余群芳；蔡震宇；朱俊；梅任美；黄永红；徐方云；熊丽霞
目的：观察二甲双胍对卵巢癌细胞株SKOV3的促凋亡作用，并探讨其可能机制。方法：MTT法检测二甲双胍（0、1．25、2．5、5、10、20、40 mmol／L）作用24 h对SKOV3细胞生存率的影响；Hoechst 33342标记细胞核，荧光显微镜下观察二甲双胍（10 mmol／L）对SKOV3细胞核形态的影响；Western blot法检测二甲双胍（10 mmol／L）对SKOV3细胞线粒体去乙酰化酶 sirtuin 3（ SIRT3）蛋白水平的影响；MitoTracker Red特异性标记线粒体，荧光显微镜下观察二甲双胍对SKOV3细胞线粒体形态的影响。结果：二甲双胍对于SKOV3细胞具有剂量依赖的抑制作用（P＜0．05）；与未处理组相比：二甲双胍（10 mmol／L）可引起SKOV3细胞核固缩、核染色增强，提示其促SKOV3细胞凋亡；二甲双胍能够上调SKOV3细胞SIRT3蛋白的水平（ P＜0．05）；二甲双胍使SKOV3细胞线粒体数目增多，形态呈点状。结论：二甲双胍能够诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡，这一过程可能同上调线粒体去乙酰化酶SIRT3以及对线粒体动力学的调控有关。
作者：吴瑶；苏静；项喜艳；赵卜司；路圣垚；薛亚楠；颜晓羽；孙连坤 刊期： 2015年第10期
目的：为加强学生对机能学实验操作技能的掌握，我校开展了“机能学实验技能大赛”。方法：2010年起，我校5个年级4个专业6000余名学生参与了“机能学实验技能大赛”。观察大赛对学生实验操作技能、团队协作精神、创新能力以及学习成绩的影响。结果：（1）学生对竞赛的满意度（90．3±3．4）％。（2）（89．1±2．9）％认为大赛促进团队协作，（95．1±1．8）％认为大赛促进基本技能的掌握，（86．7±4．1）％认为大赛促进创新。（3）参加大赛同学成绩优秀率（46．3±3．8）％，较未参加大赛同学［（30．7±2．5）％］明显提高。结论：通过大赛，极大增强了学生的动手能力，培养学生团队合作意识和科研创新意识，为培养医学实用人才奠定了良好基础。
作者：李鑫；金成文；崔晓栋；成敏 刊期： 2015年第10期
目的：观察益气活血颗粒对大鼠心气虚证CD3＋、CD4＋、CD8＋和cAMP／cGMP（环一磷酸腺苷／环一磷酸鸟苷）的影响。方法：用大鼠负重强迫游泳后通过给予大剂量心得安使大鼠造模定位于心脏，作为心气虚证动物模型。随机分为4组：大、小剂量治疗组（2 g／100 g，0．5 g／100 g益气活血颗粒）、阳性对照组（1 g／100 g天王补心丸）及生理盐水组，均每天1次，连续7 d灌胃，观察各组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋、cAMP／cGMP的变化以及心肌中cAMP／cGMP的变化。结果：造模组外周血的CD3＋和CD4＋含量低于生理盐水组，CD8＋的含量高于生理盐水组，且与各组比较均有显著差异（P＜0．01）。大剂量治疗组与阳性对照组比较有显著差异（P＜0．01）；造模组外周血、心肌中的cAMP和cGMP含量与各组比较均有显著差异（P＜0．01）。且大、小剂量治疗组与阳性对照组比较均有显著差异（P＜0．01）；大剂量与小剂量治疗组比较亦有显著差异（P＜0．01）。结论：心气虚证模型成立。益气活血颗粒可升高CD3＋、CD4＋和cAMP的含量，降低CD8＋和cGMP含量。
作者：金戈 刊期： 2015年第10期
目的：检测黄芩素对B16细胞Ezrin蛋白表达的影响，探讨黄芩素抑制B16细胞增殖和迁移的可能机制。方法：MTT法检测黄芩素对B16细胞增殖的影响；划痕实验检测黄芩素对B16细胞迁移的影响；PCR法检测黄芩素对B16细胞p12－LOX和Ezrin mRNA的表达的影响；蛋白印迹法检测了黄芩素对B16细胞p12－LOX蛋白表达的影响；细胞荧光染色法检测黄芩素对B16细胞Ezrin蛋白的影响。结果：黄芩素素浓度和时间依赖性地显著抑制B16细胞的增殖和划痕修复；黄芩素明显抑制B16细胞的p12－LOX和Ezrin mRNA及蛋白的表达。结论：黄芩素抑制p12－LOX和Ezrin蛋白表达是黄芩素显著抑制B16细胞的增殖和迁移的可能机制。
作者：李娟；崔宇勃；叶晶；孙沛林；朴英实；林贞花；金京春 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：细胞自噬是溶酶体参与降解多种细胞内容物的过程，具有重要的病理及生理学作用，本研究主要关注细胞自噬是否在胚胎发育早期心管形成中也具有重要作用。方法：应用鸡胚为模式动物，采用免疫荧光的方法研究自噬相关基因7（ auto－phagy－related gene 7，ATG7）在胚胎早期的表达模式，随后用雷帕霉素（ RAPA）、3－甲基腺嘌呤（3－MA）等分别处理胚胎，用Time－lapse拍摄心脏祖细胞的迁移模式，免疫荧光、原位杂交等方法检测ATG7、LC3、MF－20、GATA4、GATA5等基因的表达情况。结果：RAPA和3－MA能够分别影响ATG7、E－Cadherin等基因的表达模式，导致胚胎早期上皮细胞向间充质细胞转化紊乱；高葡萄糖环境或酒精处理能够过度激活胚胎发育过程中的细胞自噬，导致胚胎心管肥大或者融合异常，这与RAPA处理的胚胎心管畸形极为相似；细胞自噬过度激活影响心脏祖细胞迁移和GATA4、GATA5等心管生成基因的表达。结论：妊娠合并糖尿病及妊娠期饮酒等因素会导致胚胎发育环境中细胞自噬的过度激活，从而影响细胞内的蛋白降解异常和细胞分化异常等，终导致胚胎心管发育畸形。
作者：王广；芦文慧；李帅；高麟芮；黄文清；崔舒丹；王晓钰；陆大祥；杨雪松 刊期： 2015年第10期
核糖体S6激酶（ribosomal S6 kinase，RSK）2属于Ras－MAPK下游通路的90 kD的RSK家族，该家族包含4个成员（ RSK1～4）及2个结构同系物MSK1／2。 RSK家族的成员具有高度的序列同源性（75％～80％的氨基酸序列是一致的），只有2个激酶功能域不同。尽管结构相似，它们在组织内的分布及功能却不尽相同［1］，而本文主要介绍 RSK2。RSK2的发现起始于它的基因缺陷会导致科－勒二氏综合征（ Coffin－Lowry syndrome，CLS），一种罕见的神经退行性疾病［1］。后来深入的研究发现， RSK2是ERK1／2直接的下游底物，RSK2一旦被激活就会转入到核中磷酸化多种核蛋白，从而调控细胞的多项生命活动包括细胞的增殖、周期、转化等。近几年有不少研究证实RSK2的蛋白水平在恶性肿瘤及组织中较正常细胞及组织明显偏高［2］，而研究者们一直致力于寻找高效低毒的靶向RSK2的抑制剂。由此可见，RSK2是一个很有潜力的抗癌靶标。本文主要就RSK2的结构功能、与肿瘤的关系及现有抑制剂展开介绍。
作者：陈康杏；王籽又；黄燕霞；钟承志；李凯恒；黄遵楠 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Neuro－2a细胞株用于A型肉毒毒素重链（ botulinum neurotoxin serotype A heavy chain， BoNT／A HC）体外细胞模型的可行性。方法：体外培养Neuro－2a细胞检测HC相关受体，确定是否可用于HC作用的体外模型；后于Neuro－2a细胞培养液内加入一定浓度的HC，于不同时点在相差显微镜下摄取图片观察HC对细胞突起生长状况的影响，包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。结果：（1）培养一定时间的Neuro－2a细胞表达HC的高亲和力（synaptic vesicle 2，SV2）和低亲和力（trisialoganglioside 1b，GT1b）受体。（2）培养液内加入一定剂量的HC可促进Neuro－2a细胞突起再生及增长。在HC影响下，有突起的Neuro－2a细胞百分比、神经突起的总数量以及平均突起的长度皆较对照组明显增加，且差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：Neuro－2a细胞可用于HC体外研究的细胞模型；Neuro－2a对HC比较敏感；一定剂量的HC能够促进神经突起的生长。
作者：王红；李夏青 刊期： 2015年第10期
目的：探讨omega－3多不饱和脂肪酸（ polyunsaturated fatty acid， PUFA）对动脉粥样硬化斑块稳定性的作用及可能机制。方法：采用低密度脂蛋白受体敲除（Ldlr－／－）小鼠喂养西方饮食（western diet， WD）6周诱导动脉粥样硬化，并在饮食中添加或不添加3％omega－3 PUFA进行干预。使用液相质谱联用检测血浆中PUFA及其代谢产物浓度。油红O染色分析测定动脉树斑块面积及主动脉根部斑块脂质含量，HE染色分析主动脉根部斑块大小，天狼星红染色分析主动脉根部斑块胶原纤维含量，免疫荧光检测主动脉根部斑块巨噬细胞和平滑肌细胞含量。结果：（1）与WD组相比，omega－3组小鼠动脉树斑块面积比例显著降低。（2）Omega－3处理组与对照组相比，主动脉根部斑块面积、脂质含量和巨噬细胞含量显著降低；同时胶原纤维和平滑肌细胞含量显著上升，斑块不稳定指数下降（P＜0．05）。（3）Omega－3处理组血清中omega－3 PUFA显著增加，分析代谢产物发现EEQ和18－HEPE水平显著增加。结论：Omega－3处理减少动脉粥样硬化斑块面积、增加斑块稳定性，其机制可能与其代谢产物水平变化相关。
作者：刘亚晋；李丹；张栩；艾玎；朱毅 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：研究亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中抑癌基因FHIT的表达变化，明确其遗传及表观遗传调控机制。方法：建立N－甲基－N’－硝基－N－亚硝基胍（ MNNG）和N－甲基－N－亚硝基脲（ MNU）暴露后胃黏膜上皮细胞GES－1的恶性转化模型。动态分析FHIT表达、基因缺失、DNA甲基化和组蛋白修饰变化。结果：MNNG和MNU暴露早期FHIT即明显下调，且与暴露剂量呈负相关。 FHIT低表达恶性转化单克隆细胞株克隆形成能力明显增强。外显子特异性PCR显示基因无纯合性缺失。甲基化特异性PCR显示FHIT基因甲基化水平增高，亚硫酸氢盐基因组测序证实FHIT启动子区呈明显高甲基化。组蛋白修饰分析发现FHIT低表达细胞株组蛋白H4乙酰化水平降低，组蛋白去乙酰化酶HDACs家族成员参与调控。结论：亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中FHIT基因在恶性变早期即下调，DNA甲基化和组蛋白修饰参与其表达调控。
作者：张水莲；沈静 刊期： 2015年第10期
心力衰竭是严重危害国人健康与生命的重大疾病，目前有效治疗手段缺乏，因此对心衰病理机制进行研究，发现新的诊疗方法具有重要意义。我们研究在国际上首次发现支链氨基酸代谢异常与心衰的发生和发展紧密相关。在野生型小鼠心衰过程中，支链氨基酸代谢酶的基因表达受到抑制，导致支链氨基酸代谢缺陷，代谢中间产物支链酮酸累积。更为重要的是，这些现象也在人的衰竭心脏中得到证实。进一步的研究发现支链氨基酸代谢酶的基因表达抑制受到转录因子KLF15调控。在基因敲除小鼠模型中，支链氨基酸代谢缺陷损伤心脏的收缩功能并促进了心衰的发展。支链酮酸可以抑制线粒体氧化磷酸化，在心脏中诱发氧化应激并干扰糖脂代谢。因此病理状态下心脏中的支链氨基酸代谢异常可能会进一步促进心衰的发生和发展，形成一个正向恶性反馈环。这一研究发现了心衰发生发展的新机制，为心衰的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。
作者：孙海鹏；周美佚；刘云霞；黄莹；王义斌 刊期： 2015年第10期
目的：探讨缺血－再灌注操作诱导大鼠肝纤维化模型建立的方法。方法：20只SD雄性大鼠随机分成2组：正常对照组及模型组。正常对照组仅给予肝蒂骚扰，不夹闭；模型组行肝门阻断，阻断入肝70％的血流，单纯缺血90 min后开夹。9周后处死动物，采集血清，放射免疫法测定血清层黏蛋白（ LN）及透明质酸（ HA）、生化检测丙氨酸氨基转移酶（ ALT）及天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）；取部分肝组织制备匀浆，测定肝组织中超氧化物歧化酶（ SOD）和丙二醛（ MDA）水平，HE染色观察肝纤维化的程度。结果：与正常对照组相比，模型组血清LN、HA、AST及ALT水平明显升高（ P＜0．05），肝组织中SOD活性降低（P＜0．01），MDA含量明显升高（P＜0．01）。光镜下模型组肝小叶结构紊乱，肝细胞变性和坏死的程度较正常对照组明显，可见纤维增生。结论：肝缺血再灌注损伤可以诱导大鼠的肝纤维化模型。
作者：秦燕；苏娟；刘俊萍；刘仁贵；崔学斌 刊期： 2015年第10期
目的：采用Urotensin II（ UII）体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并探讨其机制。方法：采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞，后半小时与1×10－7 mol／L insulin共孵育，葡萄糖－己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量，以HepG2细胞蛋白进行定量，确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间；多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧（ ROS）变化；Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS－1及Akt蛋白的表达。结果：hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h，佳UII浓度为1×10－7 mol／L。与空白对照相比，UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显（ P＜0．05）；且UII孵育组IRS－1及Akt蛋白的表达明显降低（P＜0．05），提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论：采用UII体外诱导的方法，UII浓度为1×10－7 mol／L，作用24 h后，可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。
作者：李莹莹；禹晓童；王学江 刊期： 2015年第10期
目的：研究lipocalin家族成员NGAL对慢性髓系白血病细胞伊马替尼（ imatinib）耐药性的影响及其机制。方法：构建针对NGAL的慢病毒干扰载体，建立稳定干扰NGAL的细胞系。 MTT法检测细胞活力。 Hoechst 33258染色和流式细胞术检测ima－tinib诱导的细胞凋亡。结果：NGAL的干扰载体成功降低了白血病K562／G01细胞系中NGAL的表达。 Hoechst 33258染色和流式细胞术结果表明NGAL沉默可以增强imatinib对K562／G01细胞的杀伤作用。沉默NGAL可以降低NHE1的表达，进而抑制AKT的磷酸化。结论：shRNA干扰NGAL表达可以增加K562／G01对imatinib的敏感性，其机制包括抑制NHE1的表达进而调控PI3 K信号通路。
作者：李元叶；张海瑞；王齐；许华；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：已知低氧可以激活巨噬细胞，进而参与低氧导致的炎症反应。 RhoB是小G蛋白Rho家族的成员，其表达能被基因毒应激等诱导，但是RhoB是否参与低氧诱导的炎症反应还不清楚。本研究探讨了低氧对巨噬细胞RhoB表达的影响及在炎症反应中可能的作用。方法：用real－time PCR和Western blot方法研究基因的表达；用ELISA法检测促炎细胞因子的分泌；用Boyden小室检测细胞的迁移；用报告基因的方法检测NF－κB的活性。结果：低氧可在原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7巨噬细胞中上调RhoB的表达。低氧诱导因子1（HIF－1）和激活的JNK和ERK与低氧上调RhoB有关。干扰RhoB的表达可以明显抑制低氧时RAW264．7细胞NF－κB的转录活性和促炎细胞因子IL－1、IL－6和TNF－α的产生，并可抑制细胞黏附和增加细胞迁移，表明低氧上调RhoB参与了低氧增加巨噬细胞促炎细胞因子的生成，促进其黏附和抑制其迁移的作用。结论：Rho－NF－κB通路在低氧激活巨噬细胞及低氧诱导的炎症反应中发挥重要作用。
作者：黄高翔；张明焯；王燕；苏杰；卢建 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在氧化型低密度脂蛋白（Ox－LDL）诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用。方法：用Ox－LDL诱导体外培养的人血管平滑肌细胞钙化，real－time PCR和Western blot检测TLR4，血管平滑肌细胞收缩型蛋白SMA和SM22α，以及成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，细胞免疫荧光检测细胞核内NK－κB的表达水平。结果：Ox－LDL可促进TLR4的表达上调以及激活其下游分子NK－κB向细胞核内转移。 TLR4 siRNA转染细胞可减轻Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，抑制血管平滑肌细胞成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，升高收缩型蛋白SMA和SM22α的表达水平，阻断NK－κB核内转移。另外，NK－κB抑制剂PDTC可抑制Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化。结论：TLR4通过激活NK－κB促进Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，提示TLR4可作为干预血管钙化的潜在靶点。
作者：陆立鹤 刊期： 2015年第10期
目的：研究长链非编码RNA SNHG5在胃癌中的表达、功能及机制。方法：实时荧光定量 PCR检测SNHG5在胃癌和癌旁组织中的表达差异；在人胃癌细胞中研究过表达或敲低SNHG5对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响；建立裸鼠皮下及转移瘤模型，研究SNHG5在体内对肿瘤发生发展及转移的影响；利用RNA－pulldown联合质谱的策略寻找SNHG5的相互结合蛋白，再通过RIP进行验证。结果：发现SNHG5在胃癌组织中表达异常增高，其表达水平与肿瘤的TNM分期和癌栓的形成显著相关。 SNHG5可以抑制胃癌细胞在体内外的增殖和转移。此外还发现，SNHG5主要通过阻止其结合蛋白MTA2从细胞质到细胞核的易位而发挥功能。过表达SNHG5能够促进组蛋白H3和p53的乙酰化水平，这也提示SNHG5可能通过捕获细胞质中的MTA2，从而干扰核小体的重塑和组蛋白去乙酰化酶复合物的形成，进而调节其功能。结论：SNHG5是一个影响胃癌细胞增殖和转移的关键分子，可能成为胃癌的预防、诊断和治疗的新靶标分子。
作者：史娟 刊期： 2015年第10期
目的：观察CMKLR1过表达在大鼠非酒精性脂肪性肝炎脂肪组织中的作用及意义。方法：制备携带大鼠CMKLR1基因的慢病毒载体。12周龄雄性SD大鼠随机分4组：对照12只；模型12只；转染12只，空转染6只。对照普通饮食；余高脂饮食；第1天转染组尾静脉注射病毒液100μL，空转染组注射空病毒液100μL，余注射PBS 100μL。分批处死空转染组评价转染效率。第8、12周，分批处死大鼠，留肝、脂肪组织。结果：（1）肝HE示：对照大鼠肝细胞条索清晰；模型组8周出现单纯性脂肪肝；12周出现非酒精性脂肪性肝炎；转染组肝病理程度比同期模型组轻。（2）模型组与同期对照组相比脂肪组织中CMKLR1 mRNA和蛋白表达增加，但差异无统计学意义，转染组比同期模型组显著增高（ P＜0．05）；模型组大鼠与同期对照组相比脂肪组织中脂联素基因和蛋白表达降低，转染组比同期模型组显著增高（P＜0．05）。结论：（1）高脂饮食12周成功建立了大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型；（2）脂肪组织中CMKLR1过表达可显著改善大鼠非酒精性脂肪性肝炎时肝组织病理学改变。
作者：刘近春 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
