学术投稿

HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及鉴定与表达

马臻;陈国民

关键词:HBVX基因, HCVC基因, 融合基因, 重叠区扩增基因拼接法, 腺病毒
摘要:目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒.方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,经PmeⅠ酶切线性化后电转化BJ/AdEasy菌,构建重组腺病毒质粒pAd-XC;鉴定正确的pAd-XC经Pac Ⅰ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,扩增,利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率,Western-blot法检测目的蛋白的表达.结果:测序结果显示,pAdTrack-CMV-XC构建成功;PCR及PacⅠ酶切鉴定结果表明pAd-XC构建成功;经Pac Ⅰ酶切线性化的pAd-XC转染293细胞后24 h即可观察到GFP的表达;回收的病毒可重复感染293细胞,Western-blot法检测到目的蛋白的表达,证实有感染能力且可表达目的蛋白的病毒颗粒包装成功.结论:HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒构建成功,为进一步研究HBV X蛋白和HCV C蛋白的生物学功能奠定了基础.
内蒙古医学杂志相关文献
  • 院前形成压疮的护理新体会

    目的:探讨利用湿润烫伤膏和康复新液在无菌密闭湿润环境治疗压疮的效果.方法:对压疮患者进行评估、清创、换药、防止继续受压,观察愈合效果.结果:24例43处Ⅱ~Ⅳ度压疮平均18.4 d全部愈合.结论:湿润烫伤膏和康复新液在湿润环境可以有效促进压疮的愈合.

    作者:刘晓兰;王玉花 刊期: 2007年第09期

  • 化学发光免疫分析法检测血清C肽、胰岛素及其临床评价

    目的:引进化学发光免疫分析技术,应用于糖尿病的临床诊断和治疗检测.方法:采用直接化学发光免疫分析技术,对年龄在18~60岁之间的Ⅱ型糖尿病患者295例和非糖尿病患者110例测定血清基础C肽(C-P)、胰岛素(Insulin)水平.结果:糖尿病组与健康组基础C-P水平分别为1.26±0.89和11.53±0.54,P<0.01,有统计学意义,认为两组结果间有显著性差异;基础Insulin水平分别为10.69±5.81和15.65±6.55,P<0.01,有统计学意义,认为两组结果间亦存在显著性差异.结论:化学发光免疫分析法检测血清C肽、胰岛素,操作简便、敏感度高、特异性强、重复性好、无放射污染,在糖尿病领域临床检验中有较大的应用价值.

    作者:才建华;莫殿军 刊期: 2007年第09期

  • 异丙酚联合利多卡因用于人工流产中的临床观察

    为使早孕要求人工流产的妇女在不紧张、无痛苦的情况下进行手术,我院自1999年1月~2000年3月,采用静脉异丙酚联合利多卡因局部喷淋麻醉及单用异丙酚静脉麻醉实施无痛人工流产术,均取得了良好的效果.现将结果报道如下.

    作者:王琴;付淑珍 刊期: 2007年第09期

  • HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及鉴定与表达

    目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒.方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,经PmeⅠ酶切线性化后电转化BJ/AdEasy菌,构建重组腺病毒质粒pAd-XC;鉴定正确的pAd-XC经Pac Ⅰ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,扩增,利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率,Western-blot法检测目的蛋白的表达.结果:测序结果显示,pAdTrack-CMV-XC构建成功;PCR及PacⅠ酶切鉴定结果表明pAd-XC构建成功;经Pac Ⅰ酶切线性化的pAd-XC转染293细胞后24 h即可观察到GFP的表达;回收的病毒可重复感染293细胞,Western-blot法检测到目的蛋白的表达,证实有感染能力且可表达目的蛋白的病毒颗粒包装成功.结论:HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒构建成功,为进一步研究HBV X蛋白和HCV C蛋白的生物学功能奠定了基础.

    作者:马臻;陈国民 刊期: 2007年第09期

  • 国产吉西他滨联合顺铂治疗28例非小细胞肺癌临床观察

    目的:观察国产吉西他滨(CEM,泽菲)联合顺铂(PDD)治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效.方法:28例NSCLC患者采用GP方案:GEM1 250 mg/m2,第1、8d静脉滴注,PDD 30 mg/m2,第1~3 d静脉滴注,21d为1个周期,全组病例均接受2个周期治疗.结果:28例中PR46.43%(13/28),SD32.14%(9/28),PD21.43%(6/28).结论:泽菲联合顺铂对晚期非小细胞肺癌有较好的疗效,且毒副反应可耐受,值得进一步研究.

    作者:李海峰;王军 刊期: 2007年第09期

  • 自体外周血造血干细胞移植治疗急性淋巴细胞白血病一例

    患者,女性,15岁,主因发热、乏力1周于2004年8月24日入院.患者入院前1周无明显诱因出现发热,体温高达38.5℃,活动后心悸、气短,予病毒唑、青霉素等药物治疗后无效,救治于我院门诊,查血常规:WBC 87.6×109/L,Hb 65 g/L,PLT 46×109/L.

    作者:贾国荣;贺其图;李志芹;马宏杰;李静;李哲;卢燕;云雁 刊期: 2007年第09期

  • 情绪对充血性心力衰竭患者预后的影响

    目的:研究抑郁对充血性心力衰竭病人(CHF)预后的影响.方法:共入选126例CHF病人,用焦虑和抑郁量表(HADS-D)来评价病人的抑郁,平均随访23.8个月.结果:存活者100例,死亡26例.死亡患者与存活患者相比,有较高的NYHA分级(P<0.01),较低的LVEF、VO2max(P均<0.05).死亡患者的抑郁得分明显高(P=0.03),焦虑得分也较高,但无统计学意义.抑郁得分随着心功能分级升高而升高,多因素回归分析也发现LVEF、VO2max和抑郁得分是CHF患者的独立的预测因子(P<0.05).在抑郁得分>6的患者中,随着存活时间的延长,抑郁使CHF的病死危险明显增加.结论:抑郁得分可独立预测CHF患者的死亡危险.

    作者:韩飞玲;杨武霞;高彦平 刊期: 2007年第09期

  • 三平面组织追踪技术评价PTCA支架置入后局域心肌功能改变的研究

    目的:探讨三平面组织追踪技术(Triplane-TTI)评价冠心病患者PTCA支架置入前后局部心肌运动的临床应用价值.方法:采用三平面组织同步显像技术,同步实时获取左室心尖四腔观、心尖两腔观及五腔各三个完整心动周期动态图;应用Q Analysis功能对左室局域心肌的位移曲线进行分析、比较.结果:正常心肌位移曲线呈现规律性变化;梗塞节段位移曲线收缩期峰值明显减低(P≤0.05);支架置入后梗塞节段心肌位移曲线收缩期峰值与放置前相比明显增高,曲线恢复抛物线形.结论:TTI是一种无创性的早期预测诊断冠心病及评价冠脉内支架置入术后心肌再灌注疗效的有效方法.

    作者:刘国辉;王金锐;徐霞;杨敬英;王淑敏;王建华;李汇文;丰乃奇;孙雪芳 刊期: 2007年第09期

  • 乙型肝炎的心理分析及护理

    目的:通过护士良好的语言,和蔼、热忱、稳重的态度,采用不同的询问、暗示、安慰、劝导等方式,尽可能为病人创造有利于治疗和康复的佳身心状态.方法:采用对60例乙肝病人的调查和心理分析.结果:存在心理问题的根本原因有焦虑、失眠、恐惧、绝望.结论:我们进行了有针对性的心理护理和疾病健康教育,使病人从生理和心理方面得到了很好的治疗效果,从而减少危险行为的发生.

    作者:张建荣;尹国峰;刘淑琰 刊期: 2007年第09期

  • TURP结合TUVP治疗高危重度BPH 36例

    目的:探讨经尿道前列腺电汽化术(transurethral electrovaporization of the prostate,TUVP)联合经尿道前列腺电切术(transurethral resection of the prostate,TURP)治疗高危重度良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)的效果.方法:TUVP联合TURP治疗36例BPH.根据sohlege手术危险分类:Ⅱ级26例,Ⅲ级10例.所有患者国际症状评分(IPSS)为26±3,大尿流率为(3.2±2.4)ml/s,残余尿量100~380 ml.结果:手术时间40~60 min,平均50 min.5例术后输血200 ml,1例先兆前列腺电切综合征发生,平均留置尿管6 d.36例随访6~24个月,平均10个月,IPSS由术前平均26±3下降至术后平均(8±3),大尿流率由术前平均(3.2±2.4)ml/s升至术后平均(13±2.6)ml/s.术后暂时性尿失禁3例.结论:联合应用TUVP及TURP治疗高危重度BPH疗效满意.

    作者:刘山;顾骧;沈烨;王铁汉;朱国飞;冷玉忠;凌中立;陈世永 刊期: 2007年第09期

  • 前列腺癌的早期诊断

    前列腺癌是一种老年男性的常见恶性肿瘤,目前在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌,成为第一位危害男性健康的肿瘤.亚洲前列腺癌的发病率远远低于欧美国家,但近年来呈现上升趋势.

    作者:袁亚光 刊期: 2007年第09期

  • 趋化素样因子研究进展

    近,我国学者应用抑制性减数杂交技术(SSH,Suppressive subtraction hybrization)首次成功的克隆到一个新的细胞因子,因其含有趋化因子的基本结构特征和趋化功能,同时又具有趋化因子没有的功能,被命名为趋化素样因子1(CKLF1),并发现其至少存在3种异构体.分别命名为CKLF2、3、4.CKLF基因为于16号染色体q22上,有4个外显子和3个内含子组成.CKLF1、3为分泌性蛋白,而CKLF2、4主要以膜结合形式存在.研究表明,CKLF1具有广谱的趋化活性、骨髓细胞增殖刺激活性和抑制软骨细胞增殖作用.CKLF2能促进细胞增殖和分化,并有抑制细胞凋亡作用.提示CKLF在机体的生理和病理作用中有重要意义,CKLFs的成功克隆表明CKLFs可能代表一个新的基因超家族,对这个超家族的深入研究将具有重要的理论意义和潜在的应用价值.

    作者:任鸿坤 刊期: 2007年第09期

  • PTEN与子宫内膜癌

    子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一,但其发病机制仍不十分清楚,PTEN是一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种肿瘤中均有突变,在子宫内膜癌中突变率高.本文就PTEN与子宫内膜癌的关系加以综述.

    作者:张海燕;宋静慧;柴雅琴;杨军 刊期: 2007年第09期

  • 脑囊虫病200例临床分析

    目的:了解脑囊虫病的常见临床表现及酶联免疫吸附试验,CT、MRI检查结果对临床确诊、疗效判断的作用.方法:对11年来诊断为脑囊虫病的临床资料及囊虫酶标试验,CT及MRI检查结果的特点进行回顾性总结.结果:脑囊虫病具有复杂多样的临床表现.其中占前10位的分别为抽搐48.5%,其中呈典型癫痫大发作为30.5%,头痛44.5%,乏力30.5%,头昏18.5%,呕吐17.5%,恶心16.5%,视力减弱6.5%,皮下结节6.5%,肢体麻木6.5%;囊虫酶标试验检查阳性率为95%,CT及MRI检查发现活虫病灶均能在平扫或增强后表现为特征性的单房囊性结构.结论:其临床表现、脑囊虫的酶联免疫吸附试验(ELISA)、CT、MRI对于脑囊虫病的确诊与治疗具有重要意义.

    作者:秦晓云 刊期: 2007年第09期

  • 烟雾病所致脑卒中6例临床分析

    近年来随着医学影像学的发展,脑血管异常所致脑卒中的病例报道越来越多.本文6例患者均为烟雾病所致脑卒中,就其临床表现、影像学检查、诊断及鉴别诊断进行分析讨论.

    作者:刘素蕊 刊期: 2007年第09期

  • 手外伤血管吻合术后患者的观察与护理

    目的:探讨手外伤血管吻合术后患者的观察与护理,总结观察与护理经验、理论,以便更好地做好护理工作,促进患者顺利康复.方法:应用手外伤血管吻合术后18例患者观察与护理,术后应及时补充血容量,纠正贫血.严密观察局部情况,手部皮肤颜色、温度、毛细血管回流反应,有无肿胀等,精心护理.结果:18例患者全部愈合.结论:手外伤血管吻合术患者在手术成功的基础上,经术前、术中及术后严密观察护理,可获良好治疗效果.

    作者:韩玉兰 刊期: 2007年第09期

  • 经直肠彩色多普勒血流动力学对前列腺癌的诊断价值

    前列腺癌的经直肠彩色多普勒血流动力学研究,经直肠彩色多普勒可清晰显示肿瘤内细小的血流信号,通过彩色多普勒对前列腺癌(PCa)的血流分布,分化程度,血流动力学参数表现的分析及彩色多普勒能量图(CDE),彩色直方图软件在前列腺癌中的应用,表明其在前列腺癌的检出中具有很重要的临床应用价值.

    作者:王婧;姚志清 刊期: 2007年第09期

  • 肾错构瘤的诊断与治疗

    目的:提高肾错构瘤(renal angiomyolipoma,RAML)的诊治水平.方法:对我院1989~2006年以来收治的21例肾错构瘤的临床资料进行回顾性分析,并复习相关文献.结果:B超检查20例,CT检查17例,MRI检查3例,21例中20例术前明确诊断;16例患者行手术治疗,8例行肿瘤剜除术,4例行肾部分切除术,4例行肾切除术,术后患者恢复良好,未见肿瘤复发.5例行保守治疗.结论:肾错构瘤经B超、CT、MRI等检查多可明确诊断.治疗方案应依据肿瘤大小、并发症及对肾功能的影响程度来决定,手术应尽可能保留正常肾组织.

    作者:MA Ke-wei;马可为;云志中;刘俊峰;刘德斌 刊期: 2007年第09期

  • 肝脏胰岛素致敏物质HISS释放的药物动力分析

    目的:检测一种肝脏胰岛素致敏物质(HISS)反应于胰岛素而释放的药物动力.方法:用快速的胰岛素敏感性试验方法(RIST)比较输入阿托品前、后的RIST指标.其指标由胰岛素输入后为维持正常血糖水平所灌注的葡萄糖量所表示.结果:对照的RIST指标是(223.5±13.4)mg/kg,阿托品后的RIST指标是(71.4±14.7)mg/kg,大抑制为(66.4±6)%,二者间的葡萄糖输入比率的差异表明:开始于4 min,在头10 min迅速上升,19 min达高峰后迅速下降,34 min左右达基础水平.结论:HISS是一种由胰岛素激活肝脏副交感神经反射释放的激素.在胰岛素输入约4 min后HISS的活性开始,并且其活性时间长于胰岛素活性时间.

    作者:娜荣;乌恩 刊期: 2007年第09期

  • 急性胆源性胰腺炎内镜治疗的个体化应用临床探讨

    目的:探讨内镜治疗急性胆源性胰腺炎(ABP)的个体化治疗原则.方法:选择2000年1月~2007年3月收治的55例急性胆源性胰腺炎患者,根据个体化原则,其中34例实施内镜治疗(24例)和腹腔镜(10例)(研究组),内镜治疗组行逆行胰胆管造影(ERCP)、十二指肠乳头切开术(EST)和(或)鼻胆管引流术(ENBD),腹腔镜组行置管引流术、胆囊切除、胆总管切开取石T管引流.与同期保守治疗或外科手术治疗(对照组)21例比较.结果:全组死亡1例,研究组与对照组比较血淀粉酶恢复时间,白细胞恢复正常时间和住院时间短,并发症发生少.结论:内镜下个体化治疗原则治疗急性胆源性胰腺炎安全有效.

    作者:史学森;王丽娟;吕瑾姝;张永立;马春玉;王莲花;李晓兰;郝慧菁 刊期: 2007年第09期

内蒙古医学杂志

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主办:内蒙古自治区医学会