汤美；陈建平；陈卫昌；李锐
手术切除气管成人若超过全长50％(即超过6 cm)、儿童超过全长30％时,端端吻合困难,须植入气管替代物才能重建气道[1].由于供应气管的血管纤细且呈节段性分布,使得气管无法通过显微外科技术直接进行血管吻合.气管移植亦多因血供问题而终导致失败,严重制约了气管外科的发展[2].干细胞定位到靶组织后,在体内微环境的特异信号作用下,能定向分化成组织所需的细胞类型[3];或者通过模拟体内环境,在体外实现干细胞的定向诱导分化,这为干细胞治疗疾病提供了理论基础[4].骨髓单个核细胞(BM-MNCs)包括造血干细胞、间充质干细胞(MSCs)、内皮祖细胞(EPCs)、中胚层来源细胞等多种分化潜能的细胞群,且具有容易采集、操作简单和低免疫排斥反应等优点,因而目前干细胞临床应用较多的仍以自体骨髓和外周血单个核细胞为主[3-4].
作者：潘枢；孙飞；史宏灿 刊期： 2014年第03期
目的 观察微小RNA(miR)-29a对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 以磷酸盐缓冲液(PBS)为空白对照,以负载cel-miR67的复制缺陷型腺病毒(Ad-cel)为阴性对照,注射负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒(Ad-miR29a)液于移植瘤内,观察移植瘤生长曲线和抑瘤率;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测移植瘤内miR-29a表达丰度;采用免疫组织化学技术检测CD34表达以计算移植瘤内微血管密度(MVD).结果 与PBS组比较,Ad-miR29a组移植瘤内miR-29a表达显著上调(3.06±0.73比1.00±0.21,P＜0.01),而Ad-cel组与PBS组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Ad-miR29a组移植瘤生长速度低于PBS组,而Ad-cel组与PBS组差异无统计学意义(P＞0.05);于第5周末Ad-miR29a组抑瘤率达49.30％;Ad-miR29a组的移植瘤内MVD显著低于PBS组(21.3±8.1比42.6±11.2,P＜0.01),而Ad-cel组与PBS组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-29a可显著抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,其机制可能为抑制移植瘤内MVD,miR-29a有望成为新型的胃癌基因治疗靶标.
作者：陈陵；王宗华；宋航；黄一；王国威；王仙园；任辉 刊期： 2014年第03期
X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是新鉴定的肿瘤抑制基因,在许多肿瘤组织和肿瘤细胞株中低表达甚至不表达[1].我们以重组腺病毒为载体,探讨过表达XAF1基因对人肺腺癌细胞A549的增殖和诱导细胞凋亡的作用及机制.
作者：张福全；段善州；黄秉韬；杨文涛；施立；桑永华；朱蓉英；陈勇兵 刊期： 2014年第03期
目的 构建乏氧/辐射双敏感启动子(HRE/Egrl)介导Smac的表达载体,观察其在人肺腺癌A549细胞中常氧和乏氧条件下的表达特点和在乏氧条件下的增殖抑制作用.方法 成功构建表达质粒pcDNA3.l-Egrl-Smac和pcDNA3.1-HRE/Egrl-Smac后转染A549细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测Smac mRNA和蛋白表达;应用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞的增殖变化.结果 常氧条件下,与对照组比较,2 Gy照射和转染质粒后进行2 Gy照射能显著增加A549细胞中Smac mRNA表达(P＜0.05),且乏氧能显著增加这种效应(P＜0.05);同时,Smac蛋白表达规律与mRNA表达规律相似.常氧和乏氧条件下,2 Gy照射和转染质粒后进行2 Gy照射细胞均较相同时间点对照组细胞增殖水平显著降低(P＜0.05);而且乏氧各组较常氧各组细胞增殖水平显著降低(P＜0.05).结论 乏氧和辐射均能诱导A549细胞中Smac表达增加,且联合2 Gy照射能显著抑制乏氧条件下A549细胞的增殖能力.
作者：李长锋；金景鹏；刘大海；张斌 刊期： 2014年第03期
目的 观察超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心房组织中的表达,探讨伴发心房颤动的发生机制.方法 收集43例风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者(AF组),对照组为窦性心律患者(SR组),采用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、Western blot法和免疫组织化学法,检测风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织中HCN2 mRNA及蛋白的表达.结果 FQ-PCR结果显示AF组和SR组HCN2 mRNA表达量分别为0.70±0.14和0.39±0.08;而Western blot结果显示AF组和SR组HCN2蛋白表达量分别为0.52±0.19和0.21 ±0.12,AF组均明显高于SR组(P＜0.01);免疫组织化学结果显示AF组右心耳心肌细胞溶解、肥厚并广泛间质纤维化,且HCN2蛋白表达量明显高于SR组(P＜0.01).结论 HCN2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中表达明显上调,并参与其心房颤动的发生发展过程.
作者：刘文洲；周华富；孙宇；王俊龙；赵春鹤；冯旭 刊期： 2014年第03期
目的 探讨ErbB-2转录因子1 (TOB1)对人类肺癌A549细胞放射敏感性的影响并探讨其机制.方法 通过脂质体介导的重组质粒转染及G418筛选,建立TOB1高表达的肺癌A549细胞稳定转染株;采用克隆形成实验检测TOB1对A549细胞放射敏感性的影响;采用单细胞凝胶电泳实验检测TOB1对电离辐射引起的DNA损伤修复的影响;同时采用Western blot实验检测TOB1对DNA损伤修复相关蛋白表达的调控作用.结果 通过重组质粒转染及G418筛选,成功建立TOB1的肺癌A549细胞稳定转染株;克隆形成实验证实外源性TOB1高表达显著增加肺癌A549细胞的放射敏感性,采用单击多靶模型拟合细胞存活曲线,细胞的放射增敏比(SER)为1.63;单细胞凝胶电泳实验证实接受6Gy的X线照射后,A549/TOB1细胞的尾矩分别为(25.71±4.32)％,明显高于A549细胞[(14.26±1.21)％,P＜0.05].Western blot实验证实与A549母细胞比较,X线照射后A549/TOB1细胞中共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)、Ku70、Ku80、DNA双链断裂修复基因X线修复交叉互补4(XRCC4)蛋白的表达水平明显降低.结论 TOB1高表达增加肺癌A549细胞的放射敏感性,其机制可能与TOB1抑制DNA损伤修复相关蛋白的表达,从而抑制DNA损伤的修复有关.
作者：孙克康；吴晓阳；陈文；李星；仲宁 刊期： 2014年第03期
目的 分离培养前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)及正常成纤维细胞(NPF),探讨两者生物学差异.方法 用Percoll技术分离培养CAF及NPF细胞,用免疫荧光法检测上皮细胞标志物(Pan-CK),成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和平滑肌细胞标志物平滑肌肌动蛋白(SMA);用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长能力;用软琼脂糖实验检测两种细胞诱导良性细胞BPH-1恶变.结果 CAF与NPF细胞形态相似,均高表达Vimentin,不表达Pan-CK,CAF细胞高表达SMA.CAF细胞生长速度快于NPF细胞,第4天吸光度值分别为0.98 ±0.07、0.74±0.04,P＜0.05;第6天吸光度值分别为2.06±0.13、1.59±0.14(P ＜0.05),且能诱导BPH-1恶性变.结论 CAF细胞高表达SMA,增殖能力强,能促进前列腺良性细胞恶性变.
作者：于胜强；王科；杨典东；王健涛；李光磊；高振利 刊期： 2014年第03期
肿瘤组织中巨噬细胞的浸润与肿瘤患者的不良预后相关[1].我们通过巨噬细胞与微囊化胃癌细胞共培养,观察其对微囊化胃癌细胞表型的影响.一、材料与方法1.材料:人胃癌细胞株SGC-7901购自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库.链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组织化学检测试剂盒(北京中衫金桥公司),明胶酶谱试剂盒(Invitrogen公司).
作者：冀学宁；范学军；全秀莲；吴忠；王若雨；王为；马小军 刊期： 2014年第03期
目的 探讨大鼠胃空肠Roux-en-Y吻合术后早期胃液体排空功能的变化及胃空肠吻合口Cajal间质细胞(ICC)的再生.方法 20只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组行幽门切除+胃空肠Roux-en-Y吻合术,对照组行幽门切断再吻合术.术后4周进行以下实验:放射性核素显像法评估胃液体排空功能;扫描电镜观察胃空肠吻合口ICC再生.结果 术后4周实验组大鼠胃液体半排空时间(t1/2)为(23.5 ±4.5) min,对照组为(10.2±2.3)min,实验组胃液体排空延迟(P＜0.01);胃空肠吻合口ICC可以再生.结论 大鼠幽门切除+胃空肠Roux-en-Y吻合术后早期胃液体排空延迟,而胃空肠吻合口ICC再生可能是其重要原因之一.
作者：孙井军；尤承忠；汤文浩 刊期： 2014年第03期
目的 探索安全有效、简单易行的后腹腔镜下肾脏低温保护技术.方法 拟行后腹腔镜下保留肾单位手术患者22例,分为研究组和对照组.研究组在后腹腔镜肾脏低温下行保留肾单位手术;对照组行常规后腹腔镜下保留肾单位手术.比较两组患者肾脏温度和直肠温度变化以及手术前后肾功能变化.结果 22例患者手术顺利;术后无继发出血、感染及漏尿.研究组冷缺血时间为(47.2±3.8)min,平均低肾脏温度为(17.73±0.91)℃.研究组术前ECT示患肾肾小球滤过率(GFR)为(30.57±4.07) ml/min,术后1个月患肾GFR为(20.92 ± 4.49) ml/min.对照组术前ECT示患肾GFR为(30.65±5.45) ml/min,术后1个月患肾GFR(17.90±3.50) ml/min.患者术后随访1 ～16个月,未见局部复发、无转移.结论 后腹腔镜下肾脏低温保护技术简单易行、效果确切.
作者：方烈奎；杨江根；黄建生；张秩庠；黄向江；熊星；姜敏；肖克峰 刊期： 2014年第03期
目的 观察人胃癌组织中分离培养的间充质干细胞(hGC-MSCs)对胃癌细胞株SGC-7901增殖与侵袭能力的影响.方法 提取hGC-MSCs条件培养液(MSC-CM),用不同浓度(20％、40％、60％)的MSC-CM作用于SGC-7901细胞,噻唑蓝(MTT)法及Transwell侵袭实验检测各组细胞增殖与侵袭能力;实时聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot和细胞免疫化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-9在各组细胞中的表达.结果 MTT法证实MSC-CM对SGC-7901细胞增殖有抑制作用(P＜0.05),抑制率与MSC-CM的浓度和作用时间呈正比.Transwell侵袭实验表明,经MSC-CM处理后,对照组及20％、40％、60％ MSC-CM组穿膜细胞数分别为(75.71±7.32)、(63.68 ±7.12)、(54.29 ±6.97)和(41.36±3.29)个,随MSC-CM浓度升高,细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05).Real-time PCR结果证实MSC-CM能明显下调PCNA和MMP-9的表达(P＜0.01).Western blot检测20％、40％、60％ MSC-CM组PCNA表达分别为对照组的(73.99 ±16.71)％、(51.56±12.18)％和(40.11±9.37)％,MMP-9表达分别为对照组的(74.35±19.12)％、(53.59 ±10.41)％和(29.58±7.93)％,细胞免疫化学结果显示PCNA在对照组、20％、40％、60％ MSC-CM组中的平均吸光度值分别为0.201 ±0.049、0.185 ±0.031、0.154±0.019和0.128 ±0.012,MMP-9在4组中的平均吸光度值分别为0.182±0.032、0.164±0.028、0.136±0.017和0.098±0.008,各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HGC-MSCs能抑制SGC-7901细胞的增殖及侵袭能力,其机制可能与下调PCNA和MMP-9的表达有关.
作者：王凯；李玉明；张明凯；姜吉祥；苏庆亮 刊期： 2014年第03期
目的 探讨曲美他嗪(TMZ)抗大鼠心肌缺血再灌注损伤中炎性反应的作用及其机制.方法 雄性健康成年SD大鼠24只,体质量为180～220 g.采用随机区组设计将大鼠随机分为对照组(A组)和TMZ组(B组),B组于实验前6d,每日给予生理盐水稀释的TMZ 10 mg/kg灌胃,各组均采用冠状动脉结扎法制作缺血再灌注损伤(IRI)模型,缺血30 min,再灌注90 min.分别于缺血前、再灌注30、60、90 min后,取大鼠静脉血2ml,测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,实验结束后处死大鼠,再灌注区取组织,免疫组织化学检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达.结果 对照组缺血前、再灌注后30、60、90 min血清TNF-α含量分别为(0.18 ±0.10)、(1.15 ±0.29)、(0.98±0.27)、(0.52±0.23) μg/L,TMZ组TNF-α含量在再灌注各测试时点[(0.16±0.12)、(0.87±0.22)、(0.73±0.32)、(0.38 ±0.17) μg/L]均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);TMZ组与对照组比较,可显著降低心肌组织内VCAM-1(4.571 2±1.121 3比6.203 5±1.451 3)的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TMZ可通过限制再灌注损伤中炎性反应保护大鼠缺血再灌注损伤心肌.
作者：文冰；韩辉；焦周阳；刘超；夏冰；赵文增 刊期： 2014年第03期
我们利用电子颅脑损伤仪(eCCI)制备创伤性颅脑损伤(TBI)动物模型的具体方法并对其进行评价,现报道如下.一、制作方法1.动物及分组:西安交通大学实验动物中心提供(批号:20121023)雌性SD大鼠65只,体质量为220 ～240 g,适应性饲养3d后,随机分为正常对照组(A组)、模型1组(B组)、模型2组(C组)、模型3组(D组)和假手术组(E组).
作者：王瑞辉；郭新荣；吴涛；屈红艳 刊期： 2014年第03期
目的 观察自噬在乙醇诱导胃黏膜上皮GES-1细胞凋亡中的作用.方法 体外使用100～1 600 mmol/L浓度乙醇诱导胃黏膜上皮GES-1细胞发生凋亡,并分为4组:空白对照组、乙醇组、乙醇+雷帕霉素(RAPA)组和乙醇+氯喹(CQ)组.流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖程度,免疫荧光显微镜观察自噬小体,Western blot检测各组中微管相关蛋白1轻链32β(LC3)的表达水平.结果 细胞凋亡随着乙醇浓度增加而升高,自噬能有效降低这种凋亡.乙醇组细胞凋亡率[(17.78±7.86)％]明显高于空白对照组[(12.64±6.82)％]和乙醇+RAPA组[(14.88±7.12)％],同时又显著低于乙醇+CQ组[(21.44±8.69)％,P＜0.05].在乙醇干预下,诱导细胞自噬可以增加细胞的相对增殖活性.结论 乙醇可以诱导胃黏膜上皮GES-1细胞凋亡.促进细胞自噬可以有效降低乙醇诱导的细胞凋亡,抑制自噬可以有效增高乙醇诱导的细胞凋亡.
作者：常伟龙；帅晓明；张鹏；马牧原；李伟；尹玉平；陶凯雄 刊期： 2014年第03期
CXC趋化因子配体14(CXCL14)作为趋化因子CXC子家族的一员,普遍存在于人体正常组织,有提供维持机体稳态的作用,但在各类实体肿瘤中表达高低不一[1-2].本研究旨在观察CXCL14在胃癌中的表达,并探讨其机制.一、材料与方法1.材料:Trizol试剂(Invitrogen公司);逆转录酶、SYBR Green试剂(Toyobo 公司);CXCL14多克隆抗体(Abcam公司);二步法免疫组织化学检测试剂、二氨基联苯胺(DAB)试剂(北京中杉金桥公司);DNA Methylation-Gold试剂盒(ZYMO公司);引物、测序(上海生工公司).
作者：胡畅远；沈贤；薛向阳；庞文洋；陈文静；张丽芳；朱冠保 刊期： 2014年第03期
目的 观察手术对肠道上皮细胞胰岛素信号通路的影响.方法 制作阻塞性黄疸大鼠模型,分别于手术前及手术后1、3、24h采血,计算胰岛素抵抗(IR)指数,免疫组织化学检测小肠上皮细胞胰岛素受体表达,Western blot检测肠上皮细胞胰岛素受体底物(IRS)-1、-2及蛋白激酶B(PKB)的表达.结果 手术组的IR指数在术后各时间点分别为3.40±0.12、4.29±0.11、5.34±0.18,其中24h值明显高于对照组和假手术组(P＜0.05).手术组的胰岛素受体强阳性表达数分别为3/10、2/10、2/10,其中术后24h较其他时间点下降明显(P＜0.05).手术组术后24h的胰岛素受体底物IRS-1相对表达量为0.42±0.04,较其他组下降明显(P＜0.05),而各组的IRS-2变化不明显.PKB的相对灰度值(0.52±0.10)在手术组中也明显下降(P＜0.05).结论 手术应激后IR的发生与肠上皮细胞的胰岛素受体表达降低及受体底物下降有关.PKB是术后IR信号途径中的重要一环.
作者：陈洪流；谭庆丰；陈振勇 刊期： 2014年第03期
目的 制备一种新型的人工软骨材料并对其进行表征及性能评价.方法 将聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA)与0.5％二氧化硅(SiO2)及1％～5％羟基磷灰石(HA)复合制备成复合材料,用红外光谱仪和扫描电镜表征了材料的结构,测试材料的吸水性及牛血清白蛋白在材料表面的吸附性.结果 SiO2与HA纳米级均匀地分散在材料的一侧,材料的吸水率为45％ ～ 50％,牛血清白蛋白在材料表面的吸附率约为5％,表明材料具有较好的生物相容性.结论 成功制备1种生物相容性较好的有机/无机复合人工软骨材料.
作者：陈鹏；方善鸿；郑竑；张文明；李文波；杨声波；林建华 刊期： 2014年第03期
目的 分析影响脑胶质瘤患者复发的因素.方法 采用聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学法分别检测肿瘤精子蛋白32前体(OY-TES-1) mRNA和蛋白表达.采用Cox比例风险回归模型分析影响胶质瘤复发的因素.结果 复发性脑胶质瘤OY-TES-1 mRNA阳性率为57.50％(46/80),OY-TES-1蛋白阳性表达率为33.75％ (27/80).多困素分析显示首次病理级别和OY-TES-1 mRNA表达水平是影响胶质瘤复发时间的独立预后因素.结论 检测OY-TES-1 mRNA有助于检测胶质瘤复发时间.
作者：严峻；卢桂花；阮玉山；廖兴胜；罗昱；肖绍文 刊期： 2014年第03期
目的 观察榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体对人肿瘤细胞克隆形成和侵袭的影响.方法 制备榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体,采用不同浓度的榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理人喉癌Hep-2细胞后,以平板克隆形成方法检测癌细胞克隆形成,以Transwell方法检测肿瘤细胞侵袭能力.结果 平板克隆实验结果显示,对照组、不同浓度(2.5、5.0、10.0 mg/L)榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理组克隆形成数分别为(102±8)、(82 ±5)、(57±6)和(25 ±3)个.Transewell结果显示,空白对照组、不同浓度(2.5、5.0、10.0 mg/L)榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理组细胞穿过滤膜的细胞分别为(123 ±8)、(89±7)、(60±6)和(35 ±5)个.结论 榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体可抑制人喉癌细胞克隆形成和侵袭,具有潜在的应用价值.
作者：范钰；满昌峰；徐娟；沈荣 刊期： 2014年第03期
B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19000相互作用蛋白3(BNIP3)是一种能和腺病毒E1B 19000蛋白相互作用的线粒体促凋亡蛋白.随着对BNIP3基因靶向治疗研究的深入,近年还发现其诱导细胞自噬的作用.BNIP3相关的凋亡与自噬可能导致肿瘤细胞截然不同的结果.现对两者的机制及相互关系做一综述.
作者：马钊；陈传贵；于振涛 刊期： 2014年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
