尹中波；霍云龙；周婷婷；王春玉；赵越
目的:克隆与表达针对人CD133分子两个不同胞外段的单链抗体.方法:提取杂交瘤细胞总mRNA,利用简并引物PCR获得针对人CD133分子两个胞外段抗体可变区基因,再通过重叠延伸PCR的方法,用一段柔性linker (GGGGS)3将其相连,得到CD133 Ex-1 scFv和CD133 Ex-2 scFv基因.随后,将其克隆至携带6×His标签的原核表达载体pRSET-B中,然后对其进行了表达和鉴定研究.结果:获得分别针对CD133不同胞外段的单链抗体基因,并成功获得针对CD133两个胞外段的单链抗体,但该单链抗体主要以不溶性包涵体形式存在于胞内.包涵体蛋白经复性和镍柱亲和层析纯化后,得到纯度较高的单链抗体,通过蛋白质印迹实验证实,融合蛋白确实为单链抗体.结论:成功制备出针对CD133两个胞外段的单链抗体.该研究结果为其功能研究及其在肿瘤靶向治疗研究中奠定了物质基础.
作者：王菲；赵静；王顺娟；夏海滨 刊期： 2013年第05期
目的:探讨microRNA-125a-3p(miR-125a-3p)在胃癌细胞恶性增殖中的作用及调控机制.方法:qRT-PCR法检测各肿瘤细胞系及正常对照细胞系中miR-125a-3p的表达,应用microRNA类似物(Mimic及Inhibitor)转染技术改变细胞内miR-125a-3p表达.Western-blot检测NRG1蛋白表达水平的改变.XTT、平板克隆及裸鼠成瘤试验检测处理后胃癌细胞的增殖能力.流式细胞术检测细胞周期变化情况.结果:miR-125a-3p在多个胃癌细胞系中表达均低于永生化胃黏膜上皮细胞系(P＜0.01).利用类似物转染可以有效改变肿瘤细胞miR-125a-3p的表达(P＜0.01).miR-125a-3p过表达可以降低NRG1蛋白的表达、抑制细胞周期进展,并降低胃癌细胞系的体外和在体增殖能力,抑制miR-125a-3p表达可以见到相反结果.结论:miR-125a-3p可通过调控NRG1表达在胃癌中起到抑癌作用.miR-125a-3p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,因此具有成为胃癌治疗新策略候选靶点的可能.
作者：刘常浩；李铤；韩亚楠；吴开春 刊期： 2013年第05期
人内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)是一种可溶性的蛋白聚糖,由一条硫酸皮肤素链和一个核心蛋白相连而成.其基因位于人第五号染色体5q11.2上,含3个外显子和2个内含子.它的表达受细胞因子、血管生长因子、转录因子等多种因素的复杂调控.内皮细胞特异分子-1与人类多种肿瘤关系密切,可以促进肿瘤形成、生长和转移.其相关机制主要有促进细胞增殖、引起免疫抑制、促进淋巴管和血管生成等.它在肿瘤的筛查、诊断、治疗、疗效检测、预后判断等应用方面有着巨大的潜力,值得做更加广泛和深入的研究.
作者：龙驰；张濛；张明慧；胡义德 刊期： 2013年第05期
目的:探讨氢质子磁共振波谱分析(1H-MRS)对放射性脑坏死和脑肿瘤复发的鉴别作用.方法:选择35例经放射治疗后,在常规MRI图像上发现原肿瘤部位或周边有新的异常强化灶的脑恶性胶质瘤、脑转移瘤患者,其中3-4级胶质瘤18例,脑转移瘤17例.多体素1H-MRS采用PRESS序列.研究指标包括N-乙酰门冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)及肌酐(Cr).结果:NAA、Cho及Cr下降或消失,NAA/Cr比值与Cho/Cr比值均下降；脑肿瘤复发Cho上升,NAA明显下降.脑肿瘤复发和放射性脑坏死之间,Cho/Cr、Cho/NAA有统计学差异(P＜0.05),NAA/Cr无统计学差异(P＞0.05).结论:1H-MRS对脑肿瘤放射治疗后的脑坏死及脑肿瘤复发的评估和鉴别诊断有重要临床应用价值.
作者：刁焕荣；孙成英 刊期： 2013年第05期
目的:研究胃癌肿瘤干样细胞(cancer stem like cells,CSLC)向内皮细胞的分化,以期发现抗肿瘤血管治疗新靶点,并降低抗血管靶向治疗的耐药性.方法:用长春新碱(VCR)筛选胃癌低分化腺癌SGC7901细胞系,加生长因子无血清培养的方法诱导胃癌CSLC,并对其在血管内皮细胞生长因子(VEGF)的刺激下向内皮细胞分化的生物学行为进行观察.结果:成功诱导绿色荧光蛋白(GFP)标记的胃癌CSLC.Western blot、immunofluorescence检测证实:内皮细胞的分子标记物CD31,CD34在经血管内皮细胞生长因子刺激后的CSLC中呈阳性表达.成管实验结果显示CSLC在内皮环境中培养后较SGC7901细胞和无刺激的CSLC具有明显的成管能力.SGC7901和CSLC分别裸鼠皮下成瘤后,移植瘤免疫组化分析检测证实,肿瘤干样细胞移植瘤的组织切片用人源性血管内皮标志CD31、CD34抗体行免疫组化染色,可明确观察到人源性微血管形成.结论:胃癌CSLC具有向内皮分化的潜能；裸鼠移植瘤中含有人源性内皮细胞,提示胃癌CSLC可能参与胃癌肿瘤血管生成过程.
作者：郭汉青；严惠；李铤；聂勇战；樊代明；吴开春 刊期： 2013年第05期
目的:构建Flag-RNF8真核表达质粒,证实融合蛋白在前列腺癌细胞内的表达与定位.方法:提取人前列腺癌细胞CWR22RV1总RNA,反转录为cDNA.PCR扩增RNF8全长编码区cDNA序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到前列腺癌细胞CWR22RV1中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察Flag-RNF8在CWR22RV1细胞内定位.使用免疫沉淀的方法纯化RNF8蛋白.结果:RNF8蛋白全长编码区cDNA克隆到了真核表达载体pcDNA3-Flag中,酶切鉴定片段约为1500bp.Western blot检测到了融合蛋白Flag-RNF8的表达,分子量约为57kDa.Flag-RNF8在CWR22RV1细胞中表达并定位在细胞核中.成功纯化RNF8蛋白.结论:成功构建了FlagRNF8全长编码区cDNA的真核表达质粒；鉴定了Flag-RNF8融合蛋白的表达并纯化RNF8蛋白；在CWR22RV1细胞中,Flag-RNF8蛋白主要定位在细胞核中.为进一步研究RNF8的生物学特性及其功能奠定了基础.
作者：尹中波；霍云龙；周婷婷；王春玉；赵越 刊期： 2013年第05期
目的:探讨岩藻糖基化抗原对人卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ增殖的影响,初步探讨其与增殖信号通路磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的关系.方法:观察PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对岩藻糖基化抗原致卵巢癌细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测岩藻糖基化抗原对细胞增殖的增强情况；Western blot观察RMG-Ⅰ的Akt磷酸化蛋白表达.结果:α1,2-FT基因转染后细胞中Lewis(y)抗原含量明显增高.随着Lewis (y)含量的增加,RMG-Ⅰ细胞增殖明显加快.Lewis(y)高表达卵巢癌细胞中磷酸化Akt 的表达水平明显增高.PI3K抑制剂LY294002显著抑制Lewis(y)高表达卵巢癌细胞的增殖.抗Lewis (y)抗体和LY294002不仅降低了转染前后细胞中磷酸化Akt的表达水平,还消除了存在于细胞间的高低差别.结论:过表达的Lewis(y)抗原通过激活PI3K/Akt信号转导通路促进卵巢癌RMG-Ⅰ细胞的增殖.抑制Lewis (y)抗原表达可能是一种治疗Lewis(y)高表达肿瘤的新方法.
作者：穆庆；刘娟娟；郝莹莹；林蓓；张淑兰 刊期： 2013年第05期
目的:构建双表达人Arid5a(hArid5a)及报告基因eGFP的重组腺病毒载体,为研究Arid5a的生物功能打基础.方法:通过常规分子克隆方法及基因重组技术获得双表达hArid5a及eGFP的腺病毒载体.通过荧光显微镜观察eGFP的表达来确定病毒包装情况,Western blot检测Arid5a蛋白表达.结果:将hArid5a克隆到腺病毒穿梭载体中,获得pAd5-CMV-hArid5a载体,然后将Pac Ⅰ线性化的pAd5-CMV-hArid5a与Pac Ⅰ线性化的携带报告基因eGFP的病毒骨架通过基因重组,终获得携带有报告基因eGFP及人Arid5a的腺病毒载体Ad5 CMV-hArid5a/eGFP.将纯化获得的腺病毒载体Ad5 CMV-hArid5a/eGFP感染U87细胞后,通过荧光显微镜观察eGFP的表达；通过Western blot检测到感染细胞中hArid5a表达.结论:成功构建了携带报告基因eGFP的hArid5a的腺病毒表达载体,为进一步研究hArid5a的生物功能奠定了基础.
作者：王顺娟；夏海滨 刊期： 2013年第05期
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)在肺鳞癌组织中的表达及意义.方法:采用real-time PCR检测肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)患者癌组织和癌旁正常肺组织(non-tumor adjacent tissues,NAT)中p38MAPK mRNA表达水平；Western blot法检测p38MAPK (p38)和磷酸化p38MAPK(P-p38)蛋白表达水平,免疫组织化学法检测p38和P-p38在肺鳞癌组织中的定位.应用SPSS12.0软件分析与临床病理参数的关系.结果:肺鳞癌组织中p38MAPK mRNA和蛋白表达水平与对照组间均无明显差异(P＞0.05).癌旁正常肺组织中P-p38蛋白表达为(0.14±0.03),肺鳞癌组织中为(0.45±0.04),差异有统计学意义(P ＜0.05)；P-p38蛋白表达与和肺鳞癌的组织分级程度呈正相关,与临床分期呈负相关(P＜0.05).结论:p38MAPK只有经过磷酸化活化后才发挥功能,即P-p38.P-p38可能在肺鳞癌的发生和发展中起到抑制作用,可以作为肺鳞癌的早期诊断和治疗的参考指标.
作者：常蕊静；李佩佩；梁丽峰；南岩东；金发光 刊期： 2013年第05期
目的:报道和总结胃血管球瘤诊疗经验.方法:收集近10年共43例胃血管球瘤(本院2例,文献报道41例),分析及总结该疾病的主要临床表现、辅助检查、病理学诊断以及治疗经过和疗效.结果:胃血管球瘤多为良性肿瘤,常见症状为腹痛.少数患者以消化道出血为首发症状,且多为恶性胃血管球瘤.其形态学特点常表现为片状肿瘤组织,肿瘤细胞多为大小均匀的圆形细胞,胞浆透亮、较少,围绕于毛细血管周围.免疫组化标记:SMA、vimentin、actin均为(+),CD34多为(-),CK、CD117、S-100、CD99、desmin、Syn均为(-).结论:胃血管球瘤是较为罕见的胃肠道肿瘤,是由与平滑肌细胞非常相似的血管球细胞构成的间叶性肿瘤.血管球瘤大多为良性,恶性者罕见.CT和内镜是当前较常用的诊断方法,确诊必须依靠病理学检查和免疫组化检测,目前有效的治疗方法是手术切除.
作者：陶昀璐；王振军；韩加刚；韦萍；蒋镭 刊期： 2013年第05期
目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系.方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养.结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带.DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确.转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系.结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达.为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础.
作者：徐海荣；汪步海；武文娟；戴尔峋；刘丽琴；焦寒凝；张西志 刊期： 2013年第05期
肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的关键,近年来以肿瘤血管生成为靶点的肿瘤血管生成抑制剂成为当前治疗大肠癌的研究热点,中医药在抗肿瘤血管生成方面的作用亦受到广泛的关注.中西医抗肿瘤血管生成已被证实对大肠癌具有可靠的治疗作用.
作者：王倩；许尤琪 刊期： 2013年第05期
目的:研究Notch1在前列腺癌中的表达及临床意义.方法:免疫组化法研究Notch1在前列腺良性增生性病变组织与前列腺癌组织中的表达,分析Notch1表达与肿瘤Gleason评分之间的关系.结果:Notch1在前列腺癌细胞高表达,其表达趋势与前列腺癌的G1eason评分水平呈正相关.结论:Notch1蛋白异常表达可能在前列腺癌的生长、浸润和转移过程中起促进作用,可能成为一种反映前列腺癌生物侵袭性的标志物.
作者：陆向东；苏燕胜；姚念玲 刊期： 2013年第05期
目的:观察榄香烯(elemene,ELE)联合热疗(hyperthermia,HTM)对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞增殖及DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ(TOPOⅠ,TOPOⅡ)表达的影响.方法:采用噻唑蓝还原法(MTT)观察ELE联合HTM对Raji细胞增殖的影响；流式细胞术(FCM)检测细胞周期；RT-PCR法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达；Western Blot法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡ蛋白表达.结果:与单纯HTM和单纯ELE比较,ELE 联合HTM对Raji细胞增殖的抑制作用增强(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性,而ELE联合HTM作用Raji细胞24h、48h和72h后,IC50值(93μ g/ml、68μg/ml和41 μg/ml)小于单纯ELE IC50值(116μg/ml、84μ/ml和60μ g/ml)；ELE联合HTM阻滞Raji细胞于S期[(35.40±1.27)％、(42.38±2.50)％ VS (48.88±1.93)％,P＜0.05],并下调TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA及蛋白的表达.结论:ELE联合HTM可增强对Raji细胞增殖的抑制作用,下调TOPOⅠ、TOPOⅡ表达可能是其机制之一.
作者：韩大跃；张晨；龚敏；崔晓楠 刊期： 2013年第05期
目的:回顾性分析儿童骶尾部畸胎瘤的诊断及治疗经验.方法:49例骶尾部畸胎瘤患儿,男性12例,女性37例.按Altman分类法,Ⅰ型19(38.78％)例,Ⅱ型14(28.57％)例,Ⅲ型11 (22.45％)例,Ⅳ型5(10.20％)例.临床表现主要为骶尾部包块、排便困难等.所有病例均手术切除肿瘤及尾骨,48例经骶尾部手术,l例经腹和骶尾部联合手术,2例病理恶性者术后行BEP方案辅助化疗.结果:43例患儿获得随访,中位随访时间47个月(3-106个月),41例随访的良性畸胎瘤患儿均未出现复发.1例成熟畸胎瘤合并卵黄囊瘤患儿术后化疗6疗程,未复发.1例卵黄囊瘤患儿术后化疗6疗程后复发行二次手术,术后4年死于肝脏及盆腔转移.结论:儿童骶尾部畸胎瘤以良性居多.早期诊断、早期手术预后好,术中完整切除尾骨及避免肿瘤破溃是预防复发及恶变的关键,对于恶性畸胎瘤彻底手术切除辅助术后化疗也可达到较高生存率.
作者：陈子民；卢可士；叶明；王斌；冯奇；叶晓烁；吴宙光 刊期： 2013年第05期
目的:观察博尔宁胶囊治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床疗效.方法:治疗组32例晚期NSCLC患者服用博尔宁胶囊与对照组28例晚期NSCLC患者支持对症治疗进行对比研究.结果:肿瘤客观疗效:治疗组近期稳定率为59.4％,对照组为35.7％；生活质量:两组治疗前后Karnofsky评分变化比较,治疗组好转率为53.1％,对照组好转率为35.7％；疼痛情况:治疗前治疗组有26例合并癌痛症状,对照组有22例合并癌痛症状,治疗后治疗组癌痛控制有效率为80.8％,对照组为59.1％.结论:博尔宁胶囊能明显提高肿瘤稳定率和好转率,减轻癌痛症状.
作者：杨静；杨乐；张王刚 刊期： 2013年第05期
目的:探讨结直肠癌组织中乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene1,BRCA1) mRNA表达水平与接受标准方案化疗的患者临床病理的关系及预后意义.方法:采用荧光定量PCR方法检测福尔马林固定-石蜡包埋的结直肠癌组织中BRCA1 mRNA的表达水平,并分析其表达水平与接受标准方案化疗的患者的临床病理及生存期之间的关系.结果:BRCA1 mRNA表达水平与患者淋巴结转移(P=0.008)、脉管侵犯(P=0.013)统计学意义有相关性,与其余肿瘤病理特征无相关性.BRCA1 mRNA中高表达组患者经标准方案化疗后平均总生存期为69.56个月,低表达组平均总生存期为55.67个月,两组间总生存期的差异(P=0.039)具有统计学意义,无进展生存期差别(P=0.93)没有统计学意义.性别(P =0.023)、分期(P＜0.001)、以肠梗阻或肠穿孔起病(P=0.046)是患者总生存期的独立影响因素；年龄(P =0.043)、分期(P＜0.001)、脉管侵犯(P=0.002)是患者无进展生存期的独立影响因素.结论:BRCA1 mRNA的表达水平可能是使用标准方案化疗的结直肠癌患者预后的影响因素.性别、分期、以肠梗阻或肠穿孔起病、年龄、脉管侵犯可能是影响结直肠癌患者预后的独立预测因素.
作者：张一帆；禹立霞；张广亮；沈洁；胡静；王立峰；杨阳；钱晓萍；刘宝瑞 刊期： 2013年第05期
目的:比较配对的原发肺癌灶和转移淋巴结EGFR、KRAS和MET基因状态,探讨NSCLC原发灶和转移淋巴结基因变化规律并指导临床实践.方法:22例手术切除的Ⅲa期非小细胞肺癌,术前未经靶向和化学治疗,获取配对的原发灶和N2站转移淋巴结.采用直接测序法检测EGFR外显子19-21,KRAS密码子12和13突变,实时定量PCR检测MET基因拷贝数.结果:原发灶和N2转移淋巴结中EGFR基因突变率分别为7/22例(31.82％)和6/22例(27.27％),EGFR基因型一致率达95.45％.KRAS基因突变率分别为2/22例(9.09％)和1/22例(4.55％).转移淋巴结MET基因拷贝数(1.54±0.71)显著高于原发灶(1.19±0.41),P=0.038.EGFR 19和21基因突变与原发灶(P=0.24)、转移灶(P=0.97)的MET基因拷贝数以及原发灶和转移灶MET基因拷贝数变化(P=0.69)之间都无相关性,P＞0.05.不同的EGFR基因状态和MET基因拷贝数其1年无病生存无显著差异(P＞0.05).结论:肺癌原发灶和相应转移淋巴结中EGFR基因突变较稳定；EGFR敏感基因突变与MET基因拷贝数可能无关；而未经EGFR-TKI治疗的肺癌患者其MET基因拷贝数在淋巴结转移时即已开始出现明显增高.
作者：马洁韬；韩琤波；荆薇；赵健竹；周洋；黄乐天；李耀勇；白冬梅；邹华伟 刊期： 2013年第05期
目的:探究AnnexinA1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响.方法:构建干扰AnnexinA1的慢病毒载体,转染至SBC-5细胞株；体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调AnnexinA1表达对小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响.结果:干扰AnnexinA1的细胞株ANXA1 RNAi-SBC-5构建成功.与转染空载体的对照细胞相比,抑制AnnexinA1的表达能够显著抑制SBC-5细胞的增殖、迁移、侵袭能力.结论:AnnexinA1表达可能与肺癌骨转移密切相关.
作者：周菁；张峰；庞海林；马丽；刘佳钰；刘理礼；张贺龙 刊期： 2013年第05期
目的:探讨转基因MSC能否归巢至放射损伤的胸腺及可能的机制.方法:雌性BALB/C小鼠120只,随机分为四组:照射组30只,胸腺单次照射9Gy；对照组30只,仅予以假照射；照射+MSC组30只,胸腺单次照射9Gy后2h输注转基因MSC,输注MSC的量为0.5×106/只；对照+MSC组30只,假照射后2h输注转基因的MSC,输注的量与照射+MSC组相同.照射后1、7、14、21、28、35天处死小鼠留取胸腺左叶,快速冰冻切片,在荧光显微镜下观察荧光表达.并于照后14、28天检测胸腺Sry的表达情况.结果:照射+MSC组小鼠胸腺照射后出现荧光表达,第7天达高峰,第35天消失；其余三组小鼠胸腺均无荧光表达.照射+ MSC组小鼠胸腺Sry在照后14及28天均为阳性,其余三组为阴性.结论:转基因MSC能归巢至放射损伤的胸腺,其机制与损伤组织产生的因子有关.
作者：宁昌；陈文伟；胡锴勋；余长林 刊期： 2013年第05期
现代肿瘤医学杂志
主管:陕西省科学技术协会
主办：中国抗癌协会 陕西省抗癌协会 陕西省肿瘤防治研究所 陕西省医学会
