、心脏功能及超微结构变化。观察不同浓度的多胺对诱导衰老的心肌细胞自噬、氧化应激及线粒体功能的影响。结果：与OIR比较，OIPC组各项指标均未见明显改变；与YIPC组比较，OIPC组心肌多胺合成减少、分解增强、总多胺池耗竭、心肌抗氧化能力及心脏收缩功能下降；多胺能明显减轻OIPC组的心肌损伤；DFMO取消了外源性多胺的作用。多胺呈浓度依赖性地诱导细胞自噬、提高线粒体呼吸功能、抑制心肌细胞衰老。结论：多胺可能通过恢复老龄心肌多胺池、诱导自噬、减轻线粒体损伤而恢复老龄心肌对IPC刺激的敏感性。
作者：张昊；柴囡楠；张伟华；王丽娜；张力；时飒；徐长庆；田野；赵雅君 刊期： 2015年第10期
目的：探讨CIP2A对PP2A的调节及其在阿尔茨海默（ Alzheimer disease，AD）样tau蛋白异常磷酸化中的作用。方法：免疫荧光检测CIP2A表达及定位；Western Blot检测相关蛋白表达。结果：N2a细胞与大鼠原代神经元胞浆中均有较强的CIP2A阳性着色，并与tau蛋白共定位；过表达CIP2A组磷酸化的PP2Ac－Y307表达升高，PP2A活性降低，tau蛋白S396和S404位点磷酸化水平明显升高，下调CIP2A表达后，上述结果相反；细胞周期阻滞剂Aphidicolin同步化N2a细胞后，CIP2A表达增高， PP2Ac－Y307磷酸化水平显著下降，tau蛋白S396和S404位点磷酸化水平升高。结论：CIP2A可通过调节PP2A活性调节tau蛋白磷酸化水平，从而可能在AD发生发展中发挥重要作用。
作者：冯小龙；王秀莲；王群；刘蓉 刊期： 2015年第10期
目的：采用Urotensin II（ UII）体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并探讨其机制。方法：采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞，后半小时与1×10－7 mol／L insulin共孵育，葡萄糖－己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量，以HepG2细胞蛋白进行定量，确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间；多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧（ ROS）变化；Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS－1及Akt蛋白的表达。结果：hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h，佳UII浓度为1×10－7 mol／L。与空白对照相比，UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显（ P＜0．05）；且UII孵育组IRS－1及Akt蛋白的表达明显降低（P＜0．05），提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论：采用UII体外诱导的方法，UII浓度为1×10－7 mol／L，作用24 h后，可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。
作者：李莹莹；禹晓童；王学江 刊期： 2015年第10期
研究黄芪甲苷（ AS－IV）对小鼠心梗后左室功能的影响及可能机制。分离冠脉左前降支（ LAD）与伴行静脉并于左心耳下缘2 mm处结扎制备心梗模型（手术组），结扎后小鼠每日腹腔注射10 mg／kg AS－IV（治疗组）；以分离LAD后不结扎小鼠为对照。术后2周，心超检测小鼠左心室功能，观察小鼠心脏病理改变、梗死边缘区血管数目、SOD2及NOX4表达。与对照小鼠相比，术后小鼠射血分数显著降低，左室扩张伴心室前壁变薄，心室前壁变薄处纤维增生，心梗边缘区血管数目明显减少，SOD2表达显著降低，NOX4表达明显增多。 AS－IV干预可显著提高小鼠左心室射血分数，明显增加心肌梗死边缘区血管数目和SOD2表达，降低NOX4表达，未能减少心梗区面积。本研究提示黄芪甲苷能改善心梗小鼠左室功能，增加心肌梗死边缘区血管数目及降低该区域氧化应激水平可能是其机制之一。
作者：李苏；陈相建；吴恒芳；杨笛 刊期： 2015年第10期
高血压、冠心病等严重疾病的血管损伤均始于内皮功能障碍。内皮细胞丰富的内质网是调控蛋白合成、折叠和钙稳态的重要亚细胞器。多种理化因素可致内质网应激（ ERS ）。在经典的ERS3大途径中，主要调控蛋白合成、折叠和细胞凋亡的PERK途径启动与整合细胞核、线粒体和高尔基体等亚细胞器的反应，故被称为整合应激反应（ ISR）。正常状态下，与GRP78结合的PERK以无活性复合物的形式存在。未折叠蛋白与GRP78结合后，游离PERK发生磷酸化，通过磷酸化eIF2α影响募集起始子蛋氨酰tRNA／40 S小亚基核蛋白体复合体的组装与启动，造成蛋白合成暂停，以减轻内质网负荷，恢复细胞稳态。过度ERS时蛋白合成持续抑制则影响应激细胞修复。 eIF2α下游GADD34的负反馈调节机制通过去磷酸化 eIF2α，重启被eIF2α磷酸化抑制的蛋白质合成。 ISR另一个重要分支由磷酸化的eIF2α上调活化ATF4的翻译所启动。 ATF4合成后转位至细胞核，上调促凋亡分子CHOP，启动ERS相关细胞凋亡。 ISR是细胞应激的初反应，决定应激细胞的转归：恢复自稳态和修复损伤，或损伤加重乃至死亡，是内皮功能障碍相关疾病防治的新靶点。
作者：刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：探讨银杏叶提取物Egb 761对大鼠心梗后心肌纤维化的作用和可能机制。方法：结扎冠脉左前降支复制大鼠心梗后心肌纤维化模型，Masson染色观察心肌纤维化病理改变。免疫组化法检测心肌α－平滑肌肌动蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal－regulated kinase 1／2，ERK1／2）蛋白的表达。结果：假手术组心肌纤维排列规则，界限清楚；模型组梗死心肌为大量结构紊乱的纤维组织替代，纤维化明显；Egb 761组心肌纤维化减轻。α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2蛋白在假手术组有微弱表达；在模型组表达明显增加，而Egb 761可抑制上述表达的增加。结论：银杏叶提取物可改善大鼠心梗后心肌纤维化，其机制可能与调节α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2的表达有关。
作者：李淑琴；武宇洲；朱嘉宝；邢茹 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
