目的 观察心脏辅助装置对于急性心力衰竭(HF,简称心衰)犬血流动力学参数的影响.方法 10条健康犬,体质量25～ 35 kg,应用冠状动脉(简称冠脉)微栓塞法建立急性心衰模型,对于造模成功的犬采用双心室辅助,并在实验开始时采用1∶1的频率辅助,记录主动脉压力、心输出量等血流动力学参数.结果 冠脉微栓塞使心输出量[CO:(2.88±0.38) L/min比(1.58±0.23) L/min]、平均动脉压[MAP:(117.2±9.0) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)比(75.0±6.7)mmHg]等其他血流动力学参数减少(30％～50％).通过应用心脏直接辅助装置,能提高心输出量[CO:(1.58±0.23) L/min比(2.41±0.34) L/min]和平均动脉压[MAP:(75.0±6.7) mmHg比(103.8±10.0) mmHg],CO和MAP增加20％.收缩压[(93.6±8.03) mmHg比(126.8±7.8)mmHg]、舒张压[(60.4±5.0) mmHg比(87.0 ±6.1)mmHg]也相应提高,差异有统计学意义(P＜0.05).辅助前后心率变化不大[(125.4±9.0)次/分比(129.0±10.3)次/分],差异无统计学意义(P＞0.05).结论 与心脏收缩同步的心脏辅助装置对于急性心衰犬能够改善心脏的收缩能力,辅助心脏的收缩,提高其心输出量,使其血流动力学参数得以提高.
作者：刘超；李圣博；刘鸿昊；姚星星；焦周阳；文冰 刊期： 2014年第07期
目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(PA-MSHA)对水浴加热后有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制.方法 42℃水浴加热前2h加入1×1011/LPA-MSHA,加热组不加药,对照组不加热、不加药,其他处理相同并在同一时间点观察.在不同的时间观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术分析细胞周期(FCM)、侵袭、运动、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达.结果 PA-MSHA能够逆转加热对人肝癌MHCC97L细胞的增殖促进作用,和对照组比较,加热联合PA-MSHA能明显抑制人肝癌MHCC97L细胞的增殖(P＜0.01),其大抑制效应为加热后48 h(42.3％),细胞倍增时间延长了1.68倍;加热联合PA-MSHA组其加热后48、96 h的细胞集落形成率均明显降低(P＜0.01);FCM显示,加热联合PA-MSHA能逆转加热对细胞周期的影响,和对照组比较,其48 h的G1期细胞比例明显升高,S+G2期细胞比例明显降低(P＜0.01),其96 h的G1期和S +G2期细胞比例差异无统计学意义(P＞0.05).加热联合PA-MSHA组其加热后48 h和96 h相同数量的细胞穿过人工基底膜到达Transwell小室膜背面的细胞平均数(侵袭实验)和穿过Transwell小室膜到达背面的MHCC97L细胞平均数(运动实验)均明显低于加热组(P＜0.01);ELISA法检测相同数量细胞的上清液发现,加热联合PA-MSHA组其加热后48、96h细胞VEGF和MMP-2蛋白的分泌量和加热组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PA-MSHA能抑制体外加热后肝癌细胞的增殖,其作用和抑制细胞进入DNA合成期和分裂期有关;进一步抑制其侵袭运动能力,其作用和MMP-2、VEGF表达无关.
作者：周建炜；汤钊猷；卢创新；崔勇霞；任正刚；周云；王朝杰；马宁；罗执芬 刊期： 2014年第07期
目的 观察丁基苯酞对局部脑缺血损伤引起的脑梗死的保护作用.方法 制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),观察丁基苯酞对脑梗死率的影响,以及与磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的关系.结果 丁基苯酞(10、30 mg/kg)给药后可以使MCAO大鼠的脑梗死率由41.2％降低至19.7％,神经功能评分由3.8分降低至2.6分,细胞角蛋白(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平由5 784 U/L和2 997 U/L降低至2 674 U/L和1 615 U/L,并且引起磷酸化Akt(p-Akt)表达增加3倍和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达降低约3倍.而同时给予PI3K抑制剂LY294002后,可以完全拮抗丁基苯酞引起的MCAO大鼠脑梗死率降低(梗死率由19.8％升高至40.4％)、p-Akt表达的增加和Caspase-3表达的降低.结论 丁基苯酞通过激活PI3K/Akt通路对局部脑缺血损伤引起的脑梗死产生保护作用.
作者：尹春丽；王耀伍；刘英；高海凤；李永秋 刊期： 2014年第07期
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662在眼眶前脂肪细胞分化过程中的抑制作用.方法 培养并分化8例甲状腺相关眼病(TAO)患者眼眶脂肪组织前脂肪细胞,按GW9662浓度不同将实验分为7组.进行不同处理条件下的前脂肪细胞分化.测量各组细胞内脂肪含量改变、脂肪细胞分化率及PPARγ mRNA表达的改变.结果 10、50 μmol/LGW9662组脂肪含量高吸光度(A)值分别为0.406±0.010及0.296±0.034,较其他组差异有统计学意义(P＜0.05).随GW9662浓度的增加,脂肪细胞分化率分别为11.9％、10.0％、6.7％、4.1％,激动剂组增长至61.3％,GW9662拮抗后降至21.2％.10 μmol/L及50 μmol/L GW9662作用下PPARγ表达明显减弱,相对灰度值分别为0.51 ±0.06和0.39±0.05,较其他组差异有统计学意义(P＜0.005).结论 GW9662可随剂量的增加降低脂肪细胞的分化率,降低细胞PPARγ的表达,从而证明GW9662具有抑制脂肪细胞分化的能力.
作者：王莉菲；刘静江；闫忠阳 刊期： 2014年第07期
目的 观察环氧合酶-2 (COX-2)选择性抑制剂NS-398联合白细胞介素-6(IL-6)抗体对人肝门胆管癌QBC939细胞的增殖抑制及降低前列腺素E2(PGE2)含量的协同作用.方法 不同浓度NS-398(25、50、100μmol/L)、IL-6抗体(0.1、1.0、l0.0 mg/L)及联合用药(NS-398 100 μmol/L+ IL-6抗体10 mg/L)作用于QBC939细胞24、48、72 h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞增殖抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞PGE2含量.结果 不同浓度的NS-398、IL-6抗体对QBC939细胞均有抑制作用,且联合效果明显优于单药,各组与对照组比较差异均有统计学意义(P ＜0.05);ELISA分析:NS-398(100μmol/L)、IL-6抗体(10 mg/L)、联合组作用细胞72 h后每孔PGE2含量分别为(25.606±5.676)、(36.454±6.444)、(18.223±4.168)ng,与阴性对照组每孔(106.781±12.423)ng比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NS-398和IL-6抗体均有抑制人肝门胆管癌QBC939细胞增殖的作用,亦能降低细胞PGE2的含量,作用具有浓度、时间依赖性且联合作用更强.
作者：李志鹏；曾兆林 刊期： 2014年第07期
目的 探讨白芦藜醇对乙醇致幼鼠脑损伤保护作用的分子机制.方法 建立乙醇致脑损伤模型,将24只新生雄性小鼠于生后随机分为3组,7d龄时,按2 g/kg乙醇(20％无菌盐水溶液)皮下注射,间隔2h后再次注射.对照组乳鼠仅注射等量生理盐水.乙醇加白芦藜醇组(简称白芦藜醇组)自第1次乙醇注射起,每天应用白芦藜醇80 mg/kg灌胃1次,共3次.乙醇皮下注射72 h后取材.通过苏木素-伊红(HE)染色观察脑皮质形态学变化,采用常规及实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫组织化学(IHC)法检测凋亡诱导因子(AIF) mRNA及蛋白水平的变化.结果 常规及RT-qPCR显示,乙醇组AIF mRNA相对表达量(2.3740±0.1605,n=3)较生理盐水组AIF mRNA相对表达量(1.6340±0.0659,n=3)和白芦藜醇组mRNA相对表达量(1.5060±0.1646,n=3)显著增加,差异有统计学意义(F=34.51,P＜0.05).IHC检测提示生理盐水组AIF未见明显表达,阳性细胞数为(12.0±3.5)个,乙醇组中AIF表达增强,阳性细胞数为(42.0±6.5)个,而白芦藜醇组中可见少量棕色物质沉积,表达阳性细胞数为[(16.0±4.2)个,乙醇组与其他两组比较,差异有统计学意义(F=33.10,P＜0.05).结论 乙醇致小鼠脑损伤模型中,AIF表达增强,白芦藜醇可减弱乙醇致AIF的表达,提示白芦藜醇通过调节AIF表达,参与保护乙醇致脑损伤的分子过程.
作者：田凤艳；顾朝辉；刘玉峰；罗强；安金斗；王怀立；田培超；王华 刊期： 2014年第07期
目的 观察肿瘤干细胞(CSC)在人乳腺癌细胞株MCF-7对紫杉醇(Taxol)产生获得性耐药中的作用.方法 采用低浓度加量(起始浓度为0.005 mg/L)持续诱导法诱导产生人乳腺癌耐Taxol细胞株MCF-7/T=ol,噻唑蓝(MTT)法检测MCF-7/Taxol对Taxol的敏感性.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和性别决定区Y框蛋白-2(SOx-2)的表达.结果 亲本株和耐药株细胞对Taxol的半数抑制浓度(IC5o)值分别为0.05 mg/L和4.2 mg/L,耐药指数为84.0.20 mg/L的As2O3降低了耐药株对Taxol的耐药性,逆转倍数为3.82,相对逆转效率为74.7％.耐药株细胞ABCG2和SOX-2的表达显著升高(P＜0.01).As2O3处理后,ABCG2和SOX-2的表达显著下降(P＜0.05).结论 CSC有可能是人乳腺癌细胞株MCF-7对Taxol产生耐药的机制之一.
作者：韩娜；穆永慧；张庆 刊期： 2014年第07期
目的 检测芳香烃受体核易位蛋白(ARNT)高表达对肝癌细胞SMMC7721增殖、凋亡以及侵袭能力的影响.方法 构建ARNT基因稳定转染的肝癌细胞SMMC7721;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞24、48、72 h的增殖,膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 筛选获得稳定高表达ARNT的克隆细胞;Western blot 显示稳定转染ARNT的SMMC7721可明显上调ARNT蛋白的表达水平,上调倍数达2.65倍;ARNT 高表达后细胞生长速度较对照组细胞明显减慢.24、48、72 h的细胞增殖抑制率分别为(18.70±4.25)％、(26.45±3.92)％、(35.14±3.64)％;ARNT高表达后细胞凋亡明显增加,细胞总凋亡比例为(9.43±1.09)％,而对照组细胞的总凋亡比例为(4.40±0.61)％,两者差异有统计学意义(P＜0.01);Transwell实验显示表达ARNT的肝癌细胞穿膜细胞数为(29.5±6.7)个,而对照组的穿膜细胞数为(58.3±14.8)个,差异有统计学意义(t=6.873,P＜0.01).结论 ARNT能明显抑制肝癌细胞的生长、促进其凋亡,同时抑制肿瘤细胞的侵袭能力.
作者：蔡静；吴建胜 刊期： 2014年第07期
目的 观察微小RNA-10b(miR-l0b)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖能力的影响.方法 利用TaqMan@实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测77例不同级别胶质瘤组织、15例正常脑组织及胶质瘤细胞株中miR-10b的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测转染miR-10b模拟物对胶质瘤A172细胞增殖能力及细胞周期分布的影响.结果 miR-10b在胶质瘤细胞和胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常脑组织(4.46 ±0.24比0.44±0.10,P＜0.01),且miR-10b的表达水平与胶质瘤组织病理分级呈正相关(Ⅰ级:2.10 ±0.27,Ⅱ级:3.58±0.35、Ⅲ级:4.85±0.38、Ⅳ级:6.38±0.37,P＜0.01).过表达miR-10b能够促进A172细胞的体外增殖能力,并使A172细胞处于Go/G1期的细胞减少,进入S期的细胞明显增多.结论 miR-10b在胶质瘤中过表达,加速胶质瘤细胞进入S期,促进增殖.
作者：孙利波；刘莉；梁华新；付超；赵丛海 刊期： 2014年第07期
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRLd)在结肠癌微环境中通过肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)促进结肠癌细胞转移的机制.方法 将TAMs与稳转染PRL-3的结肠癌Lovo细胞(Lovo-P)进行体外共培养的方式,再通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)筛选出TAMs中上调的细胞因子.Western blot检测细胞因子蛋白水平.免疫荧光法检测结肠癌患者肿瘤切片中相关TAMs表达,Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线.结果 Real-time PCR检测结果显示,TAMs与Lovo-P细胞共培养比与Lovo-C细胞共培养后白细胞介素(IL)-6 mRNA表达明显升高(8.3±2.2)倍.Western blot检测结果显示TAMs与Lovo-P细胞共培养后IL-6表达上调180％.在共培养体系中预处理IL-6中和抗体(5mg/L及10 mg/L)后,Lovo-P细胞侵袭性下降[(220±13)个比(132±12)个比(83±7)个].免疫荧光检测结果显示结肠癌患者癌灶处肿瘤切片中TAMs与IL-6荧光重合,分布于肿瘤间质中,并且Ⅰ期患者IL-6阳性TAMs数量要少于Ⅳ期患者[(24±4)个比(56±9)个].生存曲线分析发现IL-6阳性且TAMs＞ 20个的患者生存期明显短于IL-6阳性且TAMs≤20个患者(27.3个月比12.2个月).结论 PRL-3能够通过诱导TAMs分泌IL-6,促进结肠癌细胞转移,并影响患者的预后和生存.
作者：黄汉源；许鹤洋；来伟；曾献清；张旸；陈志坚；李定文；林峰；褚忠华 刊期： 2014年第07期
目的 观察外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生成的影响.方法 应用细胞移植法将人原发性肝癌细胞株SMMC-7721种于BALB/c裸鼠皮下,构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,30只荷瘤小鼠随机分为3组,将磷酸盐缓冲液(PBS)、重组Lac-Z腺病毒(Ad-LacZ)及腺病毒介导的突变型p27 (Ad-p27mt)分别注射到瘤体,3周后处死裸鼠,用Western blot实验观察各组移植瘤的p27蛋白表达,肉眼观察肿瘤组织血管形成,用免疫组织荧光化学法观察各组移植瘤Ⅷ因子的表达,并用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 Ad-p27mt组移植瘤p27mt蛋白表达较空白对照组及Ad-LacZ增高,PBS液及Ad-LacZ组移植瘤血管粗大,Ad-p27mt组移植瘤血管细小,Ad-p27mt组、空白对照组及Ad-LacZ组Ⅷ因子平均吸光度(AA)值分别为:0.201 ±0.103、0.346±0.069、0.351±0.045,前者AA值低于后两者(P＜0.05),而VEGF及MMP-9在Ad-p27mt组的表达也明显低于PBS液及Ad-LacZ组(P＜0.05).结论 Ad-p27mt能在裸鼠SMMC-7721肝癌皮下移植瘤表达p27mt蛋白,且能够通过表达的p27mt蛋白抑制VEGF及MMP-9的产生而抑制肝癌血管的生成.
作者：黄建朋；王卫星 刊期： 2014年第07期
目的 观察RNA干扰下调叉头转录因子M1(FoxM1)基因对肿瘤细胞生长、克隆形成和侵袭的影响.方法 培养8株人卵巢癌细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检查FoxM1基因mRNA水平.设计并用化学方法合成FoxM1基因小干扰RNA (siRNA),转染处理SKOV-3细胞,选择下调效果好的siRNA.SKOV-3和HO-8910PM细胞均分为3组:空白对照组(Con-A)、空载质粒对照组(Con-B)和siRNA组(siRNA),其中,siRNA组以FoxM1 siRNA转染处理.分别应用FQ-PCR和Western blot方法检测各组癌细胞FoxM1基因mRNA和蛋白水平.以细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测生长,以平板克隆方法检测癌细胞克隆形成能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 8株卵巢癌细胞株中,SKOV-3和HO-8910PM细胞FoxM1基因mRNA表达水平高.FoxM1基因siRNA转染SKOV-3细胞后,72 h Con-A、Con-B和siRNA组吸光度(A)值分别为2.455±0.033、2.442±0.025和1.312±0.028(P＜ 0.05);平板克隆结果显示,Con-A、Con-B和siRNA克隆形成数分别为(100 ±5)、(93±8)和(51±3)个(P＜0.05);TransweH结果显示,Con-A、Con-B和siRNA组穿膜细胞数分别为(93±4)、(86±3)和(36±1)个(P＜0.05).FoxM1基因siRNA转染HO-8910PM细胞后,72 h,Con-A、Con-B和siRNA组A值分别为2.691±0.039、2.560±0.033和1.455±0.027(P ＜0.05);平板克隆结果显示,Con-A、Con-B和siRNA克隆形成数分别为(146±7)、(145±8)和(85±2)个(P＜0.05);Transwell结果显示,Con-A、Con-B和siRNA组穿膜细胞数分别为(449±15)、(445±11)和(151±9)个(P＜0.05).结论 FoxM1基因在人卵巢癌细胞生长、增殖和侵袭起重要作用.
作者：范钰；徐娟；周永静；陈琳；赵松兰 刊期： 2014年第07期
目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1(PDX-1)、神经源性分化因子-1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS)分化为胰岛素分泌细胞的作用.方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白(GFP)、Ad-mNeuroD1IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰岛β细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量.将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥.结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似;免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成;ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性.当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量高为(0.309 3±0.017 9) ng.免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌.糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用.结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用.
作者：王尧；王志伟 刊期： 2014年第07期
目的 观察白细胞介素-21(IL-21)对人细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外培养的影响.方法 以常规培养基诱导的CIK细胞为对照组,培养体系中加入IL-21后体外诱导培养10d,观察细胞增殖能力,并检测CIK细胞表型,分析CIK细胞分泌的干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子含量,检测CIK细胞对食管癌细胞株EC9706细胞的毒性作用及凋亡.结果 IL-21组细胞数量[(14.58±1.81)×108/L]高于对照组[(7.83±1.18)×108/L,P＜0.05],CD3+细胞比率[(98.48±0.28)％]高于对照组[(95.02±1.18)％,P＜ 0.05],CD3+ CD4+细胞比率[(51.53±1.21)％]高于对照组[(33.36±1.91)％,P＜0.01].IL-21组CD3+ CD8+细胞比率、CD3+ CD56+虽略高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).IL-21组培养上清液TNF-α浓度为25.0.μg/L,高于对照组的12.5 μg/L(P ＜0.05),但是两组之间IFN-γ浓度差异无统计学意义(P＞0.05).IL-21组EC9706细胞的凋亡比率为(15.33±0.91)％,高于对照组的(13.25±1.17)％(P＜0.05).结论 IL-21能增加CIK细胞增殖,提高CD3+、CD3+ CD4+阳性表达率,增加细胞因子TNF-α的分泌,促进CIK细胞诱导食管癌细胞凋亡的能力.
作者：樊清波；马军；董海霞；李印；秦建军；刘红山；秦秉玉 刊期： 2014年第07期
目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达变化及意义.方法 首先建立乙醇致睾丸损伤模型,将12只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,用生理盐水稀释无水乙醇为15％浓度.实验组小鼠每天按3 g乙醇(15％,V/V)/kg体质量,腹腔内注射14 d,对照组为等体积生理盐水.应用苏木素-伊红(HE)染色鉴定睾丸组织形态学变化,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TSEG-1 mRNA变化,采用免疫组织化学和Western blot检测其蛋白变化.结果 乙醇组睾丸HE染色结果提示,与对照组比较,乙醇组睾丸组织85.6％曲精小管管腔消失,Ⅰ～Ⅳ级生精细胞数目减少,78.2％精母细胞或精子细胞核皱缩.在乙醇组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平(7.500±0.657,n=6)较对照组(0.985±0.231,n=6)显著增加,差异有统计学意义(t=22.915,P＜0.01).同时,乙醇组TSEG-1蛋白质较生理盐水组显著增加,经Quantity One软件分析灰度值后,与管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)比较,乙醇组TSEG-1蛋白(1.360±0.202,n=6)较生理盐水组(0.330±0.112,n=6)表达增加达4倍,差异有统计学意义(=10.69,P＜0.01).结论 乙醇致小鼠睾丸损伤模型是研究睾丸损伤的可靠模型,TSEG-1可能参与乙醇致睾丸损伤模型的分子发生过程.
作者：顾朝辉；田凤艳；李冠儒；贾占奎；孟政雷；孙科；魏金星；杨锦建；阚全程 刊期： 2014年第07期
目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默转录因子E2F-1表达对小鼠精原干细胞(SSCs)凋亡的影响.方法 采用Percoll液密度梯度离心分离和流式细胞仪分选纯化SSCs进行体外培养,以脂质体法转染pSilencerk 1-E2F1至SSCs,并用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测E2F-1的表达水平,流式细胞仪检测siRNA干扰E2F-1表达后对SSCs凋亡的影响.结果 RT-qPCR结果实验组mRNA的2-△△Ct)值(0.32)明显低于未转染组(0.10)和阴性对照组(1.04),Westem blot显示实验组条带灰度低于未转染组和阴性对照组,流式细胞术检测显示实验组凋亡率(7.69％)低于未转染组(23.07％)和阴性对照组(24.19％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA靶向干扰转录因子E2F-1能显著降低小鼠SSCs的凋亡率.
作者：曾汉青；朱朝辉；万锋；王进；李森；张友朋 刊期： 2014年第07期
目的 观察肿瘤相关巨噬细胞自噬调控后对大肠癌loVo细胞凋亡的影响.方法 使用佛波酯PMA、人重组白细胞介素(IL)-4诱导人单核白血病细胞THP-1分化为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)后,使用流式细胞仪检测其表面CD68、CD204、CD206分子表达;分别使用一定浓度的雷帕霉素(RAD001),巴弗洛霉素(Bafilomycin a1)对TAM的自噬状态进行调控,应用磺酰尸胺(MDC)荧光染色法观察TAM自噬囊泡形成,免疫荧光检测自噬特异性微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达;利用Transwell小室将不同自噬状态的TAM与大肠癌细胞行非接触式共培养,实验分组为TAM自噬上调组、下调组、未调组及单独大肠癌LoVo细胞的空白对照组4组,各组经4Gy射线照射后分别对大肠癌细胞凋亡细胞比例、存活素(Survivn)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白,半胱天冬蛋白酶激活剂(Smac)蛋白进行检测.结果 TAM表面CD68、CD204、CD206表达水平显著高于未经处理的THP-1细胞和只经PMA作用得到的未活化巨噬细胞.TAM自噬上调组中MDC染色的自噬囊泡数目多于自噬未调组,LC3荧光也强于自噬未调组;自噬下调组中MDC染色的自噬囊泡数目少于自噬未调组,LC3荧光强度则弱于自噬未调组.共培养体系中细胞同时接受照射处理后,膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染检测大肠癌细胞凋亡显示:共培养组中大肠癌细胞凋亡率分别为(36.84 ±0.37)％、(43.23±1.34)％、(29.37±0.82)％,均高于对照组(27.23±0.63％)(P＜0.05);其中,TAM自噬上调组中大肠癌细胞凋亡率[(43.23±1.34)％]高于自噬下调组[(29.37±0.82)％]和自噬未调组[(36.84±0.37)％,P＜0.05].各组大肠癌细胞凋亡相关蛋白的检测结果显示:TAM自噬未调组中bcl-2表达量为0.24±0.02、上调组为0.08±0.01、下调组为0.42±0.02,均低于对照组(0.61±0.05),TAM可下调大肠癌细胞的bcl-2表达(P＜0.05);共培养组中Smac表达水平(分别为1.26±0.03、1.49±0.24、0.85±0.03)均高于对照组(0.68±0.03)(P＜0.05);共培养组中Survivin表达水平(分别为0.48±0.01、0.23 ±0.02、0.55±0.05)均低于对照组(0.80±0.05) (P ＜0.05).结论 上调TAM自噬水平可显著促进大肠癌细胞凋亡,改变大肠癌细胞凋亡相关蛋白的表达,提高射线对大肠癌细胞的杀伤作用.
作者：邵乐宁；杨晓东；邢春根；吴永友；赵奎；龚巍；钟丰云；曹建平 刊期： 2014年第07期
目的 探讨Twist在肝细胞癌中的表达及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α的关系,观察Twist和HIF-1α基因干扰对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 免疫组织化学法检测106例肝细胞癌组织中转录因子Twist和HIF-1 α的表达;利用LipofectamineTM 2000转染Twist和HIF-1α小分子干扰RNA(siRNA)至HepG2细胞.实验分5组:Twist干扰组、HIF-1α干扰组、双重干扰组、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体);流式细胞仪检测细胞凋亡;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖活力;染色质免疫共沉淀法(ChIP)检测Twist和HIF-1α基因间的直接作用关系.结果 癌组织Twist的阳性表达率为66.98％,明显高于癌旁组织的17.92％(P＜0.05),Twist和HIF-1α的表达呈正相关(P＜0.05).与空白对照组(3.98％)和阴性对照组(4.26％)比较,Twist干扰组、HIF-1 α干扰组和双重干扰组细胞凋亡率分别为41.62％、43.84％和45.12％,干扰组细胞凋亡率均显著增加(P＜0.01),且干扰组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Twist干扰组、HIF-1α干扰组和双重干扰组细胞生长抑制率分别为30.2％、34.0％和35.8％,各干扰组间差异无统计学意义(P＞0.05).ChIP法证实在HepG2中Twist与HIF-1α启动子有直接作用.结论 Twist与HIF-1α基因表达呈正相关,表达下调后能诱导肝细胞癌HepG2细胞凋亡,并抑制其生长,双重干扰无明显协同作用,并且两基因间具有直接作用.
作者：刘永刚；刘瑾；龚铖 刊期： 2014年第07期
目的 探讨96序列相似的家庭成员B(FAM96B)在肝细胞肝癌中的表达,以及对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot技术检测FAM96B在42例肝癌肿瘤组织和癌旁组织、HepG2和L-02细胞中的mRNA及蛋白表达量,比较其差异.构建pcDNA3.1-myc-FAM96B真核表达载体,并通过脂质体质粒转染HepG2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪(FACS)检测FAM96B基因对HepG2增殖及凋亡的影响.结果 42例肝癌组织中,Real-time PCR结果显示FAM96B在肿瘤组织中的mRNA表达量是癌旁组织的(0.304±0.094)倍,且其在HepG2细胞中的mRNA表达量是L-02细胞的(0.406±0.115)倍,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示FAM96B在肿瘤组织中的蛋白表达是癌旁组织的(0.288 ±0.132)倍(P＜0.05),且其在HepG2细胞中的蛋白表达是L-02细胞的(0.359±0.143)倍(P＜0.05).MTT细胞实验结果显示FAM96B组吸光度值显著低于对照组(P＜0.05),即过表达FAM96B可抑制HepG2细胞增殖.流式检测显示过表达FAM96B组的HepG2细胞凋亡率(33.3％)与对照组(3.3％)比较增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FAM96B在42例肝癌肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织,并且其在HepG2细胞中的表达低于L-02细胞;过表达FAM96B可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡.该基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中发挥重要作用.
作者：张智勇；蔡逊；马丹丹；李汉军；金炜东；张建新 刊期： 2014年第07期
目的 观察Janus激酶2/信号转导与转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在胰蛋白酶原激活肽(TAP)诱导大鼠胰腺腺泡细胞释放高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用.方法 提取大鼠胰腺腺泡细胞,随机分为正常对照组、TAP促进组(终质量浓度为3 nmol/L)、JAK2抑制剂AG490预处理组(25 μmol/L)、STAT3抑制剂雷帕霉素预处理组(40 μg/L),采用聚合酶链反应(PCR)及Western blot法检测3～24h各组HMGB1 mRNA及蛋白表达水平.结果 与正常对照组HMGB1 mRNA表达水平(1.01±0.04)比较,TAP组6～24 h HMGB1 mRNA表达水平显著增高(2.87±0.08、32.85±1.48、38.43±1.60,P＜0.01);与TAP组比较,AG490预处理组12 ～24 hHMGB1 mRNA表达均显著抑制(23.40±1.38、19.44 ±0.89,P＜0.01);与TAP组比较,雷帕霉素预处理组12～24 h HMGB1 mRNA表达均显著抑制(21.14±1.32、17.76±0.57,P＜0.01).与正常对照组HMGB1蛋白表达水平(0.39±0.02)比较,TAP组3～24 h HMGB1蛋白表达显著增高(0.46±0.02、0.67±0.03、0.72 ±0.02、0.90 ±0.03,P＜0.01);与TAP组比较,AG490预处理组12 ～24 hHMGB1蛋白表达均显著抑制(0.60±0.02、0.54±0.01,P＜0.01);与TAP组比较,雷帕霉素预处理组12 ～24 h HMGB1蛋白表达均显著抑制(0.59±0.02、0.58±0.01,P＜0.01).结论 TAP可诱导大鼠胰腺腺泡细胞HMGB1的表达和释放,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路有关.
作者：任浩源；兑丹华；刘尧；王国良；江小静；白亮 刊期： 2014年第07期
目的 探讨泾甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对糖尿病神经痛的保护作用及其机制.方法 观察腹腔注射辛伐他汀对糖尿病小鼠机械痛阈值的影响以及是否与甲羟戊酸途径有关;RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在糖尿病中的作用以及辛伐他汀的干预作用;辛伐他汀对RhoA/ROCK通路下游一氧化氮合酶(NOS)的干预作用.结果 辛伐他汀对糖尿病小鼠产生剂量依赖性的镇痛作用,镇痛率为64.7％,此镇痛作用可以被甲羟戊酸(30 mg/kg)所完全阻断;辛伐他汀可以抑制RhoA/ROCK通路,RhoA蛋白抑制剂C3(10 pg)和ROCK抑制剂Y27632(4μg)对糖尿病小鼠的镇痛率分别为47.1％和43.8％;糖尿病疼痛小鼠内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达降低23.9％,辛伐他汀干预RhoA/ROCK通路,使eNOS表达增加至正常小鼠水平,进一步增加NO含量而产生镇痛作用.结论 辛伐他汀通过抑制RhoA/ROCK通路,增加eNOS的表达,增加NO含量,从而产生对糖尿病神经痛的镇痛作用.
作者：陈荔枝；高轩；黄金伟；李茜 刊期： 2014年第07期
慢性创面是指那些未能有序及时地延续修复进程,导致创面解剖和功能延迟修复,甚至不能修复的创面[1].本研究旨在观察壳聚糖蜂蜡膏对大鼠慢性创面的治疗效果和对创面中CD34及羟脯氨酸的表达影响,并探讨其机制.一、材料与方法1.材料:体质量250 g左右的SPF级健康雄性SD大鼠16只;实验试剂则需要壳聚糖蜂蜡膏敷料、CD34抗体、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组织化学试剂盒、羟脯氨酸试剂盒及3-二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒.
作者：邹新华；李炳辉；陈洪平；祝友鹏；李恭驰；祝鑫红 刊期： 2014年第07期
我们在铁蓄积致骨量下降的基础上采用降铁药物甲磺酸去铁胺(DFO)干预,观察降铁对血清骨转换指标和骨量的影响.一、材料与方法1.材料:Micm-CT(SKYSCAN),电感耦合等离子体发射光谱仪(美国PerkinElmer公司),2个月龄雄性ICR小鼠(苏州大学实验动物中心),小鼠酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒Ⅰ型胶原C端肽(CTX,IDS公司)、骨钙素(BGP,R&D公司),枸橼酸铁铵(Sigma公司),DFO(诺华公司).
作者：刘禄林；王啸；高超；李光飞；俞晨；沈光思；张鹏；吴明霞；王爱东 刊期： 2014年第07期
小肝细胞样前体细胞(SHPCs)是一种只能向肝细胞分化的单潜能肝干细胞,体外培养及体内移植均有着强大的增殖分化潜能[1-2].本研究旨在建立大鼠小肝细胞样前体细胞模型.一、材料与方法倒千里光硷(Sigma公司)溶液腹腔内注射(30 mg/kg,2次,间隔2周),第2次给药后于第5周2/3肝切除建立健康雄性Wistar大鼠SHPCs模型,改进Seglen胶原酶(0.05％,Ⅰ型胶原酶,Sigma公司)灌注方法获得肝细胞悬液,以包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒混悬液(Percoll,45％,Pharmacia公司)密度梯度离心分离纯化SHPCs,以37℃恒温、5％ CO2培养,光镜、电镜下观察,链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物技术进行免疫组织化学染色.
作者：张金卷；杜智；王毅军；朱争艳；李霖 刊期： 2014年第07期
近年来,简单外科手术结合弹性蛋白酶诱导实验动物动脉瘤模型的研究渐渐成为热点[1].我们利用猪胰弹性蛋白酶消化大鼠右侧颈总动脉,建立与人类颅内动脉瘤形态学和病理学相似的梭形动脉瘤模型.一、材料与方法1.材料与方法:SD大鼠30只,体质量250 ～ 300 g.随机分为生理盐水对照组、实验A组和实验B组,每组10只.10％水合氯醛(0.4 ml/100 g)腹腔注射麻醉大鼠后,颈前正中切口,游离出右侧颈总动脉,用大小约5 mm×14 mm乳胶片垫于颈总动脉下,两端用1号缝合线结扎形成一长度为10 mm凹槽,注入弹性蛋白酶0.15 ～0.35 ml(1.0 U/ul),消化20 min后,吸干残留弹性蛋白酶后除去结扎线,生理盐水反复冲洗后取出乳胶片,逐层缝合皮肤.
作者：张连富；方兴根；李子付；江国权；周家浩；裴士文；徐善水 刊期： 2014年第07期
先天性心脏病(CHD)是胎儿时期心脏血管发育异常导致的先天性缺陷,在活产新生儿中的发病率约为0.6％～0.8％,是目前1岁以下婴儿非感染性死亡的首要原因[1].我们通过研究病例组和对照组胰岛素样生长因子2(IGF2)多态位点rs2585、rs10770125、rs3802971的基因型频率分布差异,探讨其与散发CHD的关系.
作者：笪敏；莫绪明；扈元利；钱波 刊期： 2014年第07期
人类的肌腱是一种少细胞和少血管的结构,在机械运动过程中,很容易导致肌腱过度使用而损伤,这种损伤称为肌腱病变[1].典型的表现是局部疼痛及运动障碍,这些情况下常经验性地给予皮质类固醇注射.本研究旨在观察曲安奈德(TA)对间充质细胞向肌腱细胞增殖分化过程的影响.一、材料与方法1.材料及试剂:鼠间充质细胞株C3H10T1/2,由温州医科大学外科实验中心提供;曲安奈德(TA)购自Sigma公司;生长分化因子-7(GDF-7)购自R&D公司;聚合酶链反应(PCR)试剂盒购自Invitrogen公司.
作者：俞富祥；吕天旻；段文彪；李岩；张启瑜 刊期： 2014年第07期
我们选择纤维蛋白凝胶包埋镍网成纤维细胞复合物观察模拟体内共培养下不同孔径的大孔支架对细胞的影响.一、材料与方法1.材料:人真皮成纤维细胞取自腹部抽脂术去掉的皮肤,方法参照文献[1].2.模型制作:用聚二甲基硅氧烷(PDMS)夹持布满均一圆孔的圆形镍网边缘(直径:3.05 mm,厚度:30 μm),根据圆孔直径600、400、270、170、100 μm分为5种型号,消毒后烘干,置入12孔板中.镍网上接种密度为5×108/L的成纤维细胞后,用纤维蛋白凝胶包埋,3.5 g/L纤维蛋白原,10 IU/ml凝血酶,加入适量含有10％新生牛血清的高糖DMEM培养基,放入37℃、5％ CO2培养箱,2d换液1次.根据镍网孔径设置实验组,并分组,另设置无胶体的对照组.
作者：陈道东；沈忆新；张鹏；孙涛 刊期： 2014年第07期
我们采用免疫荧光染色和激光共聚焦技术观察滤泡辅助性T细胞(Tfh)在类风湿性关节炎(RA)滑膜组织中的定位及分布,现报道如下.一、材料与方法2例急性期RA患者滑膜均取自苏州大学附属第三医院风湿免疫科关节镜活检患者,另收集1例骨关节炎、1例正常滑膜组织作为对照.标本经石蜡包埋、切片、脱蜡、水化、抗原修复、3％牛血清白蛋白(BSA)封闭后,加鼠抗人CD4单抗(1:40稀释,DaKo,Denmark)、兔抗人CXC趋化因子受体-5(CXCR5)多抗(1:200稀释,Millipore,USA)、山羊抗人可诱导共刺激分子(ICOS)多抗(1:30稀释,R&D Systems,USA),4℃过夜.
作者：周萌；陈陆俊；褚阳；秦思；丁文鸽；陆亚华 刊期： 2014年第07期
胃癌是常见的恶性肿瘤之一,其预后尚不理想[1].DKK-1(dickkopf-1)是Wnt信号通路的一种拮抗剂,但DKK-1在胃癌发生中的生物学效应尚未阐明,研究旨在通过检测胃癌患者血清及组织中DKK-1的表达,探讨其在胃癌诊断中的意义.一、资料与方法1.对象:选取本院2012年3月至2013年10月,拟手术切除胃癌患者78例,术前未接受放、化疗.男50例,女28例;年龄32～ 74(平均51.6)岁.2.血清中DDK-1的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测:78例胃癌患者术前清晨空腹抽取外周血标本,同期收集正常人空腹血清38例作为对照,采用ELISA法测定受试对象血清中DKK-1浓度.
作者：魏礼清；向春香；胡建华；徐波；曹阳；王彬生；卢忠心 刊期： 2014年第07期
目的 探讨胃癌组织中微小RNA(miR)-433的表达变化及其临床意义.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测80例胃癌患者手术切除癌组织及配对癌旁组织标本中miR-433的表达水平.结果 miR-433在胃癌组织中的相对表达水平(△Ct为9.73±2.96)显著低于其配对癌旁组织中的表达(△Ct为12.25±2.07),差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌组织中miR-433的表达水平与分化程度、临床TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而与年龄和性别无相关(P＞0.05).结论 胃癌组织中miR-433的低表达可能与胃癌的发生、发展、侵袭及转移相关.
作者：顾掌生；马志红；吴巍；刘进；钟婧；蒋海根；闵丽姗；戴利成 刊期： 2014年第07期
目的 观察体外循环下经主动脉根部注射参麦注射液对二尖瓣置换术患者心肌损伤的影响.方法 拟行二尖瓣置换术患者40例,将患者随机分为两组(n=20):对照组(C组)和参麦组(S组),每组20例.S组于阻断升主动脉后,立即经升主动脉根部注射参麦注射液1 ml/kg,随后灌注4℃高钾(K+浓度:22 mmol/L)含血心脏停搏液20 ml/kg;C组注射等量生理盐水,随后灌注4℃高钾(K+浓度:22 mmol/L)含血心脏停搏液20 ml/kg,两组患者每30 min复灌不含参麦的相同成分含血心脏停搏液10 ml/kg.分别于主动脉阻断前即刻(T1)、主动脉阻断后4h(T2)和术后24 h(T3)时,采集中心静脉血4ml,测定血浆心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)浓度、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同功酶(CK-MB)的活性.记录阻断升主动脉至心脏停搏所用时间、心脏自动复跳率、心脏复跳期间利多卡因使用剂量及体外循环(CPB)后1h多巴胺用量.结果 T2～T3时C组血浆cTnI浓度分别为(7.29±1.86)、(5.46±1.59) μg/L,S组T2～ T3时血浆cTnI浓度值分别为(4.81±1.50)、(2.62±0.78)μg/L,两组比较S组T2～T3时血浆cTnI浓度值降低(P ＜0.05);T2～T3时C组血浆CK浓度值分别为(99±11)和(70±9)U/L,S组T2～T3时血浆CK浓度值分别为:(59±9)、(32±5) U/L,T2～ T3 S组时血浆CK浓度值降低(P ＜0.05);T2～T3时C组血浆CK-MB浓度值分别为(8.8±1.9)、(5.5±1.6) U/L,S组T2～时血浆CK-MB浓度值分别为(5.3±1.2)、(3.7±0.9)U/L,T2～T3S组时血浆CK-MB浓度值降低(P＜0.05).结论 体外循环下经主动脉根部注射参麦注射液可减轻二尖瓣置换术患者心肌的损伤.
作者：张义轩；张挚；杨晴；闫增；信文启；马传根 刊期： 2014年第07期
目的 探讨吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)在脓毒症患者免疫炎症进展过程中的表达及其临床意义.方法 选取90例脓毒症患者,按照疾病严重程度分为脓毒症组(32例)、严重脓毒症组(30例)及脓毒性休克组(28例);选择30例健康人作为对照组.采用流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)的水平,计算CD4 +/CD8+百分比.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、干扰素-γ(INF-γ)、IDO的表达水平.结果 对照组、脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组IL-6水平分别为(45.23±8.0)、(86.84±7.83)、(142.01±11.11)、(206.92±17.79) ng/L,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);IL-10水平分别为(9.34±3.58)、(20.17±4.04)、(39.04±4.29)、(64.96±4.41)n#L,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);IL-6/IL-10分别为6.45±1.17、4.53±1.03、3.86±0.83、3.20 ±0.62,各组间比较差异有统计学意义(P ＜0.05);INF-y分别为(2.58±1.36)、(5.68±0.59)、(17.29±2.46)、(31.28±4.49) ng/L,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);IDO分别为(13.41±1.80)、(22.88±3.61)、(34.38±2.2)、(45.35±4.29) ng/L,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD4+分别为(37.35±1.79)％、(29.38±1.53)％、(26.80±0.97)％、(21.22±1.44)％,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD8+分别为(19.61±0.73)％、(20.33±1.01)％、(23.1±0.98)％、(25.63±0.52)％,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD4 +/CD8+分别为1.91±0.15、1.42±0.07、1.16±0.08、0.83±0.07,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);Treg分别为(0.62 ±0.11)％、(1.96±0.87)％、(3.12±1.02)％、(4.35±1.23)％,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IDO在免疫炎性反应中发挥重要作用,有助于评估脓毒症的严重程度及预后.
作者：秦涛；刘卫青；周文婧；胡明星；唐强；王玉柱；刘传江；张宏伟 刊期： 2014年第07期
目的 探讨α-突触核蛋白(SNCA)基因A53T位点突变、A30P位点突变与一个群发性帕金森病家系的关系,进而探讨该家系帕金森病的发病病因是否与遗传因素相关.方法 该家系病史特点其父为当地农药商人,他们共同特点有长期农药接触史(其中包括百草枯和有机磷农药).对该家系3例患者及3例正常成员进行系统的临床检查明确诊断原发性帕金森病后,提取该家族患者及健康人的静脉血,提取人类白细胞组DNA后,通过聚合酶链反应技术(PCR)对SNCA的4号外显子(Exon4) A53T位点及3号外显子(Exon3)上的A30P位点进行扩增,扩增后的产物经限制性内切酶反应多肽技术充分反应,限制性内切酶消化后的产物经紫外线凝胶电泳成像仪分析是否存在基因突变.结果 所有研究对象的SNCA基因Exon3经PCR扩增后的片段长度为192 bp,经特异性限制性内切酶Mva Ⅰ充分消化后,凝胶电泳成像结果为单一条带,即未发现A30P突变.SNCA基因Exon4经PCR扩增后的片段长度为216 bp,经限制性内切酶Tsp45 Ⅰ充分反应后,凝胶电泳成像结果为单一条带,即未发现A53T突变.结论 SNCA基因A30P、A53T点突变可能不是该家系患帕金森病的易感因素,而是与该家系长期接触农药相关,或与其他基因相互作用.
作者：侯健；姚亚妮；罗琴；杨新玲 刊期： 2014年第07期
目的 观察胃癌患者血清中骨桥蛋白(OPN)的表达水平及其对肿瘤转移的作用.方法 收集156例胃癌患者的病历资料及胃癌组织,采用酶联免疫吸附试验(EHSA)法检测胃癌患者和以健康正常人为对照组的血清OPN的含量,以胃癌患者中OPN的含量中位数来分组,以高于中位数浓度组为高浓度组,低于中位数浓度组为低浓度组,研究术前OPN浓度与术后胃癌复发及转移之间的关系;采用Westem blot法检测高浓度组癌细胞转移患者和低浓度组癌细胞未转移患者的胃癌组织及对照组胃黏膜组织中OPN及Tat作用蛋白30(TIP30)的表达量,比较各组之间的差异.结果 胃癌患者OPN含量为75.66 μg/L,明显高于对照组的OPN含量30.45 μg/L,差异有统计学意义(P＜0.01);高浓度组患者2年的复发率和转移率分别为45.3％和64.1％,明显高于低浓度组的25.6％和11.5％,差异有统计学意义(P＜0.01);Western bl结果显示,高浓度组和低浓度组患者的胃癌组织中的OPN表达率明显高于对照组,且高浓度组OPN的表达量高于低浓度组;而正常组的TIP30明显高于高浓度组和低浓度组,且高浓度组患者的胃癌组织中TIP30的表达几乎缺失.结论 胃癌患者血清OPN的表达水平升高,与胃癌细胞的转移密切相关.
作者：杨普；古学萍；张中冕；孙建平 刊期： 2014年第07期
目的 检测人胃腺癌组织中钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)蛋白的表达水平,探讨AnnexinⅡ与胃腺癌发生发展的关系.方法 采用免疫组织化学方法分别检测44对胃腺癌组织和配对的癌旁胃组织,以及10例正常胃组织中AnnexinⅡ蛋白的表达,并分析胃腺癌组织中AnnexinⅡ蛋白表达水平与患者临床病理特征之间的关系.结果 胃腺癌组织中AnnexinⅡ蛋白阳性表达率(70.45％)明显高于配对的癌旁组织(43.18％,P＜0.05),AnnexinⅡ蛋白在癌组织中的表达主要定位于肿瘤细胞胞膜;AnnexinⅡ蛋白的表达水平和胃腺癌患者肿瘤组织的分化程度有关,中、高分化肿瘤组织中AnnexinⅡ蛋白阳性表达率(57.14％)明显低于低分化患者(87.5％,P＜0.05).结论 AnnexinⅡ蛋白上调表达可能与胃腺癌的发生和恶性进展有关.
作者：苏红英；黄雄飞；陈淑勤；张白凌；刘景丰；黄爱民 刊期： 2014年第07期
目的 检测肝细胞癌组织中真核肽链释放因子(eRF)3a(eRF3a)/gspt1的表达与临床病理特征的关系,探讨eRF3a/gspt1在肝细胞肝癌发生和进展中的作用.方法 应用实时定量聚合酶链反应(ReM-timePCR)、Western blot法检测30例肝细胞癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中eRF3a/gspt1的mRNA和蛋白表达.结果 73.3％肝癌组织中eRF3a/gspt1的mRNA表达显著高于癌旁组织,66.7％肝癌组织中eRF3a/gspt1的蛋白表达显著高于癌旁组织;肝癌组织中eRF3a/gspt1的mRNA表达与性别、年龄、肿瘤大小、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜和门脉癌栓差异均无相关(P＞0.05),而与乙肝、病理分级有关;肝癌组织中eRF3a/gspt1的蛋白表达与性别、年龄、肿瘤大小、AFP、肿瘤包膜和门脉癌栓差异均无相关(P＞0.05),而与乙肝、病理分级有关;肝癌组织中eRF3a/gspt1的mRNA表达和蛋白表达之间有相关(P＜0.05).结论 eRF3a/gspt1的高表达可能增加肝癌细胞的蛋白合成,促进肝癌的进展.
作者：王雅；赵星；马从乾；杨轲 刊期： 2014年第07期
目的 探讨磁共振灌注加权成像(PWI)与扩散张量成像(DTI)在脑胶质瘤分级诊断中的应用价值.方法 分析我院经手术病理学证实的45例脑胶质瘤(低级别22例,高级别23例).测量平均扩散系数(ADC)、各向异性分数(FA)、相对平均扩散系数(rADC)、相对各向异性分数(rFA)、局部脑血流量(rCBF)、局部脑血容量(rCBV)、相对局部脑血流量(rrCBF)、相对局部脑血容量(rrCBV)值,应用统计学方法对肿瘤不同部位以及高低级别胶质瘤间各个指标进行差异性比较,并根据受试者操作特征(ROC)曲线确定诊断阈值和分析其敏感度及特异度.结果 45例脑胶质瘤瘤体的ADC、rCBF、rCBV值分别大于相应瘤周、大于相应对侧白质的测量值;FA瘤体＜FA瘤周＜FA对侧白质.各量化指标之间差异均有统计学意义(P＜0.05);高级别胶质瘤瘤体及瘤周的rrCBV、rrCBF分别大于低级别胶质瘤(P＜0.01),高级别胶质瘤瘤体的rADC值小于低级别胶质瘤(P＜0.01);根据ROC曲线分析,rrCBF和rrCBV的诊断阈值分别为2.749和3.058,相应的分级诊断的敏感度和特异度分别为87％、100％与91.3％、95.5％,瘤体rADC及rFA值无诊断价值.结论 脑胶质瘤的瘤体rCBF、rCBV及ADC值,可以用于胶质瘤术前分级诊断,其中,rrCBF的诊断敏感度和特异度高,rrCBF的ROC曲线下面积大.
作者：江晶晶；谈晓飞；张顺；张妍；姚义好；覃媛媛；郭东生；赵凌云；朱文珍 刊期： 2014年第07期
目的 观察急性胰腺炎(AP)患者腹内高压(IAH)的发生,探讨IAH与AP疾病严重程度的关系.方法 选择AP患者60例,所有患者入院24h内进行急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分,根据评分结果是否高于8分将患者分为轻症胰腺炎(MAP)组(A组)和重症胰腺炎(SAP)组(B组).从入院开始采用经膀胱间接测量法监测腹内压(IAP),每4hl次,连续测量5d,以高测量值作为IAP记录值.比较A、B两组IAH发生率的差异,并对患者APACHEⅡ评分与IAP记录值的相关分析.统计两组患者全身炎性反应综合征(SIRS)、多器官功能衰竭(MOF)、胸腔积液发生例数、住院时间、死亡例数等临床指标.按是否发生IAH进一步将SAP分为IAH组(a组)和非IAH组(b组),比较a、b两组上述临床指标的差异,并对APACHEⅡ评分与IAP记录值预测SAP患者临床经过的ROC曲线.结果 36例MAP患者均未发生IAH,24例SAP患者中11例发生IAH,其中腹腔间室综合征(ACS)4例,两组IAH发生率比较差异有统计学意义(P＜0.0l),且SAP患者IAP记录值与APACHEⅡ评分明显相关(r=0.866);a、b两组SIRS、MOF、胸腔积液发生率、住院时间及死亡率等临床指标比较差异有统计学意义(P＜0.01),IAP记录值预测SAP患者临床经过的ROC曲线下面积较APACHEⅡ评分大,差异有统计学意义[95％可信区间(CI)=0.731～1.024,P＜0.05].结论 SAP患者APACHEⅡ评分与IAP测定值明显相关,IAH的发生与否显著影响SAP患者的临床经过,IAP在预测SAP患者不良临床事件发生风险方面较APACHEⅡ评分更具优势.
作者：邵俊伟；蔡逊；马丹丹；喻娟 刊期： 2014年第07期
目的 探讨人工肝血浆置换(PE)治疗前后肝功能衰竭患者外周血T淋巴细胞亚群及白细胞介素(IL)-17等移植相关免疫指标变化的临床意义.方法 将28例肝移植术后肝功能衰竭患者和20例肝功能衰竭患者分别纳入研究组和对照组,采集PE术前、术后即刻、术后1d和术后2d的外周抗凝血和血清,应用流式细胞技术分别检测不同时间段T淋巴细胞亚群百分计数,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IL-17浓度变化.结果 肝移植组患者治疗前的CD3+T细胞[(58.12±4.98)％]、CD4+T细胞[(28.85 ±4.18)％]和CD4+/CD8+比值(1.18)显著低于对照组,而CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞[(10.58±5.01)％]则高于对照组.PE治疗后移植组患者的CD3+T细胞迅速增高到(66.07±4.75)％,CD4+T细胞增高到(37.16 ±3.89)％,CD4 +/CD8+比值由1.18升高到1.35.CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞百分计数在后当天即明显降低至(6.89±4.98)％,而后逐渐上升至术前水平.PE治疗对对照组患者T细胞亚群有类似作用,但作用强度低于对移植后患者.移植组患者PE治疗前的IL-17浓度[(85.175±50.151) ng/L]显著低于对照组[(198.042±80.985) ng/L],PE术后2组患者IL-17均即刻显著升高,而且移植组患者IL-17升高幅度比对照组更为明显.结论 肝移植后肝功能衰竭患者处于免疫抑制状态,PE治疗后细胞免疫功能显著增强,在稳定内环境和同时可能导致排异反应的加剧.
作者：杨卫平；朱纯超；景晓乾；汪炳瑞；沈柏用；彭承宏；邱伟华 刊期： 2014年第07期
目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 选择行ESCC根治切除的患者43例,取其手术切除食管病变部位的食管癌组织为ESCC组,同时选择其中25例ESCC切除标本上、下断端(距肿瘤边缘＞5 cm)的正常食管上皮作为对照组.采用免疫组织化学方法检测两组PDGF的表达,并分析其与ESCC临床病理参数的相关性.结果 ESCC组食管上皮组织PDGF表达的平均吸光度值(0.091±0.002)显著高于对照组(0.074±0.008),其差异有统计学意义(P＜0.05).PDGF的表达与淋巴结转移及TNM分期呈正相关(r =0.673、0.525,P＜0.05),与肿瘤大小及分化程度无相关(r=0.379、0.453,P＞0.05).ESCC组和对照组PDGF表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDGF与ESCC的发生、发展密切相关,对ESCC的诊断、判断预后及治疗有重要参考价值.
作者：齐博；赵宝生；李汉臣；刘红山 刊期： 2014年第07期
目的 探讨CD4+ CD25+叉头框蛋白p3(Fox#)+调节性T细胞在结直肠癌中抑制肿瘤免疫的机制.方法 收集结直肠癌组织48例,息肉组织22例,正常组织21例,采用免疫组织化学法检测Foxp3+调节性T细胞及白细胞介素(IL)-10阳性肿瘤细胞在上述组织中的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Foxp3及信号转导与转录激活因子(STAT3) mRNA在不同组织中的基因表达,同时采用,检验分析上述指标与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 Foxp3及IL-10在结直肠癌组织中阳性细胞表达率分别为45.8％和68.8％,较息肉组织(13.6％和31.8％)及正常组织(9.5％和23.8％)显著升高(P＜0.01);肿瘤组织中Foxp3及STAT3 mRNA的相对表达量分别为0.644±0.059、0.343±0.036,较息肉组织(0.322±0.020、0.212±0.028)及正常组织(0.309±0.016、0.202±0.021)明显升高(P＜0.01);结直肠癌组织中Foxp3与STAT3基因表达量呈正相关(r =0.526,P＜0.05),Foxp3与IL-10蛋白表达呈正相关(r=0.314,P＜0.05);肿瘤组织中Foxp3的表达量与组织学分级、淋巴结转移、TNM分期明显相关(P＜0.05),与年龄、性别无明显相关(P＞0.05).结论 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞通过Foxp3及其他相关抑制性细胞因子的表达抑制肿瘤免疫,进而引起肿瘤免疫逃逸,从而促进肿瘤的发生发展.
作者：朱晓文；王欣；朱尤庆；陈志芬；兰海；吴洲清；陈家宽 刊期： 2014年第07期
目的 观察磷脂混杂酶1(PLSCR1)对肝癌生长转移的调控作用.方法 构建PLSCR1干扰细胞株,通过噻唑蓝(MTT)实验和侵袭(Invasion)实验分别研究PLSCR1在肝癌细胞HepG2的增殖和侵袭中的作用.通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测20例肝癌患者的癌组织及癌旁组织中PLSCR1的表达,探讨PLSCR1在肝癌生长及转移中的意义.结果 成功构建PLSCR1-小干扰RNA (siRNA)-HepG2细胞株,并通过MTT实验和Invasion实验证实干扰PLSCR1对肝癌细胞的生长及侵袭具有抑制作用,其抑制率分别为(28.71±1.27)％和(27.16±10.40)％.FQ-PCR检测20例肝癌患者的癌组织及癌旁组织中PLSCR1的表达,发现PLSCR1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(△ACt:-2.57±1.34),并与肿瘤分化程度和临床分期等病理因素明显相关(P＜0.05).结论 PLSCR1在肝癌组织中高表达,并与肝癌的发生、发展密切相关.
作者：陆永良；黄惠莲；蒋培余；张红；李栋立；戴利成 刊期： 2014年第07期
目的 系统评价经肝动脉化疗栓塞术联合无水乙醇瘤内注射(TACE-PEI)治疗原发性肝癌的疗效及安全性.方法 采用计算机检索和手工检索相结合的方法搜索Pubmed、Cochrane Central、Embase等外文数据库及中国知网(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBMdisc)、重庆维普(VIP)、万方等中文数据库,时间为从建库至2013年10月.收集TACE-PEI注射治疗原发性肝癌的随机对照试验(RCT),对符合纳入标准的研究采用RevMan5.1软件进行Meta分析.结果 共纳入24篇文献,包括774例TACE-PEI介入治疗原发性肝癌病例和740例单用经肝动脉化疗栓塞术(TACE)介入治疗病例.Meta分析显示两组比较,TACE-PEI联合介入治疗原发性肝癌在1年生存率[比值比(OR)=3.44,95％可信区间(CI) (2.60～4.55),P＜0.01]、2年生存率[OR=2.96,95％CI(2.29～3.83),P＜0.01],3年生存率[OR =3.54,95％CI(2.53 ～4.97),P＜0.01],治疗后血清甲胎蛋白(AFP)下降率[OR =3.14,95％(2.30 ～4.28),P＜0.01],肿瘤缩小率[OR=3.05,95％ CI(2.30 ～4.03),P＜0.01]等方面明显优于单用TACE介入治疗;而在治疗原发性肝癌的不良反应发生率[OR=1.94,95％ CI(1.17～3.21),P＜0.05]方面TACE-PEI联合介入的发生率高于单用TACE介入治疗.结论 TACE-PEI治疗原发性肝癌的疗效优于单用经肝动脉化疗术,但不良反应有所增加,不良反应一般较轻,大多数患者可耐受.
作者：苏飞；王欣；陈双倩；王国洲；杨帅龙；金二亮；李继强；谢伟；冯茂辉 刊期： 2014年第07期
目的 关节镜下关节清理术联合腔内注射玻璃酸钠(SH)治疗膝关节骨性关节炎(OA)的疗效.方法 选择2001年6月至2011年6月共采用关节镜下关节清理术(对照组,n=281)和关节镜下关节清理术加腔内注射SH(实验组,n=307)两种方法治疗OA患者共588例.结果 所有患者均经过临床随访24个月,对照组优良率为78.3％,而实验组优良率高达90.5％;按膝关节OA严重性指数评分,实验组治疗24个月后疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用关节镜清理术配合关节腔内注射玻璃酸钠治疗OA,明显提高了治疗效果.
作者：王伟；陆兴；康志刚；董昕 刊期： 2014年第07期
目的 探讨锁定加压钢板(LCP)外固定治疗股骨远端骨折术后感染的临床疗效.方法 2007年2月至2011年12月间,采用LCP外固定治疗股骨远端骨折术后感染患者6例,其中男4例,女2例;年龄24 ～50岁,平均年龄36.5岁;骨折AO分型:A1型4例,A2型2例;开放性骨折3例;Gustilo分型:Ⅰ型2例,Ⅱ型1例;闭合性骨折3例.结果 6例患者均获得随访,患者均获得骨愈合,平均愈合时间为20.6周,术后6个月膝关节平均屈曲110.7°,术后1年膝关节疼痛与关节活动度进行评估(HSS评分),平均90.5分.结论 LCP外固定治疗股骨远端骨折术后感染具有感染控制彻底、骨折固定稳定及膝关节功能恢复良好等特点.
作者：石展英；赵良军；李百川；胡居正 刊期： 2014年第07期
目的 建立红细胞输注有效性的评分标准,探讨老年骨科患者围术期输血的有效性.方法 择期行骨科手术患者108例,美国麻醉医师协会评分标准(ASA)Ⅱ～Ⅲ级,性别不限,年龄60～80岁,随机分为2组,Ⅰ组(n=54)使用传统红细胞输注方式,Ⅱ组(n=54)使用以血红蛋白(Hb)和红细胞压积(Hct)为目标导向的红细胞输注方式,比较输注红细胞悬液前后Hb、Hct、红细胞计数(RBC)、血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、肺泡-动脉氧分压差[P(A-a)O2]、氧合指数(OI)和vigileo监测指标的变化,以及切口愈合时间、住院天数和ICU转入率的变化,评价老年骨科患者红细胞输注方式的有效性和安全性.结果 两组患者的有效率分别为59.3％和72.2％,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).与传统红细胞输注方式组比较,以Hb和Hct为目标导向的红细胞输注方式组患者RBC、Hb和Hct升高,PT和APTT降低,切口愈合时间缩短,ICU转入率降低(P＜0.05).结论 以Hb和Hct为目标导向的红细胞输注方式,能更有效地提高老年骨科患者围术期红细胞输注的有效性.
作者：吴建江；王江；郑宏 刊期： 2014年第07期
目的 观察人RUNT相关转录因子3(RUNX3)和信号诱导增殖相关蛋白1(Sipa1)在胃癌组织中的表达,探讨两者与胃癌临床意义的关系.方法 采用免疫组织化学法检测62例胃癌组织及相应癌旁组织中RUNX3和Sipa1表达水平.结果 RUNX3在胃癌组织中表达率为62.90％(39/62),在癌旁组织中的表达率为93.55％ (58/62),两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),RUNX3表达水平与胃癌组织学分化程度、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);Sipa1在胃癌组织中表达率为43.55％ (27/62),在癌旁组织中的表达率为80.65％ (50/62),两者差异有统计学意义(P＜0.01),Sipa1表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05).结论 RUNX3和Sipa1表达与胃癌生物学行为明显相关.
作者：何代玉；李双齐；刘妍 刊期： 2014年第07期
目的 检测喉鳞状细胞癌患者外周血及癌组织中Th9细胞及白细胞介素(IL)-9的表达水平,探讨其与喉鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系.方法 选择66例初治的喉鳞状细胞癌患者和40例健康志愿者.采用流式细胞仪检测外周血Th9细胞水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-9表达水平.应用免疫组织化学染色分析癌旁组织及癌组织中IL-9阳性细胞的浸润程度.分析喉鳞状细胞癌患者外周血Th9细胞、血清中IL-9水平及癌组织中IL-9阳性细胞浸润程度与各临床病理参数间的关系.结果 喉鳞状细胞癌患者外周血中Th9细胞及IL-9水平分别为(2.64±0.24)％和(89.40 ±6.66) ng/L,显著高于健康对照组[(1.07±0.11)％,t=12.63,P＜0.01;(26.80±3.76) ng/L,t=14.37,P＜0.01],Ⅲ～Ⅳ期患者的Th9细胞比例及IL-9水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者[(3.21±0.22)％比(2.07±0.19)％,t=8.24,P＜0.01;(104.30±6.07) ng/L比(72.90±5.37) ng/L,t=8.91,P＜0.01].喉鳞状细胞癌患者癌组织中IL-9阳性细胞浸润率为84.37％(27/32),而对应癌旁组织为21.87％(7/32),差异有统计学意义(x2=25.098,P＜0.01).外周血Th9细胞和IL-9的表达水平与喉鳞状细胞癌的临床分期、肿瘤分化程度、区域淋巴结转移明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、原发灶部位无相关(P＞0.05).癌组织中IL-9阳性细胞浸润程度与临床分期、区域淋巴结转移明显相关(P＜0.05),与其他临床病理特征无相关(P＞0.05).结论 喉鳞状细胞癌患者外周血Th9细胞比例及血浆中IL-9水平显著升高,且与临床分期等病理指标明显相关,提示Th9细胞及IL-9参与喉鳞状细胞癌的发生发展.
作者：郭欣；吴志宇；陈春悠；王东海 刊期： 2014年第07期
目的 观察乳糜尿患者肾周脂肪组织淋巴管的分布规律和结构特征,为改良乳糜尿的手术方式提供解剖学及病理学依据.方法 分别收集6例尸体(对照组)及15例乳糜尿患者(乳糜尿组)手术切除的肾动静脉周围、输尿管上段、肾上腺周围及肾脂肪囊的脂肪组织,行苏木素-伊红(HE)染色和癌胚抗原M2A单克隆抗体(D2-40)免疫组织化学法观察淋巴管的形态及结构特征,检测脂肪组织中淋巴管密度(LVD)、淋巴管直径及淋巴管面积.结果 对照组肾动静脉、输尿管上段及肾上腺周围脂肪组织内均有淋巴管分布,LVD分别为1.98 ±0.73、2.14±0.73和2.04±0.56,淋巴管直径分别为(32.13±13.28)、(28.25±7.67)和(27.56±7.91) μm,淋巴管面积分别为(107 854±75 897)、(98 647 ±36 131)和(897901 ±34911)μm2;而乳糜尿患者上述区域内LVD(分别为2.97±0.91、3.10 ±0.88、2.87±0.74)、淋巴管直径[分别为(75.05 ±39.75)、(64.02±41.92) μm、(40.00±12.05) μm]及淋巴管面积[分别为(222 776±106 624)、(205 551±114 578)、(173 823±89 559) μm2]均较对照组升高且出现管腔迂曲、扩张等形态学改变,差异有统计学意义(P＜0.05);其中肾动脉和肾动静脉之间、肾静脉及输尿管上段周围的LVD高.对照组肾脂肪囊内LVD为1.46±0.22、淋巴管直径为(15.77±5.03) μm、淋巴管面积为(50 223±32 796) μm2;乳糜尿患者肾脂肪囊内LVD(1.56±0.41)、淋巴管直径[(18.02 ±6.65) μm]及淋巴管面积[(71 648±50 677) μm2]与对照组比较差异无统计学意义(JP＞0.05).组内比较显示乳糜尿组肾脂肪囊内LVD、淋巴管直径及淋巴管面积均显著低于肾动静脉、输尿管上段及肾上腺周围,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 乳糜尿的发病机制与肾动静脉、输尿管上段及肾上腺周围脂肪组织内淋巴管数量和形态学改变有关.通过外科手术结扎上述部位脂肪组织内淋巴管治疗乳糜尿是可行的,但现有手术方式存在结扎范围扩大化的可能.
作者：张银高；王行环；曾俊；罗仪；黄静宇；谭大清 刊期： 2014年第07期
目的 检测胃癌组织中着丝粒蛋白-H(CENP-H)的表达,探讨CENP-H在胃癌组织中表达的临床病理意义.方法 应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测9对新鲜胃癌组织和癌旁非肿瘤黏膜组织CENP-H的mRNA转录和蛋白表达,免疫组织化学染色(IHC)检测166例胃癌组织及对照非肿瘤胃黏膜CENP-H的蛋白表达,结合临床资料分析其与临床病理特征之间的关系.结果 新鲜组织中,胃癌组织CENP-H的蛋白水平(P＜0.05)及mRNA (P＜0.01)均明显高于胃黏膜组织.IHC显示,CENP-H在胃癌组织阳性率为51.2％,而在非肿瘤黏膜中染色阴性.CENP-H表达与肿瘤直径(P＜0.05)、浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)、预后(P＜0.01)明显相关;Log-rank检验表明CENP-H高表达患者5年生存率明显降低(P ＜0.01);Cox回归多因素分析显示,CENP-H(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)是胃癌的独立预后因素.结论 CENP-H在胃癌组织中表达阳性率高,可能是一个促癌基因;在胃癌中,CENP-H高表达提示患者预后不良.
作者：罗喜俊；许峰峰；赖远辉；杨东杰；吴文辉；肖隆斌 刊期： 2014年第07期
免疫抑制剂的有效使用大大提高移植的术后生存率,随着患者移植术后生存时间的延长,长期使用免疫抑制剂的各种不良反应也逐渐显现[1].为减少免疫抑制剂的不良反应,目前主要策略是减小剂量、停用激素等,如何合理的联合应用免疫抑制剂,使免疫抑制方案的整体有效性和安全性达到佳状态,一直是器官移植工作者追求的目标[2].现结合国、内外研究进展阐述各种类型的肝移植术后免疫抑制剂应用策略.
作者：邓永林；沈中阳 刊期： 2014年第07期
非结核分枝杆菌(NTM)是指分枝杆菌属内除结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌.迄今为止,共发现154种NTM和13个亚种,大部分NTM致病菌为条件致病菌[1].至今,已发现海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、亚洲分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌、土分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、布分枝杆菌、嗜血分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、偶然分枝杆菌、龟分枝杆菌及Massiliense分枝杆菌共18种NTM能引起手部感染[2-9],其中海分枝杆菌感染常见,其次为堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌复合群、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌及脓肿分枝杆菌[10].手部NTM病早期(Ⅰ型)以药物治疗为主,中晚期(Ⅱ型及Ⅲ型)应选择药物联合手术清除病灶为主,术前应用药物抗NTM治疗2周,使病灶局限,便于术中将病灶完整切除[3,11-12].
作者：龙航；陈世玖 刊期： 2014年第07期
关节软骨的磨损是临床上常见的疾病,但是软骨缺乏自身修复能力,以间充质干细胞为种子细胞构建软骨组织工程为软骨的修复带来了新希望.与生物化学因素一样,力学因素也影响干细胞的增殖和向软骨细胞的分化,并在维持软骨的形态和功能上起到重要作用.细胞在体内承受着复杂的力学刺激,如压力、静水压力、张力和剪切力等,各种力又有不同的作用大小、频率和持续时间等,从而产生不同的影响.现就力学因素对间充质干细胞成软骨的影响和相关信号传导机制的研究进展做一综述.
作者：范文帅；郭常安 刊期： 2014年第07期
目的 制备丝素蛋白(SF)/重组人骨形成蛋白2 (rhBMP-2)缓释微球并观察其异位成骨活性.方法 冷冻干燥法制备SF/rhBMP-2缓释微球,扫描电镜观察.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定不同时间点rhBMP-2浓度,并计算累积释放量及微球载药率.将SF/rhBMP-2微球及rhBMP-2分别植入24只大鼠大腿肌袋,SF微球为对照.术后1、2、4周行组织学观察.结果 SWrhBMP-2微球呈规则圆形,当SF与交联剂比例为1∶20、5∶20、10∶20,rhBMP-2与SF质量比为0.5 μg∶1 mg时分别为:(835.00 ±97.23)、(715.30±193.80)、(398.70±99.86) nm;rhBMP-2释放符合双相动力学释药规律;其载药率分别为(4.54±0.13)％、(4.55±0.05)％、(4.53±0.08)％,各组差异无统计学意义(P＞0.05).组织形态学见实验组有软骨细胞及成骨细胞形成.结论 SF/rhBMP-2微球可保持rhBMP-2的活性,能延缓rhBMP-2的释放时间,释放具有双相规律,具有持续诱导骨形成的特点.
作者：王春增；陈亮；顾勇；刘彬；杨惠林 刊期： 2014年第07期
目的 建立山羊股骨干骨折模型,对比空心交锁髓内钉和尾丝髓内钉的固定效果.方法 选取40只成年公山羊股骨骨折模型,20只采用空心交锁髓内钉固定(A组),20只采用尾丝髓内钉固定(B组).术后4、8周行X线复查并于骨折愈合后取出内固定,对比分析两组手术数据.结果 两组山羊于术后8周骨折均愈合,B组植入手术时间为(37.9±5.1)min、出血量为(38.0±66.0) ml、术中透视时间为(6.8±3.1)s、取出术时间为(24.4±5.3) min、出血量为(26.3±7.8)ml,各项数据均小于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),尾帽掉落次数差异无统计学意义(P＞0.05).B组1只山羊在植入术后死亡.结论 尾丝髓内钉治疗股骨干骨折的疗效与交锁髓内钉相当,但手术时间短,出血量少,X线暴露少,步骤简便.
作者：孙家元；刘磊；陈伟；张弢；王娟；张英泽 刊期： 2014年第07期
目的 制备基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/骨形成发生蛋白-2(BMP4)壳聚糖缓释体,联合体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨其作为组织工程支架材料修复骨缺损的可行性.方法 体外分离培养兔BMSCs,观察不同代次细胞的生长情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测绘制生长曲线,用流式细胞术检测其干细胞表面标志CD44、CD90的表达,体外诱导成软骨分化,甲苯胺蓝染色鉴定,Transwell法检测SDF-1对兔BMSCs的趋化作用,用冷冻干燥及乳化交联法制备SDF-1/BMP-2壳聚糖缓释体,扫描电镜观察缓释体性状,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其细胞因子缓释作用,接种兔BMSCs,检测缓释体对兔BMSCs增殖及成骨分化的影响,比较成骨相关指标碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原等蛋白的分泌差异.结果 密度梯度离心法联合差速贴壁法可获得高纯度、增殖能力强并具有分化潜能的兔BMSCs,第3代兔BMSCs CD44表达率为(86.3±6.5)％,090表达率为(73.50±4.85)％,SDF-1可趋化兔BMSCs向壳聚糖缓释体迁移,并促进其黏附生长,SDF-1/BMP-2复合壳聚糖支架构成缓释体可促进兔BMSCs成骨及其相关蛋白分泌增加.结论 SDF-1/BMP-2壳聚糖缓释体可作为理想的组织工程骨修复材料.
作者：金捷；周少怀；卞峰；方红育；范明宇；郑剑 刊期： 2014年第07期
目的 探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨分化过程中微小RNA(miRNAs)的表达,并观察过表达miR-90a对BMSCs成软骨分化的影响.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,取第3代BMSCs,在全培养基基础上将其分成两组:实验组加入TGF-β3诱导成软骨分化,对照组不加TGF-β3.在诱导BMSCs向软骨分化第7、14、21天,采用微阵列基因芯片技术分析分化过程中miRNAs的表达,并采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对差异表达的miRNAs进行验证.在实验组的基础上,将成软骨诱导的BMSCs分为两组:实验组转染miR-90a mimics使其过表达,对照组转染mimics-NC,从而验证过表达miR-90a对BMSCs成软骨分化的影响.结果 体外成功分离培养大鼠BMSCs.微阵列基因芯片技术筛选出了BMSCs向软骨分化过程中相对于对照组表达差异在2倍以上的miRNAs共16个,其中表达上调的有9个,表达下调的有7个.采用RT-qPCR方法对表达上调的miR-340和miR-140以及下调的miR-21和miR-132进行验证,结果显示RT-qPCR与微阵列芯片的结果一致,说明本研究芯片结果真实可靠.实验组转染miR-90a mimics使其过表达结果显示,软骨细胞特异性细胞质成分糖胺多糖(GAG)较对照组明显减少.结论 BMSCs向软骨分化过程中有诸多miRNAs参与调节,过表达miR-90a可以明显抑制BMSCs的成软骨过程.
作者：陈松；符培亮；吴海山；许震宇 刊期： 2014年第07期
目的 探讨基于显微-CT (Micro-CT)及三维打印技术制备的仿生人类指骨支架复合脂肪干细胞(ADSCs)及重组人类骨形态蛋白2(rhBMP-2)后在体内的血管化.方法 取大白兔第3代ADSCs复合rhBMP-2接种到仿生指骨支架上混合培养10 d(实验组),和单纯仿生支架(对照组)分别包裹于12条成年比格犬腰背部两侧带蒂深筋膜瓣中,采用自身左右对照,不同时间进行大体、组织学染色观察比较新生血管.结果 两组支架材料在筋膜内均有一定的血管化能力,术后2、4、8、16周苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色均显示实验组相对血管面积百分比和阳性染色的面密度值均优于同一时间的对照组,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仿生人类指骨支架移植体内具备了血管化能力,复合ADSCs-rhBMP-2可以促进血管化程度.
作者：王伟；阿里木江·阿不来提；艾尔肯·热合木吐拉；艾合买提江·玉素甫；马创；袁春晓 刊期： 2014年第07期
目的 观察腺病毒介导血红素加氧酶-1(HO-1)基因对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠分成假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、AdV-rHO-1处理组(C组).A组为对照组,B、C组阻断腹主动脉30 min后,暴露大鼠脊髓分别注入AdV-EGFP、AdV-rHO-1病毒载体.各组于缺血再灌注12h、1、2、3、7d测定后肢神经功能评分、病理学、HO-1、HO-1 mRNA的表达和凋亡细胞.结果 C组后肢神经功能评分(2.83±0.75)在缺血再灌注2d后明显好于B组(1.50±0.55) (P ＜0.01).C组(35.85±6.59)HO-1表达量较A、B组明显增多(P＜0.01),C组(1.83±0.28) HO-1的mRNA表达量较A组和B组明显升高(P＜0.01).结论 腺病毒介导的HO-1基因能有效转染缺血再灌注脊髓组织,对缺血再灌注的脊髓有保护作用.
作者：周立亚；周立文；李明强；叶习红；叶繁；王雪松 刊期： 2014年第07期
目的 对比分析幼猪脊柱侧凸模型与人类早发性脊柱侧凸椎体和椎间盘楔形变特点.方法 测量8例侧凸幼猪和13例早发性脊柱侧凸患儿主弯内椎体和椎间盘楔变角,分别计算所有椎体和椎间盘占Cobb角百分比,并计算顶椎及其上、下各两个椎体和相应4个椎间盘楔变角,统计5个椎体平均楔变率和4个椎间盘分别占顶椎区Cobb角的楔变率.结果 两组主弯Cobb角差异无统计学意义(59.3°比54.7°,P＞0.05),椎体和椎间盘楔变角均从顶椎区向端椎区逐渐减小.两组均以椎体楔变角为主,然而,幼猪侧凸椎体楔变率更大.顶椎区5个椎体平均楔变角在两组中差异无统计学意义(P＞0.05),但动物模型中顶椎区5个椎体所占顶椎区Cobb角比率较人类更大(75.4％比60.2％,P＜0.01).结论 幼猪脊柱侧凸模型与人类儿童脊柱侧凸的楔形变模式不同,在进行类比及矫形技术的应用研究时应特别注意.
作者：郑欣；孙旭；邱勇；刘明岩；王晗；钱邦平 刊期： 2014年第07期
目的 探讨在体外条件下低频电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性.方法 大鼠骨髓间充质于细胞传代至第5代后,采用微团培养法在含成纤维生长因子-2和转化生长因子-β3的培养基中生长,并给予正弦波电磁场(1.0 mT,50 Hz)干预.3周后进行阿利新蓝染色以检测软骨基质生成量,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测软骨特异性蛋白的基因表达水平,并使用二甲基-亚甲蓝(DMMB)染料结合法评估细胞微团中糖胺多糖水平.结果 在电磁场和生长因子的协同作用下,大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞微团向软骨分化,细胞微团中Ⅱ型、X型胶原及蛋白多糖基因表达水平显著增加,而性别决定区Y框蛋白9(SOX9)的表达没有明显变化.与非暴磁组比较,暴磁组细胞糖胺多糖(GAG)/DNA比例较高(3.108±0.341).结论 电磁场促进大鼠BMSCs成软骨分化可能与细胞表达Ⅱ、X型胶原及糖胺多糖增多有关.电磁场在生长因子的协同作用下可诱导及维持间充质干细胞成软骨分化,但单因素电磁场刺激不能诱导大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化.
作者：虞冀哲；杨勇；刘朝旭；宋明宇；刘阳；吴华 刊期： 2014年第07期
目的 探讨黏着斑激酶(FAK)及细胞核增殖抗原(Ki-67)在骨肉瘤组织中的表达及临床意义.方法 免疫组织化学法检测35例骨肉瘤、18例骨样骨瘤和8例反应性新生骨组织中FAK和Ki-67的表达,并结合临床资料进行相关分析.结果 FAK表达的染色积分在骨肉瘤、骨样骨瘤和反应性新生骨组织中分别为5.41±1.27、1.02±0.14和0.32±0.19 (P＜0.05);在EnnekingⅠ、Ⅱ和Ⅲ期患者中分别为2.15±1.01、4.54±2.14和6.83±2.43(P ＜0.01);在年龄小于25岁患者和大于25岁患者中分别为3.75 ±2.13和4.17 ±2.53(P ＞0.05);在男性患者和女性患者中分别为4.35±2.38和4.47±2.62(P＞0.05);在生存期小于2年和大于2年的患者中分别为6.94±2.17和2.65±1.87(P＜0.01).Ki-67标记指数(Ki-67LI)在Enneking Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期患者中分别为8.76±3.68、18.25 ±3.31和25.87±4.36(P ＜0.01);在年龄小于25岁患者和大于25岁患者中分别为10.72±2.35和9.14±2.62 (P＞0.05);在男性患者和女性患者中分别为11.67±4.28和12.15±3.65(P ＞0.05);在生存期小于2年和大于2年的患者中分别为22.84±2.17和12.47±3.68(P ＜0.01).在FAK表达为阳性和阴性的骨肉瘤中,Ki-67LI分别为19.74±3.23和11.63±2.85(P ＜0.05).结论 FAK和Ki-67的表达水平与骨肉瘤的分期和生存期密切相关,FAK与Ki-67之间也密切相关.
作者：徐剑；李凡；刘郁东；李明静；勘武生 刊期： 2014年第07期
目的 观察辛伐他汀对猪脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后热休克蛋白70 (Hsp70)表达的影响.方法 24头健康成年西藏小型猪,雌雄不限,体质量20～30 kg,随机分为假手术组(C组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)和辛伐他汀实验组(Sim组),每组8头.I/R组和Sim组采用胸主动脉、锁骨下动脉阻断法造成脊髓缺血再灌注损伤模型(70 min),分离副半奇静脉,远端结扎,近端插管.I/R组在阻断过程中副半奇静脉逆灌注乳酸林格钠液(860 ml/h,1000 ml),Sim组阻断过程中副半奇静脉逆灌辛伐他汀溶液(0.25 mg/kg,1000 ml),术后口服辛伐他汀片剂80 mg/d,30 d.术后采用Tarlov下肢神经功能评分系统评估6、24、48 h神经运动功能.术后30 d,各组分别处死8头实验猪,迅速取出来L2～L5及骶段脊髓,苏木素-伊红(HE)、Nissle染色观察神经元形态学变化,免疫组织化学法检测Hsp70的表达.结果 Sim组术后24、48 h神经功能评分[(3.2±0.3)、(3.6±0.2)分]高于I/R组[(2.2±0.4)、(2.8±0.4)分],差异有统计学意义(P＜0.05).与I/R组比较,Sim组神经元形态学的损伤较轻,Hsp70表达明显增加,其积分吸光度值为296.8046±3.695 1.结论 辛伐他汀对猪脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能和诱导Hsp70的表达上调有关.
作者：丁皓；申月霞；卢聪；黄焕雷；郭惠明；陈寄梅；庄建；朱平 刊期： 2014年第07期
目的 通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子(AIF)的表达及细胞器定位.方法 体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置人正常环境[杜尔贝科改良型低糖培养基(DMEM/L)培养基、10％胎牛血清、21％ O2]和营养剥夺环境(DMEM无糖培养基、无血清、1％ O2)培养0、24、48、72 h后,采用细胞免疫荧光染色及Western blot 检测AIF蛋白表达水平及细胞器定位,流式细胞仪检测细胞存亡率及线粒体膜电位,酶标仪检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)活性.结果 细胞活性检测显示实验组活细胞比例分别为(82.0±2.4)％、(61.0±3.1)％、(42.0±2.9)％,较对照组的98％明显降低(P＜0.05),实验组细胞凋亡比例分别为(12.0±1.2)％、(32.0±1.6)％、(49.0±2.1)％,与对照组的2％比较明显增高(P＜0.05);线粒体膜电位检测结果显示实验组细胞线粒体膜电位降低,发橙色荧光的细胞比例分别为(80.22±2.31)％、(61.20±1.52)％、(15.01±2.91)％,均显著低于正常对照组[(93.00±3.22)％,P＜0.05];细胞免疫荧光染色及Western blot显示对照组细胞AIF蛋白主要位于线粒体内,而实验组细胞AIF从线粒体释放并转移至细胞核内,同时髓核细胞出现非典型性凋亡;酶标仪检测发现Caspase酶活性无明显变化(P＞0.05).结论 营养剥夺可能通过降低线粒体膜定位,增加其通透性导致AIF释放并转位至细胞核,导致髓核细胞出现非典型性凋亡.
作者：陆焱；刘杰；王建 刊期： 2014年第07期
目的 检测MG-63骨肉瘤细胞Ras相关区域家族1(RASSF1)基因启动子甲基化,并观察5-氮杂胞苷去甲基化对其生物学行为的影响.方法 采用亚硫酸盐测序法(BSP)检测MG-63骨肉瘤细胞RASSF1基因启动子甲基化状态,比较5-氮杂胞苷处理前后RASSF1甲基化状态、基因表达、细胞增殖曲线、细胞周期和凋亡的差异.结果 5-氮杂胞苷处理前RASSF1基因启动子第1～3、第16 CG位点甲基化率为40.0％,第4～15 CG位点甲基化率为60.0％;处理后的MG-63骨肉瘤细胞RASSF1基因启动子第1～16 CG位点甲基化率为0.正常未处理MG-63骨肉瘤细胞RASSF1基因mRNA和蛋白质表达处于低表达状态,5-氮杂胞苷处理后RASSF1基因mRNA和蛋白质表达显著增加,显著高于处理前.5-氮杂胞苷处理后的细胞增殖速度减慢,D1-D8细胞吸光度值显著低于正常未处理的细胞.5-氮杂胞苷处理后的MG-63骨肉瘤细胞Go/G1期和凋亡率显著高于处理前细胞(P＜0.05),S期、G2/M期和增殖指数(PI)显著低于处理前细胞(P＜0.05).结论 MG-63骨肉瘤细胞RASSF1基因启动子处于甲基化和表达抑制状态,5-氮杂胞苷能逆转RASSF1基因启动子甲基化状态,使基因重新表达而抑制细胞增殖并促进其凋亡.
作者：张勇；陶圣祥；刘国狮；刘鸿；肖紫春；刘雷 刊期： 2014年第07期
目的 观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)对C17.2神经干细胞(C17.2NSCs)分化的调控作用.方法 用含目的基因SOCS1的慢病毒体外感染C17.2NSCs,实验分3组:SOCS1组、空载体组、磷酸盐缓冲液(PBS)组.采用光镜观察3组细胞的形态变化;采用细胞免疫荧光染色、Western blot、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察3组细胞中巢蛋白(Nestin)、微管相关蛋白Ⅱ(MAP2)、β-微管相关蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)、人髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 SOCS1组中Nestin表达较其他两组减少,而MAP2表达较其他两组增加(Nestin:0.234±0.008、0.925±0.040、1.000±0.039; MAP2:2.598±0.067、0.890±0.038、1.000±0.032,P ＜0.01);SOCS1组中部分C17.2NSCs的形态向神经元演变且该部分细胞均表达β-tubulinⅢ;SOCS1组中β-tubulinⅢ阳性染色细胞数所占比例高于其他两组(SOCS1组:10.05％,空载体组:0.71％,PBS组:0.65％,P＜0.01);SOCS1组中β-tubulinⅢ蛋白表达量较其他两组增加(3-tubulinⅢ:3.028±0.121、0.978±0.254、1.000±0.042,P＜0.01).结论 SOCS1能够调控C17.2NSCs向神经元分化.
作者：崔猛；戴斌；冯世庆；辛景义 刊期： 2014年第07期
目的 观察脊髓缺血性损伤是否激活小泛素化调节因子(SUMO)以及SUMO结合蛋白在缺血刺激后的亚细胞定位.方法 制备小鼠脊髓缺血模型,用Western blot法检验脊髓缺血性损伤引起的应激反应,再分别用Western blot和免疫荧光染色法观察缺血脊髓节段中SUMO结合蛋白的表达和亚细胞定位.结果 在脊髓缺血性损伤模型中,应激反应被激活,真核细胞起始因子2(eIF2)、细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平明显增高.夹闭8、10、12 min组小鼠损伤脊髓节段内SUMO1的表达量分别是对照脊髓节段的(1.15±0.09)、(1.24±0.13)、(1.01 +0.99)倍,差异无统计学意义(P＞0.05),SUMO2/3分别是对照脊髓节段的(5.87±0.31)、(5.40±0.36)、(4.31±0.28)倍,差异有统计学意义(P＜0.01).免疫荧光染色结果显示损伤脊髓节段SUMO2/3结合蛋白增多并发生明显的核聚集.结论 SUMO2/3在脊髓缺血性损伤的应激反应中起到重要的作用,可能是内源性神经保护途径的关键分子.
作者：王正锋；王瑞华；刘献志；翟广；张水军 刊期： 2014年第07期
目的 观察Toll样受体(TLR)不同亚型对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨的影响.方法 分离纯化SD大鼠BMSCs,传代扩增.免疫荧光分析检测CD44、CD105、波动蛋白(Vimentin),流式细胞术检测CD34、CD14、CD29、CD95、CD44和人白细胞抗原(HLA)-Ⅰ等标志物.将第3代细胞,随机分为空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组.后两组分别以聚肌胞苷酸Poly(I∶C),1 mg/L)和脂多糖(LPS,10 μg/L)激活.成骨诱导培养液培养.Western blot法检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)和骨钙素(Osteocalcin)的表达,并定量分析.在培养的第10、14天进行碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色.结果 全骨髓培养法提取到BMSCs,免疫荧光显示CD44、CD105、Vimentin阳性.流式细胞术显示CD29、CD95、CD44、HLA-Ⅰ阳性,CD14、CD34阴性.Collagen-Ⅰ和Osteocalcin的蛋白表达量依次为,TLR-4激活组＞TLR-3激活组＞空白组.3组ALP染色及茜素红染色均呈阳性,TLR-3激活组染色程度强,空白组和TLR-4染色程度无明显差异.结论 TLR-3和TLR-4均能促进大鼠BMSC向成骨细胞(OB)分化.TLR-4作用更明显.在OB矿化过程中,TLR-3起促进作用,TLR-4则起抑制作用.
作者：徐晓峰；王晓光；陈奇；张志坚；胡浪 刊期： 2014年第07期
目的 探讨雌雄大鼠脊髓损伤(SCI)后神经功能恢复的差异性和可能原因.方法 健康SPF级SD大鼠雌雄各30只,按性别分为两组:雄性大鼠组(A组)和雌性大鼠组(B组);改良Allen法在胸7节段平面制作SCI模型.于术后1、2、3、4、7d各组随机处死大鼠2只取损伤处脊髓检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)和细胞凋亡,术后1d和1、2、3、4周采用改良大鼠胸段脊髓损伤后功能评判标准(BBB评分法)对大鼠进行行为学检查评分,同时各组随机处死1只大鼠取损伤处脊髓冰冻切片,苏木素-伊红(HE)染色显微镜下观察组织结构变化.结果 (1)BBB评分:脊髓损伤后2～4周时,两组大鼠的后肢功能均出现部分恢复,至第4周,B组评分:(8.250±1.658)分,A组为:(5.580±1.443)分,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)SOD活性变化:脊髓损伤2d时SOD活性低,A组:(24.073 ±3.220) U/ml,B组:(42.663±3.940) U/ml;随后均逐渐升高,至7d时,A组SOD活性:(93.556 ±7.138) U/ml,B组:(106.833±5.878) U/ml,在1周内A组均低于B组(P＜0.01).(3)MDA含量变化:脊髓损伤2d内两组MDA含量差异无统计学意义,至第3、4和7天时,A组MDA含量为(28.822±2.804)、(25.106±1.911)、(15.163±3.075) μmol/L;B组分别为:(24.224±2.627)、(18.377±2.416)、(10.959±2.780) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)细胞凋亡:在脊髓损伤3d时达高峰,A组:(187.83±18.30)个/视野,B组:(160.67±8.34)个/视野;至7d时,A组:(84.00±10.96)个/视野,B组:(56.00±7.43)个/视野;在3、4、7d时A组细胞凋亡数明显高于B组(P＜0.01).(5)病理切片观察,损伤脊髓组织的炎症浸润、空洞形成、白质留存、瘢痕形成等方面差异有统计学意义(P＜0.05),B组优于A组.结论 雌性大鼠SCI后运动功能的恢复优于雄性大鼠;其原因可能是雌性大鼠体内相对高水平的雌激素存在,通过抗氧化作用和抑制细胞凋亡,减轻了继发性损伤.
作者：卜志勇；郑玲；李安军；涂圣旭；施永彦 刊期： 2014年第07期
目的 观察中胚叶特异性转录子(MEST)在鼠成骨细胞中的表达对细胞迁移及增殖能力的影响.方法 取鼠成骨细胞进行培养,利用siRNA干扰片段下调MEST在成骨细胞中的表达,采用Transwell实验检测细胞的迁移能力,细胞计数试剂盒(CCK-8)法及常用增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)检测细胞的增殖能力.结果 MEST表达下调后,成骨细胞的迁移数目为(10.0±1.9)个,明显低于空载组[(23.5±2.1)个]及空白对照组[(25.2±1.8)个],差异有统计学意义(P＜0.05);同时,CCK-8实验表明成骨细胞的增殖能力明显减弱,Ki-67表达明显降低.结论 MEST表达对成骨细胞具有促迁移和增殖的作用.
作者：王军；周忠水；翟贵亮；师大雷；王延国；马珂 刊期： 2014年第07期
目的 利用AdMax包装系统构建性别决定区Y框蛋白9(SOX9)基因重组腺病毒载体并对其进行鉴定.方法 应用聚合酶链反应(PCR)对SOX9基因进行扩增,重组入线性化的pAV-MCMV-绿色荧光蛋白(GFP)-FLAG,后转化人DH5a感受态细胞,得到的转化子用菌落PCR进行鉴定,鉴定无误后,通过AdMax腺病毒包装系统转染HEK293细胞,并在其中包装成熟、扩增.用Western blot法对SOX9基因重组腺病毒进行检测,并把获得的病毒DNA进行PCR鉴定和滴度测定.结果 获得的病毒DNA进行PCR鉴定,得到1 565 bp的片段,大小与SOX9基因相一致,证实SOX9基因片段已经重组进入腺病毒.Western blot检测中,在72×103～95×103间可见大小与SOX9-GFP-Flag的融合蛋白(86×103)相吻合的阳性条带,病毒滴度为2.3×1011 PFU/ml,表明SOX9蛋白成功表达.结论 成功建立安全、稳定、有效的SOX9基因重组腺病毒载体.
作者：王珏；邱如标；刘宏建；王义生 刊期： 2014年第07期
目的 利用维甲酸灌胃孕鼠诱导的大鼠子鼠脊髓脊膜膨出动物模型,建立一种动物实验方法,观察壳聚糖明胶薄膜在修补子鼠脊髓脊膜膨出的效果.方法 利用维甲酸灌胃孕SD大鼠获得脊髓脊膜膨出的子鼠动物模型,在孕中期(孕18d)利用经腹经子宫开放手术,以壳聚糖明胶薄膜作为组织工程材料修补脊髓脊膜膨出皮肤缺损.在孕21 d取胎,观察手术成功率,并以未经手术修补的子鼠为对照,观察组织病理学改变.结果 通过建立动物模型,用44只可利用的子鼠顺利进行了28例修补,修补后存活13只,其中获得了10只修补满意的子鼠.观察到了修补手术后局部的组织改变.以未经修补的子鼠为对照,通过测定免疫组织化学染色切片中的吸光度值,发现神经微管蛋白-β-Ⅲ在子鼠膀胱表达显著高于对照组,且和普通子鼠比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 壳聚糖-明胶薄膜作为组织工程材料可应用在该手术模型中,对脊髓脊膜膨出子鼠膀胱神经发育有改善作用.
作者：汤梁峰；钟海军；沈剑；陈宏；毕允力 刊期： 2014年第07期
目的 观察聚乙烯亚胺作为载体介导骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染脂肪干细胞(ADSCs)的基因表达,探讨转染后细胞的成骨分化效果.方法 取成年日本大耳白兔的颈部脂肪10 g,经体外分离培养的方法获得ADSCs,并对其进行表型鉴定,用相对分子质量为13×103的聚乙烯亚胺介导BMP@基因转染至ADSCs,G418筛选获得阳性细胞克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMP-2mRNA表达,酶联免疫吸附试验(EHSA)法检测BMP@蛋白表达分泌,Westem blm法检测骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白的含量,碱性磷酸酶定量检测,并行茜素红染色,未转染组作对照.结果 从兔脂肪组织中分离出来的第3、6代ADSCs均高表达CD29、CD44,阳性率超过90％;低表达CD34、CD45,阳性率不超过5％;转染细胞有BMP@mRNA的转录及其蛋白的表达,碱性磷酸酶、骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白的含量增加,茜素红染色呈阳性反应,对照组呈阴性.结论 聚乙烯亚胺可介导BMP@基因转染兔ADSCs,BMP@基因在ADSCs中有效表达并诱导其定向成骨分化.
作者：王清富；陈庄洪；蔡贤华；王华松；何国超；林冠林 刊期： 2014年第07期
目的 利用三维有限元评价前路特殊塑形钛板加方形区螺钉联合后柱拉力螺钉内固定治疗累及方形区的复杂髋臼骨折的生物力学稳定性.方法 按Letournel分型,建立“T”形(Ⅰ)、前柱+后半横(Ⅱ)及双柱骨折(Ⅲ)模型.再分别模拟双柱钛板内固定(A)、单纯前路特殊塑形钛板加方形区螺钉内固定(B)及前路特殊塑形钛板加方形区螺钉联合后柱拉力螺钉内固定(C)治疗此3种骨折并模拟站立位时,在正常载荷下对3种内固定方式进行生物力学稳定性比较.结果 在各种骨折模型上,3种内固定与正常模型比较,骨折线上各节点的平均位移为C＜B＜正常模型＜A,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 前路特殊塑形钛板加方形区螺钉联合后柱拉力螺钉内固定治疗累及方形区的复杂髋臼骨折具有良好生物力学稳定性.
作者：黄进成；刘曦明；蔡贤华；王志华；雷建银 刊期： 2014年第07期
目的 探讨国人骨形态发生蛋白4(BMP4)基因编码区单核苷酸多态性(SNPs)位点与颈椎后纵韧带骨化(OPLL)的遗传易感性和骨化程度的关系.方法 临床收集OPLL病例420例,对照组506例,采用直接测序法对目的基因片段进行序列分析,进而对BMP-2基因编码区SNPs位点进行分型,比较不同基因型和等位基因的分布差异.结果 BMP-2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)的TT、TG、GG基因型分别为752例(81％)、174例(19％)、0例,基因型分布在病例组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.01),TG基因型与OPL的发生有关.外显子3上的Arg190Ser (A/T)的AA、AT、TT基因型分别为228例(24％)、464例(50％)、234例(26％),基因型分布在病例组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.01),AT基因型与OPLL的发生有关.对OPLL患者外显子2上的Ser87Ser(A/G)基因型分析发现,GG基因型的OPLL患者其骨化椎体的数量明显多于AG和AA基因型(P＜0.05),表明G等位基因能够加重OPL患者的严重程度,A等位基因能够限制OPLL患者异位骨化的发生.结论 BMP-2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)和外显子3上的Arg190Ser(A/T)多态性与OPLL的发生相关.BMP-2基因外显子2上的Ser87Ser (A/G)基因型与OPLL的严重程度有关.BMP4是OPLL的易感基因.
作者：闫亮；贺宝荣；刘团江；郭华；昌震；许正伟；郝定均 刊期： 2014年第07期
目的 通过模拟颈椎间盘突出合并黄韧带病变所致的急性颈脊髓损伤,观察颈脊髓受压时前后方压应力的变化趋势,探讨前后方压应力与致压深度的关系.方法 采用10具新鲜成人尸体颈脊柱标本(C1 ～T1),通过前后方C4 ～ C5间骨窗伸入两根半球形测压杆,模拟颈椎间盘退变突出合并黄韧带病变时对颈脊髓前后方所形成的压迫.实验对颈脊髓前后方同时致压,致压深度大和为椎管矢状径的60％,逐渐增加致压深度,分别测量不同致压深度下,颈脊髓脊膜前后方所受压应力的变化.结果 (1)前方致压深度一定,后方致压深度逐渐增加时,颈脊膜前方压应力无明显变化;颈脊膜后方压应力明显增大,其中致压深度为椎管中矢径的10％ ～ 20％时各相邻致压深度间颈脊髓后方压应力两两比较差异无统计学意义(P＞0.05);致压深度为椎管中矢径的30％～60％时各相邻致压深度间颈脊髓脊膜后方压应力两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)后方致压深度一定,前方致压深度依次递增时,颈脊膜前方压应力明显增大,其中致压深度为椎管中矢径的10％～20％时各相邻致压深度间颈脊髓后方压应力两两比较差异无统计学意义(P＞0.05);致压深度为椎管中矢径的30％ ～ 60％时各相邻致压深度间颈脊髓脊膜后方压应力两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);颈脊膜后方压应力无明显变化.结论 颈脊髓脊膜前、后方所受压应力与致压深度呈非线性关系,所受压应力随致压深度增加而增大,前方或后方致压深度超过椎管中矢径的30％临界值后差异有统计学意义.
作者：赵晓峰；赵斌；赵轶波；陈祺；王玲 刊期： 2014年第07期
目的 观察早期骨关节炎(OA)软骨细胞中微小RNA(miRNA)-34a以及凋亡细胞的变化,并应用miRNA-34a的抑制剂锁核苷酸(LNA-miRNA-34a)观察miRNA-34a沉默对软骨细胞miRNA-34a的表达和凋亡的影响.方法 建立6周兔早期OA模型,并分别获得正常(A组)、3周(B组)和6周(C组)软骨细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学等技术分析软骨细胞中miRNA-34a以及Ⅱ型胶原(Col2a1)、诱导型—氧化氮合酶(iNOS)的表达及其规律,同时采用原位末端转移酶标记染色法(TUNEL)观察细胞凋亡.转染LNA-miRNA-34a后再用同样方法获得上述各项结果并进行比较分析.结果 B组和C组软骨细胞中miRNA-34a的表达水平分别是A组的2.70倍和3.05倍;在转染LNA-miRNA-34a后,B组和C组miRNA-34a的表达降低了2.07倍和3.03倍.转染前,B组和C组iNOS的表达与A组比较分别增加了13.50倍和16.70倍,转染后B组和C组中iNOS表达与转染前比较分别降低了41.00％和37.00％;转染前B组和C组Col2a1的表达水平和A组比较,分别降低了46.80％和30.00％;转染后,Col2a1的表达和转染前比较,B组增加了2.00倍,而C组增加2.95倍;免疫组织化学染色结果显示,转染后B组和C组Col2a1阳性细胞增多,阳性染色增强,甲苯胺蓝和TUNEL染色显示凋亡细胞数显著减少.结论 早期OA软骨细胞miRNA-34a表达增加,LNA-miRNA-34a沉默miRNA-34a基因可以显著减少早期OA软骨细胞的凋亡.
作者：周新华；王敏；刘超；张瑗；罗嘉全；邹学农 刊期： 2014年第07期
目的 观察锶离子(Sr2+)对钛颗粒(Ti)诱导破骨细胞(OC)活化的影响.方法 实验分为5组,即空白组、Ti组、核因子受体活化因子配体(RANKL)组、R+Ti组、Sr2+组.采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测0.1 g/L Ti和不同浓度Sr2+(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mmol/L)处理小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7细胞24、48、72 h后增殖活性;以0.1 g/L Ti和/或70 μg/L RANKL和/或不同浓度Sr2+诱导RAW264.7细胞,培养5d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测成熟OC数量;以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织蛋白酶K(Cath-K)、TRAP、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)和降钙素受体(CTR) mRNA含量;Westem blot法检测κB抑制蛋白α(IκBα)表达水平.结果 CCK-8结果,0.1 g/L Ti和不同浓度Sr2+ (0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mmol/L)对RAW264.7细胞增殖能力无影响.TRAP染色,R、R+Ti组均可见大量的紫红色多核细胞;Ti组和Sr2+组多核细胞较少;Sr2+≥5 mmol/L时,TRAP阳性细胞数量[(323.33 ±43.84)、(146.67±33.99)个/孔],与R组[(453.33±33.99)个/孔]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,Sr2+组Cath-K、TRAP、MMP-9和CTR mRNA的相对表达量分别为2.76±0.66、2.69±0.57、2.10±0.34和1.72±0.32,与R+Ti组比较(7.97±0.77、10.10±1.18、7.37±1.02和5.55±0.53),差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示Ti能抑制IκBα的表达,Sr2+加入后Ti的抑制效应不明显.结论 Sr2+能有效地抑制Ti诱导的OC活化.
作者：朱世军；徐耀增；崔京福；邵洪国；朱锋；耿德春 刊期： 2014年第07期
目的 基因敲入技术建立成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)功能持续增强小鼠模型(FGFR2S252W/+),观察p38信号通路在FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响.方法 获取出生后6周小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行体外培养并进行成软骨诱导.Western blot检测pβ8信号蛋白,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较野生型及突变型Ⅱ型胶原(Col2)、X型胶原(Col10)、OC、OP基因表达,加入p38信号通路阻滞剂SB203580后再次比较相关基因表达.体外胚胎骨培养观察pβ8信号通路在FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响.结果 体外BMSCs成软骨诱导后,FGFR2功能突变小鼠BMSCs表达p38蛋白磷酸化增强,表达Col2、Col10减弱,但OC、OP基因表达强于野生型;加入p38信号通路阻滞剂SB203580后,BMSCs基因表达量明显增高,表达Col2、Col10为原来1.30±0.07、1.94±0.13,表达OC、OP为原来1.97±0.17、1.50±0.10.胚胎骨体外培养可见SB203580治疗能纠正软骨内成骨发育障碍,使胫骨的总长度及钙化组织长度明显增长.结论 FGFR2下游p38信号通路对软骨内成骨过程影响巨大,其信号通路阻滞剂对软骨内成骨发育障碍有救治作用.
作者：陈鹏；张凡喜；周玉峰；张波 刊期： 2014年第07期
目的 观察不同剂量的埃索美拉唑在不同时间点对雄性SD大鼠骨密度及骨代谢的影响.方法 将24只3个月龄雄性SD大鼠按体质量随机分为对照组(给予赋形剂)、小剂量组[按10 mg/(kg·d)的剂量给予埃索美拉唑]和大剂量组[按50 mg/(kg·d)的剂量给予埃索美拉唑].第0、8、14周时,检测每只大鼠全身骨密度及血清中骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和钙的浓度.处死大鼠后用组织形态学方法评估大鼠股骨结构改变.结果 与对照组比较,大剂量组中大鼠体质量增长明显受抑制(P＜0.05),第14周时骨密度明显降低,血清中骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和钙的浓度明显升高,分别为(198.51±6.98)、(1.49±0.04) U/L、(2.44±0.05) mmol/L,而第8周时3组间差异无统计学意义(P＞0.05).组织形态学显示14周时3组间的股骨结构差异明显,大剂量组空骨陷窝率明显高于对照组和小剂量组(P＞0.05).结论 大剂量应用埃索美拉唑导致雄性大鼠骨密度降低并影响其骨代谢,这种效应还存在一定的时间依赖性.
作者：许圆；周晓中；钱鸣杰；唐文 刊期： 2014年第07期
细胞黏附是细胞周期调控、形态发生、细胞分化和再生过程等多种生物学行为的基础.细胞黏附过程有众多细胞黏附分子(CAMs)参与,CAMs是一类调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互结合和起黏附作用的糖蛋白分子,存在于细胞膜表面.细胞黏附分子在机体胚胎的发育分化、正常组织结构的维持、免疫调节、炎性反应、组织修复及肿瘤侵袭、转移生长等病理生理过程中均起着重要作用.细胞黏附分子按其分子结构不同可分为如下几类:免疫球蛋白超家族(IGSF)、选择素家族、整合素家族、钙黏附素家族、血管附着素家族以及其他尚未分类的家族.
作者：郑启新；吴斌；郭晓东 刊期： 2014年第07期
